傅林锋
- 作品数：31 被引量：46H指数：5
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 清洁级豚鼠的饲养和培育
- 1996年
- 清洁级豚鼠的饲养和培育宁磊，傅林锋，楼卫，陈国怀，张风琴，左谦益，吴祥林（卫生部兰州生物制品研究所实验动物室，兰州市７３００４６）豚鼠是生物学研究和生物制品、药品生产中广泛应用的一种实验动物。我所大群繁殖生产的豚鼠系普通级远交系封闭群动物，饲养于开放...
- 宁磊傅林锋楼卫陈国怀张风琴左谦益吴祥林
- 关键词：清洁级颗粒饲料实验动物饲喂试验病理解剖
- 重组鼠疫组分疫苗毒理学研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究重组鼠疫组分疫苗的毒理学作用以评价其安全性,为进一步临床研究提供实验依据。方法对重组鼠疫组分疫苗进行急性毒性试验,将疫苗1次给予小鼠后,观察所产生的毒性反应和死亡情况,及小鼠对该药物的最大耐受量。分别进行小鼠和豚鼠的异常毒性试验,观察动物有无异常反应,7d后每只动物体重变化。进行家兔的局部刺激试验,注射给药后对动物和注射部位进行肉眼观察,取注射局部皮肤组织进行病理检查。进行豚鼠的全身过敏试验,将致敏的动物静脉快速注射攻击,观察豚鼠有无过敏症状。结果2种浓度疫苗经腹腔和皮下2种途径注射小鼠,均未引起小鼠的异常症状和死亡,小鼠对重组鼠疫组分疫苗的最大耐受量大于10000μg/kg。小鼠和豚鼠的异常毒性试验表明,注射后7d每组动物均全部健存、无异常反应,且7d后每只动物体重均有增加,均符合2005年版《中华人民共和国药典》三部要求。局部刺激试验中疫苗对家兔注射局部皮肤未引起明显的组织病理学改变。全身过敏试验未出现任何异常反应。结论重组鼠疫组分疫苗的急性毒性试验、异常毒性试验、局部刺激试验和全身过敏试验毒理学实验结果显示,重组鼠疫组分疫苗用皮下注射的途径进行免疫是安全的。
- 魏东王秉翔李恪梅苏城傅林锋王国治
- 关键词：鼠疫鼠疫苗毒理学
- 鼠疫菌V抗原基因在大肠杆菌中的克隆及表达被引量：5
- 2003年
- 从鼠疫杆菌野毒株总DNA中利用PCR方法扩增出V抗原编码基因 ,将此基因克隆到大肠杆菌的表达质粒pET 42b( + )中 ,经IPTG诱导后 ,在大肠杆菌BL2 1 (DE3)细胞中成功地表达出鼠疫菌V抗原蛋白。目的蛋白表达量占菌体总蛋白的 32 8%。
- 傅林锋王秉翔李启明雷清蒋琳沈心亮
- 关键词：鼠疫菌大肠杆菌克隆
- 炭疽灭活和裂解芽胞抗原免疫家兔后血清中的IgG抗体应答
- 2010年
- 炭疽杆菌芽胞在炭疽免疫中发挥基本作用。实验中以炭疽活芽胞疫苗为原形,建立了制备灭活和裂解炭疽芽胞的方法,研究了各种灭活和裂解炭疽芽胞疫苗不同浓度、不同剂次免疫家兔的抗芽胞和毒素IgG应答,总结分析了各种灭活和裂解炭疽芽胞疫苗用于新疫苗成分之一的可能性。甲醛灭活炭疽芽胞疫苗设芽胞浓度2.5×108剂量组、5×108剂量组、1×109剂量组,于0、4、8周时3次免疫。在3剂免疫后血清抗炭疽芽胞IgG水平持续升高,首次免疫后4、8、12周时家兔血清中抗芽胞IgG几何平均滴度可达到600～16000。裂解炭疽芽胞疫苗的制备和动物免疫中,只采取了2.5×108芽胞浓度,两剂免疫,免疫时间为0、4周。在首次免疫后4、8、12周时家兔血清中抗芽胞IgG几何平均滴度分别为362、776和388。各时间点采集的家兔血清未能测出或只测出极微量的抗炭疽毒素IgG。通过上述研究认为,以裂解炭疽芽胞抗原作为炭疽疫苗成分之一,其抗原性和免疫原性是适宜的;免疫剂量可以设定为2.5×108芽胞浓度上下;免疫次数可定为2剂间隔1个月。
- 韩少波尤明强惠一鸣傅林锋胡丽娜魏东王秉翔
- 关键词：炭疽杆菌炭疽疫苗
- 二甲基三十六烷基铵-卡介苗多糖核酸在结核亚单位疫苗中的佐剂效应被引量：2
- 2009年
- 目的探讨二甲基三十六烷基铵（DDA）、卡介苗多糖核酸（BCG—PSN）作为结核病融合蛋白疫苗佐剂的免疫效应。方法采用热酚法制备BCG—PSN，与DDA联合作为融合蛋白AMM（Ag85B—MPT64 190-196-Mtb8．4）佐剂免疫小鼠，设卡介苗、生理盐水、弗氏不完全佐剂（IFA）及单独应用DDA或BCG—PSN一种佐剂的各组作为对照。应用ELISA和酶联免疫斑点法检测免疫小鼠的体液与细胞免疫反应。结果分离培养疫苗免疫小鼠的脾脏淋巴细胞，用特异性抗原Ag85B刺激后，AMM＋DDA＋BCG—PSN疫苗组、AMM＋DDA组和卡介苗组小鼠每1×10^6个脾淋巴细胞分泌γ-干扰素的细胞数分别为222±79、259±85和230±64，均明显高于AMM＋PBS组（40±4）、AMM＋IFA组（10±3）、AMM＋BCG．PSN组（132±18）和生理盐水组（8±4），差异有统计学意义（t值为2．923—7．118，均P〈0．05）；与单用DDA组比较，添加DDA和BCG—PSN两种佐剂的疫苗组小鼠血清抗体滴度Ig2／IgG，较高（0．125和0．025），但γ-干扰素分泌水平没有增高。结论AMM＋DDA＋BCG—PSN结核病亚单位疫苗能够引起较强的Th1细胞免疫为主的免疫反应，DDA＋BCG—PSN（尤其是DDA）具有增强结核病亚单位疫苗Th1细胞免疫应答的佐剂效应。
- 宋楠楠王秉翔史大中傅林锋雒彧于红娟韩少波焦磊郄亚卿王洪海张颖祝秉东
- 关键词：结核疫苗亚单位卡介苗
- 小白鼠嗜肺巴氏杆菌的分离鉴定及其动物感染试验
- 1999年
- 嗜肺巴氏杆菌（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌａｐｎｅｕｍｏｔｒｏｐｉｃａ）通常潜伏在小白鼠呼吸道中，是一种条件性致病菌，但它可使原发性病原如肺霉形体或仙台病毒所致的肺炎复杂化，成为继发感染的第二致病菌。除呼吸道以外，嗜肺巴氏杆菌也能引起结膜炎、眼炎、泪腺炎以及尿...
- 傅林锋陈国怀王赟蒋仲芳宁磊
- 关键词：小白鼠嗜肺巴氏杆菌动物感染
- 重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原制备工艺的建立被引量：2
- 2011年
- 目的建立稳定、高效的重组鼠疫耶尔森菌LcrV抗原工程菌的发酵与纯化工艺。方法研究LcrV工程菌pET-V/BL21(DE3)在试管和三角摇瓶中的生长和表达规律,对种子培养基、IPTG诱导时机、诱导时间及诱导浓度进行优化,并放大至30 L发酵罐培养,建立稳定的发酵工艺。收获菌体,经冻融、离心收集蛋白溶液,高压匀浆处理后,分别采用Q.Sepharose HP阴离子交换层析、Phenyl Sepharose 6 FF(hs)疏水层析及Superdex 75 pg凝胶过滤层析三步柱层析纯化,建立稳定的纯化工艺,连续纯化3批,并按《中国药典》三部(2010版)的相关要求进行全面检定。结果经优化的条件培养及诱导表达,工程菌的收菌密度(A600值)可达34,LcrV抗原的表达量达36%,含量为1.6 g/L。发酵产物经柱层析纯化,LcrV产量高于140 mg,纯度大于95%,蛋白总回收率达8.5%以上。各项检定指标均符合《中国药典》三部(2010版)的相关要求。结论已建立了稳定的、适合规模化生产的LcrV制备工艺,为新型鼠疫组分疫苗的研制奠定了基础。
- 胡丽娜常娅莉魏东万艳马维民傅林锋王革吴智远韩少波王秉翔
- 关键词：大肠杆菌发酵纯化
- 布鲁氏菌BP26蛋白的表达纯化及其抗原性的研究被引量：8
- 2009年
- 目的获得布鲁氏菌感染血清学诊断优势抗原BP26重组蛋白。方法应用PCR技术从布鲁氏菌减毒株(104M)中扩增出bp26目的基因片段,将其克隆于表达载体PET30a中,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,用亲和层析纯化BP26重组蛋白,然后分别用Western-blot,间接ELISA检测其抗原性。结果DNA测序及酶切鉴定证实PET-30a/bp26原核表达载体构建成功,并在大肠杆菌中高效表达,免疫印迹和间接ELISA实验证明BP26重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清产生特异性结合。结论成功获得了布鲁氏菌中序列全长为696bp,编码232个氨基酸的BP26蛋白,通过血清学反应证实,该蛋白为人和动物布鲁氏菌病临床诊断试剂盒的研发奠定了基础。
- 宫晓炜景涛王国治李恪梅王秉翔傅林锋
- 关键词：布鲁氏菌抗原性
- 鼠疫溶菌疫苗免疫小鼠的体液免疫应答被引量：6
- 2008年
- 为选择以F1抗原为主要有效成分的鼠疫溶菌疫苗(Whole cell lysate of Yersinia pestis vaccine,WCLY)的免疫程序,设计了这组试验。在37℃培养鼠疫EV菌,通过超声波裂解法制备鼠疫溶菌疫苗。设计(0,2周)、(0,4周)、(0,2,4周)三种免疫程序,以每剂总蛋白量7.9μg、31.5μg和126.0μg三个剂量皮下接种NIH小鼠。分别在第一针免疫后2、4、8、12周采集血清,通过间接ELISA检测抗鼠疫菌F1抗原和总抗原抗体。结果显示:免疫后血清抗体上升很快,2周内即可测出;无论哪种免疫程序,至12周时抗体滴度仍保持高水平;加强免疫后,抗体水平在4周或8周达到较高,可与活疫苗免疫者相比;溶菌疫苗的接种剂量为7.9μg时,动物只出现轻度不良反应。提示鼠疫溶菌疫苗需要两剂免疫,最短可间隔2周,接种剂量应不超过7.9μg,疫苗中应富含F1抗原。
- 傅林锋常娅莉裴明玉韩少波马维民王秉翔
- 关键词：鼠疫菌体液免疫应答
- 重组鼠疫疫苗的研究
- 鼠疫是由鼠疫耶尔森菌引起的自然疫源性烈性传染病，其特点是发病急、传播快，易在人群中造成流行，患者死亡率极高，其危害性居37种法定传染病之首。临床主要表现为高热、淋巴结肿痛、出血倾向、肺部特殊炎症等。
本文制备了...
- 魏东傅林锋李恪梅王秉翔王国治
- 关键词：药理学药效学毒理学生产工艺
- 文献传递
