姚旭东
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：天津医科大学更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 使用人粘附分子-2启动子的衰变加速因子重组基因表达载体的构建及意义被引量：1
- 2001年
- 目的 :构建含人粘附分子 -2(ICAM -2)启动子的人衰变因子 (DAF)重组基因的真核细胞表达载体 ,运用于转基因动物克服异种器官排斥的研究。方法:双酶切本室已构建质粒pGEM -7Zf-DAF ,得到含人ICAM -2启动子及DAFcDNA序列的插入片段 (3.7Kb) ;双酶切pcDNA3真核表达载体 ,得到不含病毒启动子、含筛选基因Neo的一段DNA作为载体序列 (4.4Kb) ;两段DNA进行连接反应后转化细菌 ;阳性转化菌落质粒抽提及酶切鉴定。根据人的ICAM -2启动子、DAFcDNA序列 ,设计引物行PCR特异扩增检验。结果:特异性3组酶切重组表达载体 ,产生符合设计的相应条带 ;PCR扩增出特异的318bp及1.7Kb的DNA片段 ,符合设计要求。结论 :含人ICAM
- 姚旭东马腾骧张泽李志欣李胜芝张玥王广有
- 关键词：异种器官移植衰变加速因子基因重组
- 人DAF、CD59基因特异表达载体的构建及其在猪血管内皮细胞表达的研究
- 我们课题组将建立在血管内皮细胞特异表达人双补体调节蛋白（CD59和DAF）的转基因猪.构建携有人ICAM-2启动子的CD59、DAF基因的特异表达载体,以及在猪血管内皮细胞（PEC）检测重组基因的表达,是建立此转基因猪的...
- 姚旭东
- 关键词：血管内皮细胞转基因猪
- 异种移植转基因用含粘附分子-2启动子的人CD59重组基因的构建
- 2002年
- 目的构建含人粘附分子-2(ICAM-2)启动子的人补体调节蛋白CD59重组基因,并将其用于异种器官移植转基因。方法利用PCR方法从人血基因组扩增得到ICAM-2启动子、CD59基因的第一内含子片段,经电泳分离、切胶回收纯化得到上述片段,分别双酶、单酶切这两条片段,纯化回收备用;双酶切pcDNA3-CD59真核表达载体,经电泳分离、切胶回收纯化得到不含病毒启动子、含筛选基因Neo的一段pcDNA3-CD59cDNA作为载体序列;ICAM-2启动子片段先与载体进行定向克隆连接反应后转化细菌,阳性转化菌质粒抽提及酶切鉴定,得到pcDNA3-ICAM2-CD59质粒;再单酶切此质粒,纯化该载体与CD59第一内含子片段连接,转化细菌、抽提质粒,用脂质体将该质粒转染猪血管内皮细胞,流式细胞仪检测CD59蛋白表达。结果得到pcDNA3-Enhancer-ICAM2-CD59质粒,以EcoRⅠ消化此重组质粒,产生5.5及0.5kb两片段;以HindⅢ消化重组质粒,得到5.45及0.55kb两片段,以KpnⅠ/HindⅢ双酶切质粒时,出现5.0、0.55、0.4kb3条片段,对插入子分别进行测序,上述结果完全符合设计要求及正确序列。流式细胞仪检测重组基因表达阳性。结论含人ICAM-2启动子的CD59重组基因表达载体获得成功,该重组基因构建成功为转基因应用奠定了基础。
- 姚旭东马腾骧吴志宏李胜芝李志欣王广有
- 关键词：异种移植启动子转基因
