姚璎
- 作品数：7 被引量：3H指数：1
- 供职机构：上海交通大学更多>>
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- 亮氨酰tRNA合成酶作为抗肿瘤的潜在靶点
- 由于肿瘤类型的复杂性和多样性以及肿瘤对单一靶点药物的抗药性,目前化疗药物所针对的靶点远远不能满足肿瘤治疗的需要,因而急待开发针对新型抗肿瘤药物的靶点。我们在研究抗锥虫亮氨酰tRNA合成酶(tbLeuRS)抑制剂对人源细胞...
- 姚璎
- 关键词：抗肿瘤药物分子机制细胞抑制
- 文献传递
- 布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶的制备方法
- 一种生物技术领域的酶的布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶的制备方法，具体步骤如下：分别设计引物，扩增布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶的α亚基和β亚基基因；将α亚基和β亚基基因分别克隆到原核表达载体pET21a(+)中，构建pE...
- 姚璎杲光伟李大伟
- 文献传递
- 布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶在大肠杆菌中的克隆、表达、纯化及活性测定
- 2010年
- 苯丙氨酰-tRNA合成酶是布氏锥虫蛋白合成过程中的一类重要酶,以其为靶点的抑制剂可能发展成为新一代的抗锥虫药物,但此前并没有分离锥虫苯丙氨酸-tRNA合成酶的报道。本研究用大肠杆菌成功克隆表达并纯化了布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶并进行了活性测定。首先通过PCR方法从布氏锥虫细胞基因组中分别扩增出苯丙氨酰-tRNA合成酶的α亚基、β亚基的基因,依次克隆入pCOLADuet共表达载体,然后在大肠杆菌BL21(DE3)RIPL中进行了成功表达,并采用Ni-Bind亲和层析对其进行了纯化,最后用免疫印迹进行了鉴定。此外还采用放射性同位素方法进行了酶活性测定,这为下一步进行布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶抑制物的设计和体外筛选奠定了良好的基础。
- 姚璎杲光伟李大伟
- 关键词：布氏锥虫TRNA合成酶原核表达纯化酶活测定
- 以布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶为靶标的抗锥虫药物筛选系统的建立
- 2009年
- 锥虫是人的血液寄生虫,对热带乃至拉丁美洲贫困地区影响极大,但目前的传统治疗药物存在副作用大、有效性不断降低的问题。根据亮氨酰tRNA合成酶在微生物中可作为药物靶点的事实,在新型抗锥虫药物筛选中,通过对锥虫的亮氨酰tRNA合成酶的克隆、表达和纯化,以及该酶活性测定的优化,建立了该酶抑制物的筛选系统。筛选结果表明,这一以锥虫亮氨酰tRNA合成酶为靶标的抗锥虫药物筛选系统可以有效筛选抗锥虫化合物,选出的化合物有一定的抗锥虫特异性,并可以用于化合物的进一步优化和测定其半抑制浓度。使用这一系统筛选到了对锥虫有较好抑制作用,但对人类细胞毒性较小的一系列新型化合物,因而锥虫亮氨酰tRNA合成酶很可能成为开发有效抗锥虫药物的新靶标。
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- 关键词：布氏锥虫药物筛选
- 布氏锥虫亮氨酰-tRNA合成酶的克隆表达纯化及活性测定被引量：3
- 2010年
- 目的克隆布氏锥虫亮氨酸-tRNA合成酶基因,并进行表达纯化及活性测定。方法通过PCR方法从布氏锥虫细胞基因组中扩增出亮氨酰-tRNA合成酶(LeuRS)基因,依次克隆入pBS-T克隆载体及pET21a(+)表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)RIPL中通过条件优化后表达。表达产物用His-Bind亲和色谱纯化,并用免疫印迹进行鉴定。采用放射性同位素方法进行酶活性测定。结果PCR扩增得到3.2 kb的DNA片段,重组质粒pET21a(+)/LeuRS经酶切鉴定和测序分析,表明构建正确。表达的重组蛋白占菌体可溶性蛋白的20%,纯化后蛋白纯度达85%,免疫印迹进行鉴定蛋白正确,酶活性测定计算出提纯物酶活性约为72 U/mL。结论已成功克隆表达纯化出布氏锥虫亮氨酸-tRNA合成酶,并用放射性同位素方法进行了酶活性测定,这为下一步进行布氏锥虫亮氨酰-tRNA合成酶抑制物的设计和体外筛选奠定了良好的基础。
- 姚璎杲光伟李大伟
- 关键词：布氏锥虫亮氨酰-TRNA合成酶原核表达酶活测定
- 布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性蛋白的制备方法
- 一种生物技术领域的布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性蛋白的制备方法，步骤包括：设计特异引物，扩增布氏锥虫全基因组；切胶回收，得到布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶基因；将步骤二得到的基因连接到克隆载体中，构建基因克隆质粒；将克隆...
- 李大伟姚璎周虎臣
- 文献传递
- 布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶的制备方法
- 一种生物技术领域的酶的布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶的制备方法，具体步骤如下：分别设计引物，扩增布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶的α亚基和β亚基基因；将α亚基和β亚基基因分别克隆到原核表达载体pET21a(+)中，构建pE...
- 姚璎杲光伟李大伟
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