吕秉乐
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- 登革病毒Ⅱ型对人脐静脉血管内皮细胞通透性的研究被引量：2
- 2011年
- 目的研究登革病毒Ⅱ型（DENV-2）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）通透性的影响。方法DENV一2病毒滴定，DENV-2接种HUVEC单层细胞，用间接免疫荧光法动态观察DENV-2感染HUVEC的情况（30min，1、3、6、12、24、30、36、42、48、72b），实时定量荧光PCR方法检测病毒载量，transwell法检测DENV-2对HUVEC通透性的影响，透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果DENV－2对HUVEC通透性的影响30min时作用最为明显，其次为42h时。且病毒载量与HUVEC通透性改变呈正相关。透射电镜结果显示有细胞微绒毛脱落，胞质溶解，部分核膜间隙增宽，甚至是细胞核中也存在裂隙，部分线粒体嵴消失甚至空化，线粒体髓样变，包膜不完整。结论DENV-2对HUVEC通透性有影响，为探究登革病毒的发病机制提供一定的理论依据。
- 任玮左丽吕秉乐崔冬冰
- 关键词：登革病毒人脐静脉血管内皮细胞通透性
- 两株DENV-2 E基因1-476序列原核表达产物对HUVEC通透性的影响
- 目的:<br> 构建DENV-2 M株和NGC株E基因部分序列原核表达质粒，进行蛋白表达、鉴定和纯化，接种HUVEC细胞，并制备多克隆抗体。研究两株DENV-2 E基因部分序列原核蛋白的表达及其对HUVEC...
- 吕秉乐
- 关键词：2型登革病毒E基因人脐静脉内皮细胞多克隆抗体
- 文献传递
- 登革2型病毒及其NGC株、M株E基因的原核蛋白对HUVEC通透性的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:研究登革2型病毒(DENV-2)、登革2型病毒国际参考株(NGC)E基因1-476序列原核蛋白、登革2型病毒贵州蚊虫分离株(M)E基因1-476序列原核蛋白对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)通透性的影响。方法:将DENV-2 M株和NGC株E基因1-476序列原核表达产物及DENV-2接种于HUVEC单层细胞,用transwell法检测HUVEC的通透性,透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果:DENV-2、NGC株E基因的原核蛋白、M株E基因的原核蛋白分别在30 min、3 h、12 h时对HUVEC通透性的影响最为明显,透射电镜结果显示有细胞超微结构的改变。结论:DENV-2、DENV-2 NGC株E基因原核蛋白、M株E基因原核蛋白对HUVEC通透性、细胞超微结构有明显影响。
- 任玮左丽吕秉乐
- 关键词：登革热病毒E基因细胞膜通透性
- 登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核载体的构建及蛋白表达
- 2011年
- 目的体外扩增登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列,构建pET28a(+)-ME、pET28a(+)-NE,分析其在E-coli BL21中的表达。方法 PCR方法扩增(DENV-2)M株、NGC株E基因部分序列并构建原核重组载体pET28a(+)-ME、pET28a(+)-NE,将重组载体转化E-coli BL21,IPTG诱导表达,采用镍离子亲和层析的方法纯化目的蛋白并用SDS-PAGE电泳和Western-Blot进行鉴定。结果经双酶切、PCR和测序证实成功构建原核重组载体pET28a+-ME、pET28a(+)-NE,Western-Blot证实成功诱导出目的蛋白,SDS-PAGE电泳证实亲和层析法纯化后得到较高纯度的目的蛋白。结论检测到目的蛋白的表达,经纯化后得到纯度约为90%的目的蛋白,为研究登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E蛋白在致病机制方面奠定了一定的基础。
- 张莉莎吕秉乐左丽
- 关键词：E蛋白原核表达
- 登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白多克隆抗体的制备
- 2011年
- 目的制备登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白的小鼠多克隆抗体并进行鉴定。方法利用SDS-PAGE电泳的方法将纯化后的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白浓缩,切割目的条带并研磨制成抗原,皮下多点分次注射BALB/c小鼠,采用Western-Blot、间接免疫荧光法对小鼠血清多克隆抗体进行鉴定。结果经SDS-PAGE电泳成功地将纯化后的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白浓缩,并获取了抗登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白的多克隆抗体。结论本实验中所用到的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白为可溶性抗原,通过切胶研磨制成颗粒性蛋白抗原能获得良好的免疫效果,该方法制备的抗原浓度及纯度高,由此获得了高效价高特异性的多克隆抗体。
- 张莉莎吕秉乐左丽
- 关键词：E蛋白多克隆抗体
