吴秀丽
- 作品数：8 被引量：13H指数：3
- 供职机构：河南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河南省高校科技创新团队支持计划国家自然科学基金河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 以p-TEFb为靶点抗HIV药物高通量筛选模型建立及在中药初筛中的应用被引量：2
- 2014年
- 目的建立以正向转录延伸因子(p-TEFb)为靶点的抗HIV药物快速高通量筛选模型,并运用此模型筛选抗艾滋病中药。方法构建BD-Tat和AD-CyclinT1融合的酵母双杂交质粒,分别转入AH109和Y187,经接合实验获得二倍体菌株并对其进行毒性检测、自激活实验和报告基因表达检测,建立基于酵母双杂交的筛选模型。结果运用此系统筛选具有提高机体免疫功效的20种中药,获阳性中药2种,其抗HIV活性已被体外抑制HIV实验证实。结论该筛选模型可成功用于抗艾滋病化合物和中药的高效筛选,得到的2种阳性中药狗脊和黄连,值得进一步进行干扰HIV Tat和CyclinT1互作的有效成分分离研究。
- 李芬李玉会吴秀丽胡岩岩马瑜贾盼盼岳晓杰李明军
- 关键词：靶点高通量筛选模型狗脊
- 烟草新驱动蛋白基因NtTKR原核表达载体的构建、诱导表达及蛋白纯化
- 2017年
- 通过对烟草驱动蛋白家族新成员Nt Tkr尾部的酵母双杂交筛选,得到多个与Nt Tkr互作的候选蛋白。为进一步验证NtTkr与候选蛋白之间的相互作用,以p GBKT7-Nt Tkr质粒为模板,PCR扩增烟草NtTKR全长,将其克隆入原核表达载体pMXB10,重组质粒pMXB10-NtTkr-3582经生物公司测序,结果正确。将其转化为BL21(DE3),IPTG诱导其表达目的蛋白,经几丁质法纯化及SDS-PAGE检测,结果表明笔者得到了高纯度的目的蛋白。该试验为进一步运用Pull Down确定Nt Tkr与候选蛋白之间的体外互作及深入研究该蛋白的其他生物学功能奠定了基础。
- 乔慧聪任向波吴秀丽李芬
- 关键词：烟草纯化
- 不同裂解液对血管蛋白提取和磷酸化蛋白免疫印迹的影响被引量：4
- 2015年
- 为寻找一种适合血管组织蛋白提取的裂解液配方以及用于磷酸化蛋白的免疫印迹分析,运用3种不同的细胞裂解液A,B和C,分别对经预处理的等量猪冠状动脉血管样品进行总蛋白的提取,BCA法测蛋白含量,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白进行分离,免疫印迹法检测pERK,p-AKT,p-MLC和p-MYPT1 4种磷酸化蛋白表达以比较3种裂解液的裂解效果.结果表明,3种裂解液均可以满足一般免疫印迹分析的要求,其中C液提取的蛋白浓度最低,B液提取的蛋白含量最高,但不适于低含量的小分子磷酸化蛋白p-MLC的检测,A液用于免疫印迹检测大、中、小3种分子量的磷酸化蛋白效果最佳.即细胞裂解液A(50mmol·L-1 pH 7.4Tris-HCl,150mmol·L-1 NaCl,0.1%SDS,1%NP-40,1mmol·L-1 EDTA,1mmol·L-1 EGTA,临用前加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂)可作为提取血管组织总蛋白进一步用于Western检测的一种理想配方.
- 任向波吴秀丽李芬
- 关键词：血管免疫印迹
- Elp3基因缺失对酿酒酵母咖啡因耐受性的影响被引量：1
- 2022年
- 过量咖啡因(Caffeine,CAF)对真核细胞有毒害作用.Elp3是组蛋白乙酰转移酶Elongator复合物的催化亚基,其缺失会影响Elongator的功能,进而使酵母产生对CAF敏感表型.为研究酿酒酵母CAF耐受性,以不同浓度CAF处理野生型、elp3⊿及转入完整和部分缺失Elp3的elp3⊿菌株,检测其敏感性,并通过RT-qPCR和ChIP实验研究了热激胁迫下SSA3的表达.结果发现常温下各菌株生长均随CAF浓度的增加而减缓,且elp3⊿细胞CAF耐受性下降更显著;高温处理使elp3⊿菌株对CAF更加敏感;在elp3⊿菌株中转入两保守功能域缺失的Elp3,其咖啡因耐受性并无明显变化;无论热激与否,elp3⊿菌株SSA3表达均显著低于野生型对照,Elp3直接参与热激胁迫下SSA3的转录延伸.研究表明Elp3基因缺失和高温处理均可使酿酒酵母的CAF耐受性降低;Elp3两保守功能域为其参与CAF胁迫反应所必需;高温协同处理下elp3⊿菌株CAF耐受性的显著降低可能与此条件下SSA3等应激基因表达受阻有关.
- 胡孟可吴秀丽李芬
- 关键词：酿酒酵母ELP3保守结构域
- 烟草新驱动蛋白NtTKR过表达对酵母生长的影响被引量：3
- 2014年
- 为了解烟草新驱动蛋白NtTKR功能信息,构建了EGFP融合的NtTKR基因酵母表达载体并转入酿酒酵母W303诱导表达,荧光显微镜观察结果表明,诱导条件下的转化细胞发出明亮的绿色荧光,表明转入的NtTKR得到了高效表达.转化株在诱导和非诱导条件下培养3d,可见NtTKR过表达菌落比对照小的多;但通过绘制8h内生长曲线发现二者细胞数目无显著差别;表明NtTKR过表达对酵母细胞生长的抑制可能更多的是因为抑制其体积增大,而非分裂速度减慢引起的细胞数目降低.已知NtTKR在烟草受精卵、发育各个时期的胚、幼叶、根尖及茎尖等细胞分裂旺盛部位均优势表达,推测该基因在烟草中可能与上述各部位新生细胞的体积增大相关.
- 李芬任向波腾飞吴秀丽田树娟
- 关键词：驱动蛋白细胞分裂
- 猪冠状动脉平滑肌细胞的分离、培养及鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的，建立体外分离培养猪冠状动脉血平滑肌细胞（PCASMC）的技术方法并观察其生长特征．方法：酶联合消化法原代分离猪冠状动脉来源的CASMC，利用倒置显微镜观察细胞生长情况；免疫荧光染色法鉴定细胞；台盼蓝法、绘制生长曲线法测定冠状动脉PCASMC传代细胞的成活率和生长特征．结果：分离培养的细胞3d后呈梭形生长，7～8d后生长迅速可传代；第2代细胞在显微镜下观察3～5d即可见典型“峰-谷”状生长；免疫荧光染色显示胞浆内α-平滑肌肌动蛋白表达阳性，细胞成活率为97．5％；细胞生长曲线近似“s”形．结论：本研究建立了高效分离和培养PCASMC的方法，细胞均稳定地表达α-平滑肌肌动蛋白，为血管疾病的研究提供了理想的细胞模型．
- 杨敬辉吴秀丽王冠峰陈文伟李芬
- 关键词：冠状动脉平滑肌细胞原代培养
- 酿酒酵母组蛋白H3 K4L和K36L突变对细胞生长和GAL1、SSA3、PHO5表达的影响
- 2014年
- 组蛋白甲基化和乙酰化修饰对基因表达和细胞生长至关重要,为揭示组蛋白H3第4、36位赖氨酸(K)修饰对酵母生长和诱导基因表达的重要性及两位点功能差异,文章构建了两位点单独或共同突变为亮氨酸(L)的组蛋白突变株S4、S36和D436,对其在正常、半乳糖为单一碳源、高温、高盐等条件下的生长及GAL1、SSA3和PHO5表达进行比较。结果显示:D436对高温最敏感,各突变株对咖啡因显著敏感;3个突变株在高温、高盐、6-AU、咖啡因存在时的生长及GAL1、SSA3和PHO5的激活均明显慢于野生型;S4在高温、高盐条件下生长及GAL1激活慢于S36。H3-K4和H3-K36的翻译后修饰对细胞生长和适应不利环境非常重要,在对高温等逆境快速适应上,K4比K36更重要,组蛋白突变株的表型缺陷是因该条件下细胞生存所必需的诱导基因表达延迟所致,同一位点突变对不同基因表达有不同影响。3个突变株的缺陷表型严格上应是相应位点突变导致组蛋白修饰模式改变所造成的综合影响。
- 李芬杨敬辉吴秀丽张卫林王冠峰岳晓杰
- 关键词：组蛋白甲基化突变株细胞生长诱导基因
- 新基因NtTKR及其同源物LeTKR的生物信息学分析被引量：4
- 2014年
- 驱动蛋白是一类与微管结合的ATPase,在细胞内执行着多种功能.序列对比分析表明,烟草不同发育时期胚cDNA文库的差异筛选分离到的在叶和发育各时期胚中优势表达的驱动蛋白家族新成员NtTKR与番茄驱动蛋白LeTKR(AF242356.1)高度同源.运用生物信息学方法对二者编码产物的同源性、功能结构域特点和可能的翻译后修饰等进行了比较分析,结合目前已知的实验结果预测了该基因可能参与的生物学过程.这些分析和预测将对进一步实验证实NtTKR在烟草的形态发生及胚胎发生中的提供有益的指导.
- 李芬吴秀丽郭君丽
- 关键词：烟草生物信息学分析
