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S-腺苷甲硫氨酸增加salsolinol对多巴胺能神经细胞SH-SY5Y的毒性: 2015年; 目的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是常见的神经退行性疾病,儿茶酚异喹啉类神经毒素(salsolinol,Sal)作为内源性神经毒素是其可能的致病因素,而S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl methionine,SAM)目前在帕金森病的治疗上有应用的可能,所以有必要对其在体内的作用进行研究。方法本实验采用体外培养的多巴胺能细胞SH-SY5Y,首先使用MTT的方法对Sal以及SAM与Sal共同诱导后细胞存活率进行研究,使用了Hoechst 33258染色的方式检测凋亡,并检测ATP,最后使用高效液相色谱偶联电化学检测器(high performance liquid chromatography couple electrochemical detector,HPLC-ECD)检测了Sal和SAM代谢生成的氮甲基去甲猪毛菜碱(N-methylsalsolinol,NMSal)在细胞中的浓度。结果 SAM可以促进Sal引起的细胞存活率的降低,同时凋亡水平升高,ATP浓度降低,而且SAM诱导之后,Sal代谢生成的NMSal浓度也随之升高。结论这些结果说明了SAM会促进Sal在多巴胺能神经细胞中的毒性作用,因此SAM可能不利于PD的治疗。; 卢剑清邓玉林; 关键词：S-腺苷甲硫氨酸

重组腺相关病毒的小量制备与体内体外感染研究: 2015年; 重组腺相关病毒(r AAV)是近年来发展的较为成熟的一种病毒基因载体,常用于过表达或者敲低等动物模型的建立与基因治疗等。本研究使用三质粒共转染的方法,在HEK293细胞中包装出含绿色荧光蛋白(EGFP)基因的r AAV,通过一系列实验,确定纯化方法为脱氧胆酸钠裂解,高浓度Na Cl去除杂蛋白,最后通过肝素层析柱纯化,经超滤管浓缩后其滴度可达1013gene copys/m L以上。将纯化后的r AAV感染HEK293细胞,通过实验确定使用感染复数为106、感染3 d的细胞能够表达出高水平的EGFP。将r AAV注射入大鼠中脑黑质致密部,经过3周的感染发现,r AAV可以特异性地感染多巴胺能神经元,表达出EGFP。通过以上实验,建立了一个在实验室小量制备r AAV的方法,且此方法制备的r AAV完全满足体内与体外实验的要求。; 卢剑清马宏孙飞一邓玉林; 关键词：重组腺相关病毒病毒纯化

醋酸锰对PC12细胞损伤作用的研究被引量：3: 2008年; 目的研究醋酸锰对PC12细胞的损伤作用机制。方法不同浓度醋酸锰处理PC12细胞24h后,MTT法检测细胞存活率,Hoechst 33258和DNA凝胶电泳的方法检测细胞凋亡,利用高效液相色谱—电化学方法(HPLC-ECD)检测细胞内儿茶酚异喹啉物质的生成,同时测定细胞内丙二醛(MDA)和羟自由基的生成量。结果不同水平的醋酸锰处理使PC12细胞存活率下降且呈浓度依赖性(P<0.05)。Hoechst 33258和DNA凝胶电泳结果表明细胞发生了凋亡。MDA和羟自由基的含量与对照相比明显升高(P<0.05),多巴胺(DA)的含量呈下降趋势(P<0.05)。Sal(6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉,Sal)和NMSal(N-甲基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉,NMSal)的含量则随锰浓度的增加而增加(P<0.05)。结论过量的醋酸锰导致PC12细胞产生高氧化应激水平,从而生成了一系列儿茶酚异喹啉物质,对细胞产生损伤作用,这可能是三价锰发挥损伤作用的途径之一。; 栾玉静庆宏卢剑清谢海燕林凡凯毛健邓玉林; 关键词：醋酸锰 PCI2细胞氧化应激

锰处理PC12细胞某些生化指标的变化被引量：2: 2009年; 目的研究不同浓度氯化锰处理对细胞脂质过氧化及抗氧化酶的影响。方法不同浓度氯化锰处理体外培养的PC12细胞,测定细胞内丙二醛(malonaldehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活力。结果3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)实验结果显示不同浓度的氯化锰对细胞的生长增殖有不同程度的抑制(P<0.05)。MDA的含量与对照相比显著升高(P<0.05)。且锰处理组SOD和GSH-Px的活力显著低于对照组(P<0.05)。结论过量的氯化锰会增加细胞脂质过氧化水平,同时抑制细胞内SOD及GSH-Px的活力,导致细胞产生高氧化水平,造成细胞功能损伤。这可能是二价锰发挥毒性的途径之一。; 栾玉静卢剑清邓玉林; 关键词：锰 PC12细胞脂质过氧化抗氧化酶

微透析-UPLC-MS/MS法同时测定活体大鼠脑内烟碱及其代谢物被引量：2: 2014年; 建立了同时测定活体大鼠脑内烟碱（Nic）及其5种代谢物可替宁（Cot）、降烟碱（NNic）、烟碱氮氧化物（NNO）、降可替宁（NCot）和反-3＇-羟基可替宁（3-HC）的微透析-超高效液相色谱-串联质谱（UPLC—MS／MS）联用方法。采用微透析系统采集大鼠脑组织样品，加入内标Nic—d3，Cot—d3，NNic-d。和3-HC—d，后直接进行亲水相互作用色谱（HILIC）分离和多反应监测（MRM）分析。结果表明：Nic及其5种代谢物的日内和日间精密度及准确度均小于11％，检出限和探针回收率分别为0．012～0．029ng／mL和4．7％～9．3％。该方法快速简单、灵敏稳定，适合用于活体分析大鼠脑内的Nic及其代谢物。; 毛健卢剑清徐妍洪广峰卢斌斌孙世豪宗永立张建勋; 关键词：烟碱代谢物微透析 MS 鼠脑

基于α-synuclein转基因大鼠帕金森病模型的内源性神经毒素致病机制的研究: 帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是目前第二大神经退行性疾病,多于老年发病,其症状表现为静止性震颤,身心反应迟钝以及强直等,对生活质量造成严重的影响,且中国PD病人数量呈逐年增长的趋势。PD的两大病...; 卢剑清; 关键词：帕金森病 Α-SYNUCLEIN 神经毒性; 文献传递

生物技术与节能减排——酶在造纸工业中的应用被引量：2: 2012年; 本文综述了酶在造纸工业中的应用,分别从酶法制浆、酶法脱墨、酶法漂白和废水处理四个方面说明了酶在其中起到的关键作用。在酶法制浆中,说明了漆酶、纤维素酶和半纤维素酶的作用;在酶法脱墨中,说明了纤维素酶和脂肪酶的作用;在酶法漂白中,说明了漆酶和半纤维素酶的作用;在废水处理中,说明了漆酶的作用。; 卢剑清; 关键词：造纸工业酶法制浆酶法脱墨酶法漂白

大鼠脑部微透析实验中透析效率的研究被引量：2: 2012年; 本文通过对大鼠脑部黑质致密部的微透析实验,将多巴胺添加入透析液,从透析液中多巴胺浓度,透析液流速等方面对透析效率进行了研究,对进行大鼠脑部微透析相关的实验具有一定的参考作用。; 卢剑清卢嵩; 关键词：微透析多巴胺

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卢剑清