刘鹤
- 作品数：11 被引量：26H指数：3
- 供职机构：哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项哈尔滨市科技攻关计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
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- 致病性马兽疫链球菌的分离鉴定、生物学特性及其M-like基因的序列分析被引量：11
- 2012年
- 为鉴定锦州某猪场引起关节炎病疫情的病原,本研究将患猪关节液在血平板培养基上培养进行细菌分离;对分离细菌进行形态学观察、生化反应、致病性试验及药物敏感性试验;并对其M-like基因进行克隆和测序分析。结果在显微镜下观察到周围具有透明的β溶血环的革兰氏阳性中长链球菌,经生化反应及M-like基因鉴定为马兽疫链球菌(命名为10JZ12);分离株10JZ12对小鼠的致死剂量为1.75×108cfu;并对苯唑西林、青霉素G、红霉素、克拉霉素、克林霉素、米诺环素、环丙沙星、左氟沙星、多粘菌素B、呋喃妥因敏感,对氯霉素、四环素、诺氟沙星、复方新诺明不敏感。
- 王淑杰姜成钢武嘉男刘永刚金家民刘鹤蔡雪辉张秀英
- 关键词：PCR
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体Sn和CD163 TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立
- 2012年
- 为建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)允许细胞表面的Sn和CD163受体的方法,本研究设计针对Sn和CD163基因的特异性引物和荧光探针,建立了检测PRRSV Sn和CD163受体的荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法在检测101copies/μL～108copies/μL模板范围内具有良好的线性关系。标准曲线的相关系数r值均大于0.996,扩增效率分别为100%和107%;该检测方法对Sn和CD163的检测下限均为10拷贝,敏感性高;批内重复试验和批间重复试验的变异系数均小于5%,具有良好的重复性。利用该方法对PRRSV感染肺泡巨噬细胞(PAM)72 h后Sn和CD163受体mRNA的转录水平进行了检测,结果表明Sn和CD163受体的转录水平显著上调。本研究为PRRSV病毒感染后两种主要受体变化趋势的研究提供了有效的检测方法。
- 韩梓峰刘永刚石文达王刚何玉利王淑杰刘鹤董建国武嘉男蔡雪辉
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR
- 表达禽网状内皮组织增生病病毒ggpp90蛋白的毕赤酵母基因工程菌发酵工艺优化研究被引量：2
- 2015年
- 禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的重要传染病,基因工程亚单位疫苗是防治该病的最佳选择。研究对表达REV主要保护性抗原基因gp90的重组毕赤酵母基因工程菌株进行了发酵工艺优化,以实现重组gp90蛋白的高效稳定表达。发酵培养基、诱导温度和诱导酸碱度的优化结果表明,当诱导温度为28℃,诱导pH6.0,基础盐培养基中CaSO4、MgSO4、K2SO43种硫酸盐的使用量降低至常用浓度的50%时,目的蛋白获得高水平稳定表达,表达的重组蛋白具有良好生物活性和稳定性。本系列优化试验为重组gp90蛋白制备基因工程亚单位疫苗的产业化奠定了基础。
- 李凯刘鹤赵宪成高宏雷王笑梅
- 关键词：禽网状内皮组织增生病毕赤酵母发酵
- 分泌CAV-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C1、由该细胞株分泌的单克隆抗体及应用
- 本发明公开了一株分泌CAV-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C1、由该细胞株分泌的单克隆抗体及应用。所述杂交瘤细胞株2C1保藏编号为CGMCC No.10878。间接免疫荧光结果表明：2C1杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体能特异...
- 蔡雪辉王淑杰刘鹤刘永刚
- 文献传递
- 高致病性PRRSV HuN4株Nsp4的原核表达及其抗体水平检测被引量：2
- 2011年
- 为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp4的免疫学特性,本研究根据PRRSV HuN4株序列,设计并合成用于扩增PRRSV HuN4株Nsp4基因的引物。将扩增产物与原核表达载体pGEX-6P-1连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。Western blot试验显示,Nsp4在大肠杆菌中获得较高水平的表达,并且具有良好的反应活性。利用该蛋白建立ELISA方法,检测PRRSV HuN4株感染仔猪的不同时间内的血清,并比较抗Nsp4,囊膜蛋白和M蛋白,N蛋白的抗体水平,结果表明Nsp4抗体升高的时间晚于囊膜蛋白和M蛋白、N蛋白出现的时间,同时抗体水平也低于其他蛋白。
- 董建国刘永刚石文达武嘉男王刚刘鹤徐明明荣福龙李丽琴田志军蔡雪辉
- 关键词：NSP4原核表达抗原性
- 猪链球菌7型强弱毒株SBP_bac_5差异表达蛋白的鉴定
- 2013年
- 前期研究表明细菌胞外溶质结合蛋白家族5(SBP_bac_5)基因在猪链球菌7型(S.suis 7)型强毒株WC0711中表达量高于弱毒株M13中,推测SBP_bac_5为S.suis 7型强弱毒株差异性表达蛋白。为进一步证实该结果,本研究采用real-time RT-PCR技术在基因水平检测S.suis 7型强弱毒株中SBP_bac_5 mRNA的表达量差异,结果显示,强毒株WC0711中SBP_bac_5的mRNA表达量为在弱毒株M13中的4.59倍。将SBP_bac_5的PCR产物克隆于pET-30a中,通过E.coli BL21诱导表达,纯化后的蛋白免疫新西兰白兔制备抗血清检测S.suis强弱病毒株中SBP_bac_5的表达量差异。结果显示,重组蛋白获得高效表达,S.suis 7型强毒株WC0711中SBP_bac_5表达量是弱毒株M13的3.8倍。
- 金家民王淑杰高明明王延群李玉明汪志艳石文达刘鹤姜成刚张秀英蔡雪辉
- 关键词：猪链球菌强毒株弱毒株
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp7间接ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2011年
- 为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的检测方法,本研究以重组Nsp7作为包被抗原,通过优化反应条件,建立PRRSV抗体间接ELISA检测方法。该检测方法与猪瘟等常见的6种猪病毒病的阳性血清无交叉反应,显示出良好的特异性。其检测标准血清的最低稀释倍数为1∶3 200,显示出良好的敏感性。批内重复性试验的变异系数小于5%,批间重复性试验的变异系数小于10%,显示出良好的重复性。采用该检测方法检测400份临床血清样品,实验结果表明该方法与商品化的IDEXX PRRSV抗体检测试剂盒符合率达到95.0%～96.8%;与LSI PRRSV抗体检测试剂盒符合率达到94.0%～96.5%。
- 刘鹤刘永刚王淑杰石文达武嘉男董建国荣福龙韩梓峰何玉利孙刚蔡雪辉
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA
- PRRSV Nsp7间接ELISA检测方法的建立及其单克隆抗体的制备
- 猪繁殖与呼吸综合征/(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS/),是由猪繁殖与呼吸综合征病毒/(Porcine Reproductive and Respir...
- 刘鹤
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒原核表达ELISA单克隆抗体
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp7的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2011年
- 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp7的免疫原性,本研究将PRRSV Nsp7进行了原核表达。SDS-PAGE和western blot试验表明,Nsp7在大肠杆菌中获得大量表达,并且其具有较好的反应活性。采用Nsp7免疫小鼠制备多克隆抗体,并进行间接ELISA检测,表明多克隆抗体效价达到1∶32 000以上;间接免疫荧光试验表明,多克隆抗体能够特异性识别PRRSV的Nsp7,显示出Nsp7具有较好的免疫原性。本研究获得了高纯度可溶性的PRRSV Nsp7,并进一步制备多克隆抗体,为研究Nsp7蛋白的免疫学特性提供实验依据。
- 刘鹤刘永刚石文达王淑杰武嘉男董建国荣福龙李丽琴徐明明孙刚蔡雪辉
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒原核表达多克隆抗体
- 一株血清7型致病性猪链球菌的分离鉴定被引量：3
- 2011年
- 为确定2007年11月黑龙江省五常市某猪场发病猪的病原,本研究将病猪迫杀,采取脑和关节液在血平板培养基上划线进行细菌分离培养,结果显示在血平板培养基上形成灰色、半透明、边缘整齐的有草绿色狭窄溶血环的光滑型圆形小菌落,镜检观察到散在排列的革兰氏阳性短链球菌,经生化反应、PCR反应及血清学试验鉴定为7型猪链球菌,并命名为07WC11株,其毒力基因型为cps7H+、gdh+、mrp+、ef-和sly-。以纯化的该分离菌株对斑马鱼和仔猪进行动物感染试验均能够导致斑马鱼和仔猪发病,表明该菌株具有一定的致病性,其毒力比国际标准菌株R735株和8074株更强。
- 王淑杰徐敏刘永刚石文达武嘉男刘鹤何玉利姜成刚韩梓峰蔡雪辉
- 关键词：猪链球菌PCR
