何飞龙
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：华南农业大学更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 一种修饰的抗狂犬病病毒HEP-Flury株M蛋白及其单克隆抗体的制备和应用
- 本发明公开了经修饰的狂犬病病毒的基质蛋白基因MN，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；该基质蛋白基因MN表达得到的经修饰的狂犬病病毒的基质蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述狂犬病病毒为狂犬病病毒（r...
- 郭霄峰何飞龙江飙田钦梅明珠杨先锋
- 文献传递
- 猪细环病毒2型衣壳蛋白的原核表达及纯化
- 2014年
- 本试验通过在大肠杆菌中表达衣壳蛋白,确定最优表达条件并对其进行纯化。用PCR法扩增猪细环病毒2型(TTV2)ORF1抗原基因,定向克隆至质粒pGEX-4T-1中,获得重组质粒pGEX-4T-1-ORF1。经双酶切鉴定及测序正确后转化到BL21(DE3)工程菌中,获得衣壳蛋白大肠杆菌表达株。IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,并对影响重组蛋白表达的3个因素,即诱导时间、诱导温度和IPTG浓度进行优化,确定最优表达条件。重组表达质粒PCR及双酶切鉴定结果显示衣壳蛋白原核表达载体构建正确。重组融合蛋白分子质量约80ku,主要以包涵体形式存在。37℃诱导5h表达量最多,IPTG浓度对表达量无明显影响。蛋白质串联肽谱分析检测氨基酸序列与GenBank中公布的TTV2 ORF1基因序列翻译的氨基酸序列相对应,且可被鼠抗GST单克隆抗体特异性识别。该融合蛋白首次用KCl染色切胶回收法对表达的融合蛋白进行纯化,纯化效果较好,性价比高。结果表明,成功构建了pGEX-4T-1-ORF1重组质粒,衣壳蛋白得到了高效表达及纯化,为间接ELISA的建立及单克隆抗体的研制提供了抗原。
- 刘伟朱怡平张戴婷关敏慧何飞龙杨谦郭霄峰
- 关键词：衣壳蛋白原核表达纯化
