刘湘
- 作品数：12 被引量：10H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 多聚嘧啶序列结合蛋白的表达、纯化及其与HBV转录后调节元件RNA结合的分析
- 2008年
- 目的在大肠埃希菌中表达并纯化多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract binding protein,PTB)-His融合蛋白,并鉴定PTB与HBV转录后调节元件(HBV posttranscriptional regulatory element,HPRE)RNA的体外结合。方法构建PTB-His融合蛋白的原核表达载体,经IPTG诱导表达后,用亲和层析的方法进行纯化。用磁珠结合与Western印迹的方法,验证PTB与HPRE RNA在体外的特异性结合。结果成功构建了PTB-His融合蛋白的原核表达载体,并在体外大量表达后用亲和层析的方法得到了高纯度的PTB-His融合蛋白。磁珠结合沉淀与Western印迹实验证明PTB与HPRE RNA在体外能特异性的结合。结论体外表达的PTB融合蛋白能与HPRE RNA特异性的结合。
- 程丽英李毅蔡雪飞刘湘黄爱龙汤华
- 关键词：原核表达载体
- 乙型肝炎病毒X蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备和鉴定
- 乙型肝炎是全球范围的严重公共卫生问题,全球感染HBV人数已经超过4亿,我国更是慢性乙型肝炎高发区。目前的研究表明,HBV诱导机体免疫反应,直接或间接地改变肝脏细胞的结构和功能,引发肝脏细胞的凋亡、坏死或癌变。其中,HBV...
- 刘湘
- 关键词：HBVX蛋白单克隆抗体
- 文献传递
- 利用基因敲入技术在肝癌细胞系中稳定表达HBV的X抗原被引量：1
- 2008年
- 目的利用基因诱捕载体整合到人类肝癌细胞系SMMC7721细胞的染色体基因中,建立稳定表达HBx蛋白的细胞系。方法通过电击转染将基因诱捕载体pU17导入人类肝癌细胞系SMMC7721细胞,经G418筛选,报告基因X-gal染色,PCR,Western印迹等方法检测HBxDNA的存在和蛋白质的表达。结果得到永久性高表达诱捕载体报告基因X-gal的阳性克隆;用Cre-LoxP置换系统,将构建好的HBx全长片段与诱捕载体的报告基因部分交换,HBx全长片段完整地整合在SMMC7721细胞的染色体基因中,并能从该细胞系中检测到HBx抗原。结论本实验提供了一种新的稳定表达蛋白的方法。该细胞系为制备、纯化X抗原和研究X基因调控提供了实验材料。
- 黄婷婷程丽英李毅蔡雪飞刘湘黄爱龙汤华
- 关键词：基因整合
- HBV X蛋白的生物学功能及分子机制
- 2007年
- 乙型肝炎是全球范围的严重公共卫生问题,据有关资料显示[1],全球感染HBV人数已经超过4亿,而我国又处于慢性乙型肝炎高发区,其中HBSAg的携带率约占总人口的14%.目前的研究表明,HBV诱导机体免疫反应,直接或间接地改变肝脏细胞的结构和功能,引发肝脏细胞的凋亡、坏死或癌变.其中,HBV X基因所编码蛋白HBx是一个重要的多功能调节因子,它通过调节转录活性、信号传导途径、基因毒性压力反应、蛋白质降解等方式,不仅影响HBV的复制和增殖,而且影响到宿主细胞的细胞周期调控、细胞凋亡以及细胞癌变.本文将就HBx蛋白的生物学功能及分子机制研究进展做一综述.……
- 刘湘赵春景黄爱龙
- Heparin Sulphate D-glucosaminyl 3-O-sulfotransferase 3B1 plays a role in HBV replication
- 黄爱龙张祯祯刘湘苏怀彬罗强陈娟柯子斌
- 中国大鲵来源的水凝胶用于局部缓释药物的初步研究
- 目的：近年来，由于全身大剂量使用某些药物时存在的毒副作用问题，局部药物治疗得到越来越多的关注。局部药物治疗不仅可以降低全身大剂量用药时可能引起的全身毒性问题，而且可以提高药物的生物利用度。但传统局部药物治疗仍存在一些不足...
- 刘湘
- 关键词：创面敷料水凝胶药物释放伤口愈合
- 文献传递
- 利用绿色荧光蛋白进行microRNAs靶点分析的研究被引量：1
- 2012年
- 目的利用绿色荧光蛋白作为报告基因,研究微RNAs(microRNAs)与靶点相互作用。方法在pEGFP-C1下游非编码区插入含miR-122a作用靶序列HCV 5′UTR,构建pEGFP-UTR载体,将miR-122a与pEGFP-UTR共转染HEK293细胞,观察增强绿色荧光蛋白EGFP表达强度变化,并与双荧光素酶报告系统比对。结果 miR-122a能明显抑制含UTR靶序列的EGFP蛋白表达,与双荧光素酶报告系统相比,绿色荧光蛋白在检测灵敏度上与双荧光素酶相接近。结论利用绿色荧光蛋白作为报告基因,能够清楚直观反映miRNAs与靶点作用情况。
- 陈可刘湘
- 关键词：微RNAS靶点报告基因
- 丙型肝炎病毒F蛋白原核表达载体的构建、表达和纯化被引量：2
- 2009年
- 目的:构建丙型肝炎病毒(Hepatitis Cvirus,HCV)F蛋白的原核表达载体,表达pET32a(+)-HCVF融合蛋白。方法:根据丙型肝炎病毒F基因的全序列设计引物,以HCV1a型cDNA质粒H/FL为模板,通过PCR方法扩增得到F基因的编码区序列,将其定向克隆于含有6×Histag的原核表达载体pET32a(+),转化大肠杆菌JM109,经菌落PCR筛选,双酶切和测序鉴定阳性克隆后,转化大肠杆菌BL21,采用IPTG诱导表达融合蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳分析和Western-blot检测鉴定,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化。结果:F基因以正确的方式插入到pET32a(+)载体中,重组质粒转化大肠杆菌BL21后经IPTG诱导表达,出现了与预期分子量相符的蛋白条带,该蛋白通过Westernblot检测具有6×Histag蛋白的免疫学活性。结论:成功构建了丙型肝炎病毒F蛋白的原核表达载体pET32a(+)-HCVF并表达和纯化出重组融合蛋白,为进一步研究F蛋白的生物学功能奠定了基础。
- 高亚丽刘娇刘湘汤华陈沂蔡雪飞唐霓
- 关键词：丙型肝炎病毒F蛋白原核表达
- 用基因捕获法制作鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因“敲出”小鼠被引量：5
- 2005年
- 目的分析鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因在小鼠生长发育过程中的功能。方法用特殊的捕获载体导入小鼠ES细胞中,5′RACE方法鉴定成功地捕获鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因(Oazin)后,由这种ES制作了Oazin“敲出”小鼠。结果Oazin“敲出”小鼠捕获载体位于Oazin基因启动子上游,Qazin基冈的转录被抑制。结论Oazin“敲出”小鼠为分析Oazin基因的功能提供了有用的实验材料。
- 刘湘汤华唐任宽荒木喜美山村研一
- 关键词：ES细胞小鼠生长发育
- 利用Cre-LoxP置换系统在肝癌细胞系中稳定表达HBV的P抗原蛋白
- 2008年
- 利用基因诱捕载体整合到人类肝癌细胞系SMMC7721细胞的染色体基因中,得到永久性高表达诱捕载体报告基因X-gal的阳性克隆,再用Cre-LoxP置换系统,将构建好的HBV-P全长片段与诱捕载体的报告基因部分交换,HBV-P全长片段完整的整合在SMMC7721细胞的染色体基因中,得到了稳定表达HBV-P蛋白的细胞系。该细胞系为制备、纯化P抗原和研究HBV-P的基因调控提供了实验材料。
- 李毅张小花张文露刘湘杨琴黄爱龙汤华
- 关键词：CRE-LOXP
