刘长征
- 作品数：30 被引量：66H指数：5
- 供职机构：中国医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组生产甲状旁腺激素衍生物的方法及所用表达载体
- 本发明涉及一种高效重组生产甲状旁腺激素衍生物的方法及所用表达载体。更具体地，本发明涉及通过将人甲状旁腺激素(PTH)(1－34)与缩短型配体蛋白的融合基因进行表达而高效生产人PTH(1－34)的方法及所得产物，本发明还涉...
- 陈松森狄旭刘长征张艳丽邓艳春
- 文献传递
- 人甲状旁腺素(1-34)衍生物在大肠杆菌中表达、纯化及其生物学活性被引量：4
- 2005年
- 为研究Gly hPTH(1 34)衍生物的生物学活性 ,用重叠PCR方法合成编码hPTH(1 34)的DNA片段 ,克隆到融合表达载体pGEX 2T的缩短型谷胱甘肽转移酶基因GST6 9△的 3′末端 ,构建正确读码框架的融合基因 .在两个基因间引入蛋白质羟胺切割位点序列 ,转入E .coliJM10 9中 ,IPTG诱导表达 .该融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 2 0 %以上 ,主要以包涵体形式存在 ,盐酸羟胺切割表达产物 .分析表明 ,80 %左右的融合蛋白被裂解为GST6 9△和Gly hPTH(1 34) .经分子筛柱层析和反相层析分离纯化获得重组Gly hPTH(1 34)衍生物 ,纯度达 98%以上 ,回收率约为 10mg/升发酵液 ,分子量为 4 177,等电点 (pI)为 8 4 0 ,N端 16个氨基酸 ,除第一个为甘氨酸外 ,其余与天然hPTH(1 34)序列一致 .Western印迹结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物具有hPTH(1 34)的免疫学活性 .体外活性测定结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物能刺激人成骨细胞HOSTE85增殖、增加细胞内胶原合成、ALP活性增高和cAMP生成量增加 ,并呈量效关系 ,提示它具有与化学合成的hPTH(1 34)相同的生物学活性 ,N端多一个Gly对其活性无明显影响 .
- 狄旭刘长征陈松森张艳丽邓艳春孙兰杨京
- 关键词：纯化生物学活性
- 瘦素及其相关信号通路在腹主动脉瘤发生与进展中的影响作用
- 2022年
- 腹主动脉瘤(AAA)是长期慢性动脉扩张性疾病,与动脉粥样硬化、感染、外伤等病因相关,目前对其研究多集中在炎症反应、衰老、动脉壁微环境变化,而关于AAA发生与进展过程中代谢变化的研究较少,如糖代谢、脂代谢等变化过程。瘦素作为内分泌、糖代谢、脂代谢过程中重要的调控因子,通过KEGG信号通路分析发现瘦素与多种信号通路相关,如腺苷酸活化蛋白激酶、酪氨酸激酶/信号传导及转录激活蛋白、细胞因子-细胞因子等信号通路,并且已有研究证明这些信号通路参与调控AAA的形成过程。同时,瘦素影响多种疾病的发生,如肥胖、糖尿病(DM)、高脂血症等,这些疾病同样影响着AAA的发生与进展,DM可能是AAA形成的保护因素,而高脂血症、肥胖与AAA形成的关系尚不明确。因此,瘦素可能在AAA发生与进展过程中发挥重要作用,通过进一步研究瘦素对AAA的影响作用,可能揭示AAA潜在的研究方向及治疗靶点。
- 任金锐刘长征顾光超吴建强李方达张慧吉磊陈梦寅郑月宏
- 关键词：腹主动脉瘤瘦素信号通路发病机制
- 人造血增效因子C末端结构与其趋化活性的关系
- 2008年
- 目的研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系。方法用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在E.coliBL21(DE3)中进行表达。hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化,融合蛋白GST-hHSF1-5 3经亲和层析、肠激酶(EK)酶切和凝胶过滤法进行分离纯化。hHSF3种缺失变异体进行Western blot鉴定,用飞行时间质谱法测定其相对分子质量,用改良的Boyden小室法测定其对人外周血中性粒细胞(PMN)趋化活性。结果测序证实合成的hHSF 1-66、hHSF1-59和hHSF1-53序列与设计一致,hHSF1-66/1-59表达量占菌体总蛋白的20%左右,主要以包涵体形式存在。GST-hHSF1-53表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式存在。3种目的蛋白纯度均达95%左右,它们的相对分子质量分别为7206.0、6401.2和5697.3 D,均具有全长hHSF的免疫学活性。与全长hHSF相比,hHSF1-66(缺失3个氨基酸)对人PMN最大趋化活性(CI)(50 nmol/L)没有明显差异,hHSF1-59(缺失10个氨基酸)和hHSF1-53(缺失16个氨基酸,α螺旋完全缺失)最大趋化活性分别下降34.3%和70.5%。结论hHSF C末端结构,特别是α螺旋结构对维持和稳定hHSF的空间构象起着重要作用。
- 罗丝杨克恭刘长征邓艳春苏林孔燕陈松森
- 关键词：趋化活性
- 5-AZA抑制肝癌细胞BEL7402代谢方式转换
- 2016年
- 目的研究去甲基化药物5-AZA对miR-34a和miR-34c在肝癌细胞中表达的影响及其抑制肝癌细胞糖酵解的分子机制。方法用real-time PCR法检测肝癌细胞系中miR-34a/c的表达以及糖酵解途径关键酶的表达;在肝癌细胞中过表达miR-34a、miR-34c或用5-AZA处理肝癌细胞,用乳酸检测试剂盒、葡萄糖检测试剂盒分析miR-34a/c及5-AZA对肝癌细胞BEL7402糖酵解的影响;设计拯救实验研究5-AZA、miR-34a/c与肝癌细胞糖酵解调控的关系。结果 5-AZA可以诱导BEL7402肝癌细胞内源性miR-34a、miR-34c的表达上调(P<0.01);过表达miR-34a/c可以抑制糖酵解关键酶LDH-A的表达(P<0.05);LDH-A是miR-34a/c的潜在靶基因;敲低miR-34a/c的表达可以降低5-AZA对肝癌细胞BEL7302糖酵解途径的抑制作用。结论 5-AZA通过诱导miR-34a/c表达上调,发挥抑制肝癌细胞代谢方式转换的功能。
- 邓艳春侯彭姣陈杰民何小东刘长征刘卫
- 关键词：去甲基化药物肝细胞癌
- RNF138作为预测结直肠癌对SC75741治疗敏感性的生物标志物的应用
- 本发明公开了RNF138作为预测结直肠癌对SC75741治疗敏感性的生物标志物的应用。本发明还公开了相关试剂，试剂盒，用于改善结直肠癌患者预后以及提高结直肠癌患者对NF‑κB抑制剂敏感性的方法和药物，上述研究成果为临床治...
- 宋伟赵宏刘长征应建明黄容路亚岚
- 文献传递
- 人干细胞因子受体膜外区1～3免疫球蛋白样结构域的表达、纯化及活性被引量：2
- 2006年
- 目的 在原核和真核细胞中表达人干细胞因子受体（c-Kit）配体结合区膜外N端1～3免疫球蛋白样结构域（c-Kit/Ig1～3）,研究其配体结合活性.方法 采用重叠延伸PCR定点诱变法合成c-Kit/Ig1～3双突变片段（c-Kit/Ig1～3DM）,构建pET16b-c-Kit/Ig1～3DM表达质粒,转化E.coli BL21（DE3）诱导表达,稀释复性,镍柱纯化.将C端添加组氨酸标签的c-Kit/Ig1～3基因克隆入真核表达载体pEAK12中,转染HEK293 ET细胞构建c-kit/Ig1～3高效表达细胞株,从细胞培养上清中使用镍金属螯合柱收集纯化蛋白.His-tag pull-down和酶联免疫结合实验检测融合蛋白配体结合活性.结果 在大肠杆菌中c-Kit/Ig1～3^DM以包涵体形式表达,复性后配体结合活性很低.在HEK293 ET细胞中筛选到2个高效表达c-Kit/Ig1～3的细胞株,上清表达量为2μg/ml,融合蛋白相对分子质量为58 000;受体配体结合实验显示真核表达的c-Kit/Ig1～3有明显的干细胞因子特异结合活性,解离常数Kd值为9.39 nmol/L.结论获得了具有较高配体结合活性的c-Kit/Ig1～3融合蛋白.
- 苏林刘长征邓艳春杨克恭梁植权陈松森
- 关键词：HIS-TAG
- 胃癌类器官在基础研究与临床应用中的进展
- 2024年
- 胃癌在全球癌症发病率和死亡率中均位居第5,具有高度的侵袭性和异质性,但由于缺乏表征胃癌发生进展特性的研究模型,胃癌的研究和治疗比较局限。胃癌类器官是一种在体外培育而成的多细胞三维结构,能够模拟原发胃癌的结构和功能,在建立胃癌研究模型、模拟体内肿瘤微环境、药物高通量筛选、发现治疗新靶点、预测临床治疗反应、指导个体化治疗等方面拥有巨大的应用潜力与发展前景。本文对胃癌类器官在基础研究与临床应用中的进展进行综述,以期推动临床前基础研究的进展,为胃癌的临床治疗提供支持。
- 刘保清黄容卢艳李凯张宁刘长征宋伟
- 关键词：胃癌肿瘤微环境
- 人干细胞因子模拟肽与c-JUN亮氨酸拉链融合蛋白的原核表达和生物学功能鉴定被引量：1
- 2010年
- 将两种人干细胞因子(hSCF)模拟肽(CS2和LS2)分别与c-jun亮氨酸拉链在大肠杆菌中融合表达,比较模拟肽与融合蛋白的生物学活性。通过搭桥PCR的方法,构建分别含有CS2和LS2与c-jun亮氨酸拉链融合蛋白及单独c-jun亮氨酸拉链编码序列的三种原核表达质粒pET30a-CSJ,pET30a-LSJ和pET30a-Jun,在E.coli BL21中进行表达,经镍柱和Sephadex G-50柱纯化后,SDS-PAGE和质谱法检测重组融合蛋白(CSJ,LSJ)和c-Jun的理化性质,MTT法检测融合蛋白刺激UT-7细胞增殖的活性。结果显示CSJ,LSJ和c-jun在E.coli中均呈20%左右表达,经纯化后其纯度达95%以上,分子量分别为7336.08,7991.54和6672.74。细胞学活性实验显示:与CS2和LS2相比,CSJ和LSJ促进UT-7细胞增殖的活性提高约1000倍。在大肠杆菌中成功表达了hSCF模拟肽与c-jun亮氨酸拉链融合蛋白,融合蛋白活性显著高于合成的hSCF模拟肽。
- 苏林孔燕刘长征杨克恭陈松森
- 关键词：人干细胞因子模拟肽融合蛋白亮氨酸拉链
- 一种有效进行类器官处理及分析的自动化系统
- 一种有效进行类器官处理及分析的自动化系统及方法，该系统包括由控制结构控制的分装单元，培养单元，离心结构，移动结构，处理单元与分析单元；还包括接收结构；接收结构接收类器官的液体；控制结构控制移动结构移动接收结构在不同的单元...
- 余佳宋伟刘长征梁俊波邹冬玲
