刘毓
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- ICAP1α及突变体T38A、I138A在内皮细胞ECV304整合素β1内化中的作用
- 2009年
- 目的:探讨ICAP1α及突变体T38A、I138A在内皮细胞ECV304内化整合素β1中的作用和机制。方法:构建pAAV-ICAP1α及其突变体pAAV-T38A和pAAV-I138A真核表达载体,转染ECV304。ECV304分为ICAP1α组、T38A组、I138A组、绿色荧光蛋白(GFP)组和未转染组,用NHS-SS-Biotin标记整合素β1,并利用生物素-亲和素系统以及Westernblot检测整合素β1内化情况。结果:各组细胞转染的质粒均稳定表达;Westernblot检测ICAP1α组、T38A组、I138A组、GFP组、未转染组内化的整合素β1相对光密度值分别为1.07±0.04、0.68±0.06、0.70±0.02、0.87±0.06、0.88±0.04;与GFP组和未转染组比较,ICAP1α组整合素β1内化明显增多(P<0.05);与GFP组、未转染组和ICAP1α组比较,T38A组和I138A组整合素β1内化明显减少(P<0.05),GFP组与未转染组无差别(P>0.05)。结论:转染ICAP1α后内皮细胞ECV304表面整合素β1内化增加,而转染T38A和I138A后内皮细胞ECV304表面整合素β1内化减少;ICAP1α可能通过第38位的苏氨酸残基(38Tyr)和第138位的异亮氨酸残基(138Ile)调控整合素β1的内化。
- 程忠良秦瑾刘正湘林敬阳刘毓左后娟汪道文
- 关键词：整合素Β1突变体细胞黏附因子内化小分子蛋白质信号传递机制
- 突变型pAAV-CD151真核表达载体的构建与鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的构建CD151两种突变体,为研究CD151的功能及CD151-整合素复合体的功能奠定基础。方法以pAAV-CD151质粒为模板,采用定点突变技术,构建整合素α3β1/α6β1结合缺陷QRD突变体(pAAV-CD151-QRD-AAA194-196突变体)和CD151囊泡运输基序缺陷的ARSA突变体(pAAV-CD151-YRSL-ARSA245-248突变体),并包装两种突变体的重组腺相关病毒。结果经过测序鉴定成功构建了CD151的QRD和ARSA突变体,亦成功包装了重组腺相关病毒,病毒滴度符合本实验要求。结论成功构建CD151两种突变体并包装成重组腺相关病毒,为进一步研究CD151的功能和作用机制奠定了基础。
- 林敬阳秦瑾刘正湘刘毓程忠良左后娟汪道文
- 关键词：CD151基因定点突变重组腺相关病毒
- CD151基因对前列腺癌细胞增殖、转移的促进作用及其机制
- 2011年
- 目的研究人前列腺癌细胞株PC3细胞转染CD151基因后其增殖和迁移能力的变化及机制。方法用FuGENE HD分别将质粒pAAV-CD151(CD151组)、pAAV-GFP(GFP组)转染入PC3细胞,并设加入等体积PBS的对照组。48 h后采用Western blot检测CD151蛋白、磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)和总ERK的表达。采用MTT法检测CD151基因对PC3细胞增殖的影响,采用Boyden趋化小室研究CD151基因对PC3细胞迁移的影响。结果与对照组和GFP组相比,CD151组的CD151蛋白表达水平明显增加(均P<0.05);磷酸化ERK的表达量亦明显高于其它两组;细胞增殖能力比对照组和GFP组明显增高[相对吸光度值分别为:(0.245 7±0.006 4)vs(0.175 2±0.007 4)、(0.179 0±0.008 4)];细胞迁移数(107.8±9.6)亦显著高于对照组和GFP组[(53.0±7.6)和(57.0±5.2),P<0.05]。结论 CD151在前列腺癌细胞的增殖、转移中起着重要作用,是肿瘤转移的重要分子基础,其分子机制可能是CD151对ERK信号通路的激活。
- 林敬阳刘正湘左后娟刘毓程忠良张洁汪道文
- 关键词：前列腺癌细胞细胞迁移细胞外信号调节激酶
- CD151激活PI3K/Akt/eNOS通路并促进小型猪缺血心肌血管生成被引量：2
- 2009年
- 目的:磷脂酰肌醇-3(羟基)激酶(PI3K)信号转导途径在生长因子促血管生成过程中起重要作用。四跨膜蛋白分子CD151如何参与PI3K信号转导途径尚不清楚。文中探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导CD151转染心肌梗死小型猪模型对心肌血管生成的影响及机制。方法:结扎左冠状动脉左前降支建立小型猪心肌梗死模型,构建并包装绿色荧光蛋白、CD151、antiCD151重组腺相关病毒,分别注射至缺血心肌组织;同时设置正常对照组。8周后用vWF相关抗原免疫组化染色并计数注射部位心肌微血管数目,Western blot检测CD151及相关信号通路分子蛋白表达。结果:术后8周rAAV-CD151组心肌组织CD151蛋白表达明显高于正常对照组、rAAV-GFP组和rAAV-反义CD151组(P<0.05)。rAAV-CD151组微血管密度[(30.20±2.35)个/视野]与正常对照组[(7.60±1.14)个/视野]、rAAV-GFP组[(14.40±1.34)个/视野]相比显著增加,rAAV-反义CD151组微血管密度[(7.20±1.30)个/视野]则明显低于其他手术组(P<0.05)。CD151表达增高促进了PI3K、p-Akt、p-eNOS的激活,促进NO的生成。结论:重组腺相关病毒携带CD151基因能有效转染心肌组织,明显增加微血管密度并激活PI3K/Akt/eNOS通路。
- 左后娟文莎刘正湘刘涛刘晓春刘毓林敬阳汪道文
- 关键词：CD151心肌梗死血管生成
- ICAP1α基因及其突变体T38A、I138A真核表达载体的构建和鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:整合素β1-ICAP1α复合体在细胞黏附等过程中介导双向跨膜信号转导,并与囊泡特异性标记物共定位。文中构建并鉴定ICAP1α基因及其突变体T38A、I138A真核表达载体。方法:以pCMV-SPORT6/ICAP1α质粒为模板,PCR扩增ICAP1α基因片段,双酶切后与AAV载体重组连接。同时采用重叠PCR定点突变法构建其突变体pAAV-T38A、pAAV-I138A表达载体。重组质粒经酶切鉴定和DNA序列测定,筛选出重组pAAV-ICAP1α、pAAV-T38A和pAAV-I138A真核表达载体。结果:阳性重组质粒酶切后测序比对鉴定,与预期序列完全相符。结论:成功构建pAAV-ICAP1α、pAAV-T38A和pAAV-I138A真核表达载体,可为ICAP1α基因及其突变体T38A、I138A的生物学功能研究提供基因材料。
- 程忠良秦瑾刘正湘林敬阳刘毓左后娟汪道文
- 关键词：整合素Β1
- CD151基因对血管内皮细胞表面整合素α3β1／α6β1表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的研究重组腺相关病毒介导的CD151基因转染人脐静脉内皮细胞（HUVECs）对整合素α3β1／α6β1表达的影响。方法包装携带CD151、CD151-QRD和CD151-ARSA的重组腺相关病毒，转染HUVECs细胞，用Western Blot和流式细胞仪检测HUVECs细胞CD151及整合素a3131／a6131的表达。结果CD-51组及其各突变体组的CD151表达均明显高于对照组（P〈0．01），但3组间互相比较CD151蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）。Western Blot及流式细胞仪检测显示CDl51组α3、α6及β1的表达明显高于对照组、CD151-QRD组和CD151-ARSA组（P〈0．05），其余各组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CD151基因转染能促进整合素α3β1／α6β1的蛋白表达，其机制可能与CD151胞外大环QRD194-196。“及C末端囊泡运输基序YRSL”。。。有关。
- 刘毓刘正湘左后娟林敬阳程忠良汪道文
- 关键词：内皮
- CD151转染心肌梗死小型猪减少心肌缺血面积并激活FAK／MAPK信号通路被引量：2
- 2009年
- 目的研究重组腺相关病毒介导CD151转染心肌梗死小型猪模型对心肌血运重建的影响及机制。方法结扎小型猪左冠状动脉前降支建立心肌梗死动物模型，分别注射CD151、antiCD151和GFP重组腺相关病毒至缺血心肌内，同时设置正常对照组。8周后13N—NH3 PET评价心肌血流灌注，Western blot检测CD151及相关信号通路分子蛋白的表达。结果术后8周，rAAV—CD151组心肌组织CD151蛋白表达明显高于正常对照组、rAAV—GFP组和rAAV—antiCD151组（P〈0．05）。rAAV—CD151组心肌缺血面积则明显低于rAAV—GFP组和rAAV—antiCD151组（P〈0．05）。CD151表达增高促进了FAK397、FAK925、ERK1／2和JNK的磷酸化激活。结论重组腺相关病毒携带CD151基因能有效转染心肌组织，明显减少心肌缺血面积，并激活FAK／MAPK通路。
- 左后娟刘涛刘正湘刘毓文莎刘晓春汪道文
- 关键词：CD151心肌梗死黏着斑激酶
