刘新欣
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目质检公益性行业科研专项项目吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 3株H9N2亚型禽流感病毒全基因组序列进化分析被引量：1
- 2015年
- 为明确3株不同源性的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)A/Chicken/Jilin/22/13(简称JL22)、A/Chicken/Jilin/24/13(简称JL24)、A/Duck/Jilin/37/13(简称JL37)基因组的遗传变异情况,本试验采用RT-PCR技术,分别扩增出3株AIV的8个基因片段,克隆后进行序列测定。结果显示,3株H9N2亚型AIV的主要致病基因均属于经典的欧亚种系。氨基酸比对发现JL22的HA氨基酸序列与A/Chicken/Hong Kong/G9/97和A/Duck/Hong Kong/Y280/97的HA氨基酸序列相比,在551位多了1个潜在糖基化位点。JL22、JL24、JL37的HA序列,在226位的氨基酸残基均为Leu,具有同哺乳动物唾液酸受体结合的特性,说明对人的感染性增强。M基因在31位上均发生了Asn取代Ser的现象,说明这些病毒对金刚烷胺产生了耐药性。由系统进化树可知3株毒株亲缘关系较远,各个基因所属分支也不具有统一性,且部分基因分别与鸡源、鸭源和猪源3种源性流感病毒株高度同源,推测这3株毒株是不同动物不同毒株经过长时间进化而发生自然重排的产物。
- 刘新欣孟庆峰王雪姚贵哲丛彦龙王伟利
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒基因组遗传进化分析
- 新孢子虫抗原及疫苗研究进展被引量：5
- 2015年
- 新孢子虫病是由犬新孢子虫(Neospora caninum)寄生于牛、羊和犬等多种动物细胞内引起的一种原虫病。新孢子虫寄生于宿主体内可导致孕畜流产或产死胎,以及新生幼畜运动神经障碍和神经系统疾病,给畜牧业造成了很大的经济损失。近年来对新孢子虫抗原蛋白在虫体免疫中的作用研究成为新孢子虫病免疫学研究的热点,新孢子虫抗原蛋白将在新孢子虫疫苗研制中发挥作用。目前还没有预防新孢子虫疫苗投入市场的报道。论文对新孢子虫的抗原蛋白及其疫苗的研究进展进行概述,为疫苗的研制及相应产品的研发提供参考。
- 王雪孟庆峰刘新欣王琪姚贵哲王伟利
- 关键词：新孢子虫抗原疫苗
- 森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库的构建及差异基因的分析
- 2014年
- 目的构建森林革蜱（Dermacentor silvarum）半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,分析差异基因。方法以森林革蜱半饱血雄蜱为实验组（tester）,未吸血雄蜱为对照组（driver）,分别提取总RNA,SMARTER PCR合成双链cDNA,RsaⅠ酶切后连接接头并进行抑制消减杂交。巢式PCR扩增杂交产物,经柱纯化后连接至PMD-18T中,转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞,进行蓝白斑筛选,并计算文库滴度和重组率。随机挑选阳性克隆,反向Northern杂交（Northern blotting）和RT-PCR法检测抑制消减杂交cDNA文库的消减效率。随机选取差异基因阳性克隆送测序,利用Blastn和Blastx对测序结果进行核酸种类同源性分析和蛋白种类同源性的比对和功能预测。结果电泳结果显示,森林革蜱半饱血雄蜱和未吸血雄蜱的ds cDNA均呈弥散拖影,大小在500bp以上,经RsaⅠ酶切后,大小在100～1000 bp;接头连接效率大于25%。巢式PCR结果显示,消减的ds cDNA呈聚集条带,大小在250～500 bp。构建的森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库的滴度为700 000 pfu/ml,重组率为88.5%（239/270）。反向Northern blotting检测结果显示,当以森林革蜱半饱血雄蜱单链cDNA为探针时,消减文库信号较强;以未吸血雄蜱单链cDNA为探针时,消减文库信号较弱。RT-PCR结果显示,随机选取的8个阳性克隆中,有5个在半饱血状态下表达上扬,抑制消减杂交cDNA文库消减效果较好。115个阳性克隆测序得到87个差异表达序列标签（ESTs）,大小为200～800 bp。Blastn分析结果显示,87个序列中,与其他蜱基因有同源性的53个,同源性为70%～98%,与库蚊、甲虫和果蝇等其他昆虫基因有同源性的34个,同源性为32%～65%。Blastx预测结果显示,序列中片段表达的蛋白包括参与吸血和血液消化的不同酶类,主要功能为能量代谢、信号传导和转录调节等。结论建立了森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,差异基因
- 刘琪王伟琳孟庆峰徐展崔洁刘新欣王伟利
- 关键词：抑制消减杂交CDNA文库差异基因
