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单纯疱疹病毒II型LAT基因开放读码框1抗细胞凋亡作用的研究: 单纯疱疹病毒Ⅱ型（Herpes Simplex Virus Ⅱ,HSV-2）具有易感染，容易传播，难治愈的特点。它主要引起生殖器疱疹（genital herpes,GH）。初次感染HSV-2后，病毒会终身潜伏在人体的骶尾...; 吕芳彪; 关键词：放线菌素D 抗凋亡作用单纯疱疹病毒2型

单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体真核表达载体的构建及表达被引量：1: 2012年; 背景:单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1真核表达载体的构建可以为研究单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1在病毒潜伏复发中的功能奠定基础。目的:构建含存单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1的真核表达载体,并通过转染非洲绿猴肾细胞(Vero),验证载体的体外表达情况。方法:根据单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1基因序列设计一对引物,以单纯疱疹病毒Ⅱ型333标准株基因组为模板PCR法扩增出开放读码框1基因,克隆至真核表达载体上,并进行酶切鉴定以及测序;利用X-fect转染试剂盒将重组质粒pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1转染vero细胞,RT-PCR检测其mRNA水平的表达,并用荧光倒置显微镜观察融合蛋白的表达。结果与结论:开放读码框1基因的体外扩增目的片段为741bp,所构建的真核表达载体pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1经双酶切鉴定,与预期大小一致,测序结果与NCBI收录的开放读码框1基因序列一致;重组质粒pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1转染vero细胞后,RT-PCR验证有目的基因的转录,荧光显微镜观察到融合蛋白在转染的Vero细胞中表达。表明成功构建pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1真核表达载体,并且实现其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达。; 吕芳彪杨慧兰; 关键词：真核表达载体转染体外表达

顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型的建立: 2011年; 目的:建立常见凋亡诱导剂顺铂(Cisplatin)诱导非洲绿猴肾细胞(Vero)凋亡的模型,为进一步研究抗凋亡基因在细胞凋亡中的分子机理打下基础。方法:分别以不同浓度的顺铂处理Vero细胞48h,用噻唑蓝(MTT)比色法、Gimesa染色、流式细胞术检测,观察处理后细胞的生长活力和凋亡情况。结果:以未处理的细胞作为对照组,1、2、3、4、5μg/mL的顺铂处理的Vero细胞生存率分别为(79.02±6.10)%、(68.84±4.42)%、(56.66±4.07)%、(46.83±3.76)%、(29.04±5.93)%(P<0.01);经顺铂诱导后细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征;流式细胞仪检测,0、1、2、3、4、5μg/mL的顺铂处理的Vero细胞后凋亡率分别为1.66%±0.19%、16.65%±1.26%、24.82%±1.03%、36.22%±1.04%、48.49%±1.24%、43.34%±1.17%(P<0.01)。结论:本实验成功建立顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。; 浦洋薛礼长吕芳彪樊建勇张发洲龙朝钦; 关键词：非洲绿猴肾细胞细胞凋亡顺铂

单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体RL1的表达及其抗凋亡作用被引量：1: 2014年; 单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体(LAT)-RL1对放线菌素D诱导的凋亡作用的研究。构建重组pEGFP-RL1质粒,转染Vero细胞,RT-PCR及荧光鉴定重组质粒的表达。放线菌素D诱导Vero细胞凋亡,通过Hochest33342荧光染色观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1荧光观察膜电位变化,Caspase 3凋亡蛋白检测。RT-PCR和荧光观察表明该真核表达载体能在Vero细胞中高表达。Hochest33342染色转染了pEGFP-RL1的Vero细胞经放线菌素D凋亡诱导后,细胞形态正常。流式结果表明转染重组质粒pEGFP-RL1且经诱导凋亡组与正常对照组凋亡率无差异,而显著低于诱导凋亡组和转染空质粒pEGFP-C2诱导凋亡组。转染重组质粒pEGPF-RL1的细胞JC-1染色后,红色细胞的比例要远大于绿色细胞的比例,而转染空质粒pEGFP-C2被染成绿色细胞的数量较多。Caspase-3结果表明转染了空质粒pEGFP-C2的Vero细胞经诱导凋亡后,活性显著高于转染了pEGFP-RL1经放线菌素D诱导凋亡后的Vero细胞和正常Vero细胞。HSV-2 LAT RL1具有抗放线菌素D诱导的Vero细胞的凋亡作用。; 高睿迪杨慧兰钟菲菲吕芳彪; 关键词：单纯疱疹病毒 LAT 放线菌素D 凋亡 VERO细胞

单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框1(ORF1)真核表达载体的构建及表达: 目的:构建单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框1真核表达载体pEGFP-C2/LAT ORF1,并通过转染非洲绿猴肾细胞(Vero),验证载体的体外表达情况。方法:根据HSV-ⅡLAT ORF...; 吕芳彪杨慧兰钟菲菲高睿迪; 文献传递

单纯疱疹病毒潜伏相关转录体基因在抗细胞凋亡中的作用: 潜伏相关转录体基因(LAT)是单纯疱疹病毒(HSV)潜伏感染期间唯一可以大量转录,并可检测到的基因。研究表明LAT在HSV潜伏、复发中表现出多种功能,被认为在HSV潜伏复发中起关键性作用。本文综述了LAT基因的抗凋亡作用...; 吕芳彪杨慧兰钟菲菲高睿迪; 文献传递

单纯疱疹病毒潜伏相关转录体基因在抗细胞凋亡中的作用: 吕芳彪杨慧兰

放线菌素D诱导非洲绿猴肾细胞(Vero)凋亡模型的建立被引量：2: 2013年; 用不同剂量(0,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0 mg/L)的放线菌素D(actinomycin D,ActD)诱导Vero细胞凋亡不同时间(0,12,24,36,48,60 h)。MTT法和流式细胞术的结果显示,以未处理的细胞作为对照组,各剂量ActD处理Vero细胞不同时间后,细胞的活力均下降,凋亡率均升高,且呈剂量和时间依赖效应。当ActD浓度为1 mg/L、作用时间为36 h,细胞的存活率为(0.55±0.01),凋亡率为(34.83±1.13)%。Gimesa染色、Hoechst33258染色表明,经ActD(1 mg/L)诱导36 h后Vero细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征;Real-time PCR结果显示,诱导组Bax/Bcl-2 mRNA相对含量明显大于正常对照组,且差异有统计学意义;分光光度法结果表明,与正常对照组相比较,凋亡诱导组caspase-3和caspase-8活性明显升高且差异具有统计学意义,caspase-9活性与对照组相比较,差异无统计学意义。用1 mg/L ActD诱导Vero细胞36 h时,细胞存活率和凋亡率都很高,可作为ActD诱导Vero细胞的最佳剂量。在该剂量及作用时间下,caspase-3和caspase-8活性明显升高,表明ActD诱导Vero细胞凋亡是通过caspase-8相关的途径。该实验成功建立了ActD诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。; 钟菲菲杨慧兰吕芳彪樊建勇; 关键词：肾细胞细胞凋亡

单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框1(ORF1)真核表达载体的构建及表达: 目的构建单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框1真核表达载体pEGFP-C2/LAT ORF1,并通过转染非洲绿猴肾细胞(Vero),验证载体的体外表达情况。方法根据HSV-Ⅱ LAT OR...; 吕芳彪杨慧兰

单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框1(ORF1)真核表达载体的构建及表达: 吕芳彪杨慧兰

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