何彩凤
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
- 供职机构：中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人源性同种异体去细胞外周神经材料标准制备方法的研究被引量：5
- 2009年
- 目的对目前文献报道使用的5种不同方法制备的人源性同种异体去细胞外周神经材料进行综合分析比较其优劣，以确定可供临床使用的标准的制备流程。方法将人源性神经按5种不同方法进行化学萃取，制备的外周神经支架材料分别行苏木精-伊红（HE）染色、免疫组化（S-100、ColⅠ）和透射电镜、氮含量测定等检测，观察5种方法去除许旺细胞、髓鞘和轴突等抗原成分以及基底膜保存完好的情况。结果分别萃取2次持续24h组神经的HE染色显示去除细胞和轴突彻底，纵切片上未见任何细胞，红染的神经内膜呈波浪状纵形排列，轴突、髓鞘结构消失而形成管柱状空隙；S-100染色呈阴性；ColⅠ染色结果可以看出其结构呈松散不规则的棕黄色结构，而其它处理组则结构相对整齐的纵向带状结构。透射电镜显示该组与各处理之间髓鞘去除差异无统计学意义。氮含量测定显示该组蛋白含量比值最低。结论使用TritonX-100处理24h再分别脱氧胆酸钠24h持续萃取2次，可作为供临床使用的制备人源性去细胞同种异体神经支架材料的标准流程。
- 易建华刘小林朱家恺朱庆棠李智勇胡军向剑平江丽何彩凤
- 关键词：外周神经神经支架化学萃取
- 周围神经功能束三维可视化中完整信息的二维全景图像获取被引量：5
- 2010年
- 目的探讨用于周围神经功能束三维可视化重建的带完整信息的神经断面二维全景图像获取的关键技术。方法新鲜成人截肢腓总神经及尺神经标本各一段，以4根成年女性头发作为标志线，连续冰冻切片，乙酰胆碱酯酶组织化学染色；分别以100倍光学显微镜下分区摄影后拼接及光学扫描仪和体视全景数码成像仪一次性获取全景图像，观察染色前后人发标志点贴片情况，比较不同全景图像效果；以数码全景成像仪获取染色前、后同一切片的全景图像，通过PhotoshopCS2处理获取含4个完整定位标志点的神经断面二维全景图像。结果体视全景数码成像仪一次全景成像精确，功能束易于鉴别，基本具备高倍光学显微镜下拼接图像的特点，且获取简单快捷；二次成像Photoshop合成图像功能束轮廓吻合良好，标志点定位精确，操作简单快捷。结论结合高像素体视全景数码成像装置一次性全景数码成像、二次成像技术和Photoshop图层处理技术，可用于海量获取带完整信息的神经断面二维全景图像进行三维重建，提高重建效率及精度，可为临床上周围神经损伤修复方式的选择以及组织工程神经的构建提供直观的解剖依据。
- 张毅刘小林卢昊戚剑何彩凤罗鹏
- 关键词：周围神经三维重建全景图像可视化
- PKH26标记法在组织工程神经种子细胞体内示踪中的应用被引量：2
- 2010年
- 目的探讨PKH26标记骨髓间充质干细胞（BMSCs）的效果及其应用于组织工程神经种子细胞体内示踪实验的可行性。方法取Wistar大鼠股骨和胫骨的骨髓，用全骨髓贴壁的方法分离、培养BMSCs。用PKH26荧光染料进行标记，荧光显微镜下观察标记效果，流式细胞仪检测荧光标记率，MTT法测定细胞的活性，体外成脂和成骨诱导鉴定细胞的分化能力，并与未标记细胞进行比较；使用显微注射的方法将BMSCs植入去细胞神经支架内制备成组织工程神经，于体外培养3d、5d,7d、14d，行组织切片，观察BMSCs在支架内存活、迁移的情况。另外．将体外构建组织工程神经桥接Wistar大鼠坐骨神经15mm的缺损，于术后1周、d周、6周、8周取出移植物，行组织切片观察植入的BMSCs在支架内的存活情况。结果PKH26能有效地标记BMSCs，标记率达95％以上．标记后细胞活性及诱导成骨成脂分化能力与未标记细胞无明显差异。在体外培养的环境下，BMSCs能在去细胞神经支架里粘附生长，并沿着支架迁移；在体内外周围神经再生的微环境下，BMSCs可存活8周以上。结论PKH26荧光染料标记法是一种有效的标记BMSCs的方法．可用于组织工程神经种子细胞体内示踪的研究。
- 黎建文李智勇朱庆棠胡军何彩凤刘小林江丽
- 关键词：周围神经
- 家兔腰段脊神经后根组织化学特点及显微结构的研究
- 2011年
- 目的:通过观察家兔腰段脊神经后根不同部位神经小束的分布形态及Ⅰa类传入神经纤维的含量及分布特点,为选择性脊神经后根切断术(SPR)选择手术部位提供参考。方法:6只成年新西兰白兔,显微解剖腰3(L3)～腰5(L5)脊神经后根,分别行圆锥起始部、中段及椎间孔部冰冻切片、HE及乙酰胆碱酶(AChE)组织化学染色,观察Ⅰa类传入纤维在L3～L5脊神经后根神经束中的组织化学和分布特点及不同部位神经小束的分束情况;Image-ProPlus6.0图像分析软件进行不同小束Ⅰa类传入纤维计数分析。结果:后根神经小束在圆锥起始部间隔较开,排列较规则,大致平行排列;后根中间部各神经小束未见交叉或再次分束、各小束间距离缩小,排列趋于紧密;椎间孔部各神经小束之间的距离进一步缩小,排列更加紧密;HE染色显示家兔后根神经小束内Ⅰa类传入神经纤维分布均匀,直径粗大,轴突深染,髓鞘不着色;AChE染色发现脊神经后根Ⅰa类传入神经纤维染色为阴性,轴突不着色,髓鞘也不染色;后根神经小束AChE浅染组Ⅰa类传入神经纤维含量和含量百分比均高于深染组(P<0.05)。结论:家兔腰段脊神经后根分束固定,不同部位神经小束排列不同,圆锥部较椎间孔部易于分离;Ⅰa类传入神经纤维在不同神经小束分布不均匀,在AChE染色中浅染含量相对较高,深染的神经小束Ⅰa类传入神经纤维含量相对较少。
- 张毅卢昊程钢刘小林杨俐敏何彩凤
- 关键词：脊神经后根组织化学染色
- 基于二次成像技术标志点获取和自动配准的长段周围神经功能束三维可视化关键技术研究被引量：5
- 2010年
- 目的探讨四肢周围神经功能束三维可视化重建过程中的关键技术问题及解决方法,并验证其可行性。方法取自愿捐献新鲜成人尸体右上臂20cm尺神经标本。以4根成年女性头发作为标志线,连续横断面冰冻切片,厚15μm,层距0.5mm,共400张切片,行乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)染色;采用二次成像技术,以配置MSHTO MD90显微数码成像装置的Olympus Z61型体视显微镜于AchE染色前、后分别获取同一切片的2张全景图像,通过Photoshop图像处理软件图层叠加进行图像处理,获取含4个完整定位标志点的神经断面二维全景图像;以优化最小二乘支持向量机方法作为分类器自动识别处理图像,并利用空间变换方法实现自动配准,结合人工辅助获取功能束轮廓,通过Amira 4.1医学三维重建软件进行长段尺神经功能束三维重建,评估重建逆向还原效果。结果利用二次成像Photoshop图像处理软件处理同一张切片染色前、后的图像,图像轮廓吻合度良好,合成图像获得的标志点定位精确,操作简便快捷。优化最小二乘支持向量机方法识别精度高,误差率为8.250%;三维模型可直观观察神经内部不同性质功能束交叉融合的变化,其任意水平切割逆向还原基本吻合。结论基于二次成像技术和Photoshop图像处理软件图层处理技术的计算机自动配准可应用于长段周围神经的三维可视化重建,重建快捷,效果较好。
- 张毅刘小林钟映春唐平周家铭戚剑何彩凤
- 关键词：周围神经三维重建配准
- 猪与人去细胞神经结构与成分的对比研究被引量：2
- 2011年
- 目的 研究猪与人的周围神经脱细胞处理后其结构与成分的差别,为以猪去细胞神经替代人去细胞神经用于修复神经缺损作前期探索.方法 取健康成年猪和下肢截肢患者的胫神经,用化学去垢剂按一定程序进行脱细胞处理.通过大体观察、HE染色、甲苯胺蓝染色、免疫组织化学染色和透射电镜检查,比较猪与人的周围神经去细胞处理前后其结构、许旺细胞与轴突标志蛋白以及细胞外基质的变化.结果 经脱细胞处理后,猪与人的神经结构均略变疏松,仍保留较好的弹性和伸展性.显微镜下观察,两者均未见细胞或其碎屑残留,髓鞘消失,纤维性支架结构保持良好,S-100蛋白和神经丝蛋白（neurofilament,NF）的表达较处理前显著减弱,而层粘蛋白（laminin,LN）的表达无显著变化,神经基底膜管和神经组织的支持结构保留完好.与人去细胞神经比较,猪去细胞神经结构更疏松,神经束间细胞间质更丰富,但成分差异无显著性.结论 猪去细胞神经与人去细胞神经的结构和成分相近,可能取代人去细胞神经用于修复神经缺损.
- 何彩凤朱庆棠江丽胡军吴捷欣黎建文杨俐敏刘小林顾立强朱家恺
- 关键词：周围神经化学萃取组织学
- 猕猴脂肪干细胞体外多向分化潜能的实验研究
- 2014年
- 目的探讨猕猴来源的脂肪干细胞（ADSCs）的分离和培养方法及在体外多向分化的能力。方法健康成年雄性猕猴1只，年龄4岁，体质量4．5妇。从该猕猴胭窝深部脂肪组织中分离出成纤维样细胞，观察其生长特性，采用流式细胞仪检测其细胞表面标志，利用相应的诱导液分别诱导其向成骨细胞、脂肪细胞、施万细胞方向分化；观察诱导后细胞的形态变化，并分别用茜素红染色、油红0染色及细胞免疫荧光法检测诱导效果。结果猕猴脂肪组织分离、培养出的成纤维样细胞增殖迅速；细胞表面标志CD34、CD14、CD71、CD106、CD117、CD31、CD45、CD80、CD86及人白细胞DR抗原呈阴性表达；CD29、CD105、CD73、CD90呈阳性表达。在相应的诱导体系下可向成骨细胞、脂肪细胞、施万细胞分化，其中成脂诱导率为47．9％～61．5％（平均54．7％）；成施万细胞诱导后ADSCs胞体呈细小梭形，伸出2—3条细长突起；高表达神经胶质细胞标志蛋白S-100和胶质纤维性酸性蛋白质，平均诱导率分别为66．5％和60．6％，双重表达率平均为41．2％。结论从猕猴脂肪组织中可以分离并培养出具有较强的自我更新及多向分化潜能的ADSCs，在体外诱导条件下能分化为类施万细胞。
- 黄喜军朱庆棠江丽何彩凤郑灿镔刘小林
- 关键词：干细胞细胞分化猕猴属
