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姚芳: 作品数：11 被引量：38H指数：3; 供职机构：南方医科大学南方医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划广东省“211工程”项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>

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5-氟尿嘧啶对EdU方法检测细胞增殖准确性的影响被引量：3: 2014年; 目的探讨EdU方法检测细胞增殖的准确性及其禁用药物。方法将对数生长期的LoVo细胞同时传代于60 mm培养皿中,放入37℃、5%CO2的培养箱中过夜,待其贴壁后更换加药的培养基,分为如下4组:对照组:未加任何药物处理;5-氟尿嘧啶(5-Fu)组:加入5-Fu 10 mg/L;Q50组:加入槲皮素浓度为50μmol/L;联合用药组:同时加入10 mg/L 5-Fu与50μmol/L槲皮素。作用48 h后,分别用EdU和MTT两种方法检测不同组中LoVo细胞的增殖率。结果 48 h后,对照组、5-Fu组、Q50组及联合用药组的增殖抑制率,MTT法检测结果依次为(0.00±0.00)%、(49.62±1.30)%、(25.09±3.17)%、(62.25±5.82)%,差异有统计学意义(P<0.05),EdU增殖检测结果依次为(52.45±6.69)%、(85.22±9.33)%、(29.52±6.10)%、(22.40±5.26)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EdU与MTT两种方法都能应用于细胞增殖的检测,EdU检测方法简单、准确。但EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,对于一些通过抑制胸腺嘧啶生成发挥作用的药物,实验结果不准确,不宜采用此种方法进行检测。; 王惠丽陈志江姚芳胡子有吴炳义; 关键词：EDU MTT 细胞增殖

同种异体移植物炎症因子-1在结直肠癌细胞增殖、迁移及凋亡中的作用被引量：11: 2018年; 目的探讨同种异体移植物炎症因子-1(AIF-1)在结直肠癌(CRC)进展中的作用以及可能的作用机制。方法采用免疫组织化学染色和Western blot的方法检测70例CRC患者癌组织及癌旁正常组织中AIF-1的表达水平,并分析AIF-1的表达与临床病理特征的相关性。然后将AIF-1过表达质粒(AIF-1)和阴性对照质粒(NC)转染至CRC细胞株SW480,探讨AIF-1在体外细胞中的功能。Ed U增殖实验和流式细胞术用来评估细胞增殖和细胞周期;Transwell迁移实验和Annexin V-APC/7-AAD凋亡检测试剂盒用来分析细胞迁移和凋亡;SB203580用来阻断p38 MAPK通路。最后用western blot的方法检测CDK4,Cyclin D1,P21,P27,MMP2,MMP9,Bax,Bcl-2,Bcl-xl,p38和p-p38的表达水平。结果 AIF-1在结直肠癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织,其表达水平与淋巴结转移(P=0.008),TNM分期(P=0.003)和肿瘤大小(P=0.023)密切相关。体外增殖和周期实验结果显示,过表达AIF-1于SW480细胞后能降低Ed U细胞阳性率以及阻滞细胞的G1期(P<0.05);且Western blot结果显示过表达AIF-1于SW480细胞后能抑制CDK4、Cyclin D1的蛋白表达,增强P21、P27的蛋白表达。Transwell迁移结果显示过表达AIF-1能抑制SW480细胞的迁移(P<0.001),伴随着MMP2和MMP9的蛋白水平的下调。此外,AIF-1过表达能诱导SW480细胞凋亡(P<0.01),增强Bax和p-p38的蛋白水平,减弱Bcl-2和Bcl-xl的蛋白水平,而利用SB203580可以明显改善AIF-1过表达引起的凋亡。结论 AIF-1通过抑制细胞增殖和细胞迁移以及诱导细胞凋亡在结直肠癌中发挥肿瘤抑制作用,且AIF-1通过激活p38MAPK途径促进细胞凋亡。; 艾晓兰姚芳王晓睛段东北李科胡子有殷果王梅吴炳义; 关键词：结肠直肠癌增殖迁移凋亡

TaqMan探针法荧光定量PCR检测脑脊液细菌方法的建立及应用被引量：7: 2011年; 目的建立TaqMan探针法荧光定量PCR检测方法，用于脑脊液标本细菌的快速检测。方法针对细菌的16srRNA基因，设计合成细茼的通用引物和革兰阳性菌、革兰阴性菌分型探针，通过构建质粒和制作脑脊液模拟标本来研究引物和探针的检测特异度和敏感度。结果两种革兰分型探针只对相应的细菌可以检测到荧光信号，乙肝病毒DNA、白色念珠菌及人基因组DNA检测结果均为阴性，此方法最低可以检测到10个拷贝的质粒DNA以及100CFU／ml的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌。结论TaqMan探针法荧光定量PCR检测细菌的特异度和敏感度高，检测快速，对脑脊液细菌的早期诊断有重要意义。; 韩慧胡子有姚芳吴炳义; 关键词：TAQMAN探针荧光定量PCR 脑脊液细菌

酒精能够减少斑马鱼胚胎的神经前体细胞并抑制其神经元和神经胶质细胞的分化（英文）被引量：1: 2014年; 目的研究不同浓度的酒精对斑马鱼的神经前体细胞、神经元和神经胶质细胞的影响。方法在斑马鱼卵受精后5 h,在斑马鱼培养液中加1%、2%或2.5%的酒精。采用原位杂交和实时定量PCR的方法检测不同细胞的mRNA水平的变化,以反映酒精对斑马鱼胚胎神经发育的影响。结果不同浓度酒精处理后,斑马鱼胚胎神经前体细胞和神经元显著减少,并且随着酒精浓度的增加其数量减少更加显著。早期的神经胶质细胞标志物的表达随着酒精浓度的增加在尾部减少,而在头部增加。成熟的神经胶质细胞标志物表达随着酒精浓度的增加而显著减少。结论酒精可以导致斑马鱼胚胎神经前体细胞、神经元和胶质细胞数量减少,并抑制神经元和神经胶质细胞的分化。; 殷果姚芳陈小辉王楠王惠丽常红恩苑召虎吴炳义; 关键词：酒精斑马鱼神经前体细胞神经胶质细胞

槲皮素诱导U87细胞凋亡及对MDM2-p53负反馈调节的影响被引量：2: 2014年; 目的探讨槲皮素对人脑胶质瘤U87细胞凋亡及MDM2-p53负反馈调节的影响。方法以不同浓度槲皮素(50、100、150μmol/L)处理U87细胞,分别采用流式细胞术、RT-PCR及Western blotting技术检测槲皮素对U87细胞凋亡的影响、MDM2mRNA及p53、caspase-3蛋白的表达。结果槲皮素处理U87细胞48 h后,流式细胞术结果显示细胞凋亡率:Q50组为(22.53±0.72)%,Q100组为(29.06±0.81)%,Q150组为(31.5±0.45)%,明显高于对照组(12.40±0.70)%(P<0.05)。随着槲皮素浓度的升高,泛素连接酶MDM2 mRNA表达量升高,在蛋白水平发现,槲皮素处理后,caspase-3凋亡蛋白表达增加,p53蛋白的表达降低。结论槲皮素可以促进人脑胶质瘤U87细胞凋亡,通过凋亡蛋白caspase-3发挥作用,并且在凋亡过程中可以发生MDM2-p53的负反馈调节。; 王惠丽苑召虎陈志江姚芳胡子有吴炳义; 关键词：槲皮素 U87 凋亡 MDM2-P53

槲皮素调节葡萄糖氧剥夺损伤的星形胶质细胞细胞周期基因的表达: 2013年; 目的研究槲皮素对葡萄糖氧剥夺损伤星形胶质细胞基因表达的影响及作用机制。方法将原代培养成熟的星形胶质细胞分为单纯葡萄糖氧剥夺组和葡萄糖氧剥夺联合槲皮素处理组(槲皮素处理组),用基因芯片筛查缺血缺氧4 h后的槲皮素处理对星形胶质细胞基因表达变化的影响,并用实时定量PCR(qRT-PCR)对差异表达基因进行了验证。结果与单纯葡萄糖氧剥夺组相比,槲皮素处理组基因表达谱芯片筛查出的31个基因与细胞周期及其相关调控密切相关,其中上调基因为5个,下调基因26个。用qRT-PCR对其中6个基因进行了验证,检测结果和基因芯片分析结果一致。结论槲皮素能调控葡萄糖氧剥夺损伤的星形胶质细胞细胞周期相关基因的表达。; 姚芳张兰兰苑召虎曾勇吴炳义; 关键词：星形胶质细胞槲皮素基因芯片 REAL-TIME 细胞周期

环介导等温扩增技术检测粪便幽门螺杆菌方法的建立及应用被引量：7: 2011年; 目的:建立一种快速、简单的检测粪便幽门螺杆菌的环介导等温扩增方法(loop-medi atedisotherma lamplification,LAMP)。方法:针对幽门螺杆菌的16SrRNA基因设计4条特异性引物(2条内引物和2条外引物),优化反应条件后,对方法的敏感性、特异性进行评估,并评估检测粪便模拟标本的敏感性。结果:使用LAMP方法可以在2h内得到检测结果,加入染料后阳性结果为绿色,电泳后有明显的阶梯状条带。幽门螺杆菌的基因组DNA检测敏感性为12pg,是普通PCR的10倍,对模拟粪便标本进行检测,检测限为102CFU/mL。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌的检测结果均为阴性。结论:本研究建立的检测幽门螺杆菌的LAMP方法敏感性高、特异性强,操作简单,不需要特殊设备,是一种很有前景的检测方法。; 韩慧胡子有姚芳曾勇吴炳义熊婧; 关键词：螺杆菌环介导等温扩增技术

槲皮素对星形胶质细胞增殖及细胞周期相关蛋白cdc25A的影响: 2013年; 目的通过体外星形胶质细胞的划痕模型,观察槲皮素对星形胶质细胞增殖和其细胞周期的影响,并探究可能的信号通路,分析cdc25A的表达变化。方法经划痕处理过的原代培养的新生SD大鼠的星形胶质细胞用槲皮素处理后,将其放入37℃5%CO2孵箱中进行培养。分别通过Click-iT Edu test,流式细胞术和Western Blotting检测槲皮素对其增殖、细胞周期的影响及细胞周期相关蛋白cdc25A表达的变化。结果与对照组相比,在第24h时就能明显观察到槲皮素抑制划痕的愈合;槲皮素处理24h后,其增殖细胞百分比从20.92%降低到2.74%,G1期星形胶质细胞百分比从82.04%增加到92.06%,其S和G2期有一个相应的减少;50μmol/L槲皮素处理24h以后细胞周期相关蛋白cdc25A的表达强度下调约50%,具有明显的统计学差异(F=40.579,P<0.01)。结论通过划痕模型的研究发现,槲皮素可以通过抑制星形胶质细胞的增殖来抑制划痕的愈合,并通过降低细胞周期相关蛋白cdc25A的表达将其阻断在G1期。; 苑召虎胡子有姚芳张兰兰颜晓慧李科曾勇吴炳义; 关键词：星形胶质细胞槲皮素细胞周期 CDC25A

槲皮素对缺血缺氧损伤星形胶质细胞基因表达的影响被引量：2: 2011年; 目的应用高密度寡核苷酸（Oligo）基因芯片技术研究槲皮素对缺血缺氧损伤的星形胶质细胞基因表达的影响。方法体外原代培养星形胶质细胞分为缺血缺氧组和缺血缺氧＋槲皮素处理组。2组细胞厌氧培养4h后缺血缺氧＋槲皮素处理组加入含50μmol／L槲皮素的培养液，缺血缺氧组加入等量培养液，培养24h后应用基因表达谱芯片筛选2组细胞表达差异的基因并用实时荧光定量PCR检测进行验证。结果基因表达谱芯片分析显示缺血缺氧＋槲皮素处理组与缺血缺氧组比较表达差异的基因共180个，其中上调基因49个，下调基因131个：实时荧光定量PCR结果显示缺血缺氧＋槲皮素处理组细胞与缺血缺氧组比较148个基因的表达发生变化．差异均有统计学意义（P〈0．05），其中上调基因34个，下调基因114个。实时荧光定量PCR与基因表达谱芯片结果的符合率为82．2％（148／180）。结论基因表达谱芯片分析有助于从分子水平全面了解槲皮素对缺血缺氧的星形胶质细胞的作用机制，也为进一步研究槲皮素和星形胶质细胞在缺血缺氧脑损伤中的作用奠定了基础。; 姚芳胡子有颜晓慧韩慧吴炳义; 关键词：槲皮素星形胶质细胞

n-3多不饱和脂肪酸对坏死性小肠结肠炎保护作用的机制研究被引量：2: 2021年; 目的探讨n-3多不饱和脂肪酸对坏死性小肠结肠炎(NEC)保护作用的机制。方法将30只3日龄的C57BL/6J乳鼠随机分成DF组、NEC组及n-3补充组(n=10)。观察每组小鼠NEC发生情况与严重程度;组织学检测乳鼠肠道组织损伤情况;采用ELISA检测乳鼠肠组织IL-1β和TNF-α的分泌水平;利用qRT-PCR与Western Blotting方法检测ZO-1、claudin-4和claudin-7基因及蛋白的表达;采用CaCo2细胞株构建肠上皮细胞炎症模型,检测DHA对紧密连接蛋白表达水平的影响。结果与DF组相比,NEC组体重显著降低,而饲喂n-3多不饱和脂肪酸可显著缓解体重下降。与DF组相比,NEC组肠组织损伤严重,而n-3补充组较NEC组损伤程度显著减轻。与DF组相比,NEC组炎症因子水平显著上升,而n-3补充组较NEC组炎症因子水平下降显著。与DF组相比,NEC组乳鼠肠组织中ZO-1、claudin-4和claudin-7蛋白表达水平显著下降,而n-3多不饱和脂肪酸能促进紧密连接相关蛋白的表达。在CaCo2细胞炎症模型中,DHA能促进ZO-1、claudin-4和claudin-7蛋白的表达,并能维持紧密连接蛋白的正确分布。结论n-3多不饱和脂肪酸通过维持肠上皮细胞紧密连接减轻坏死性小肠结肠炎的发生发展。; 姚芳王晓睛李松霖郑梦如梁锦霞谢芳; 关键词：N-3多不饱和脂肪酸坏死性小肠结肠炎肠道屏障

姚芳

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