于合国 作品数:14 被引量:12 H指数:2 供职机构: 上海市计划生育科学研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 上海市“科技创新行动计划” 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
昆虫细胞杆状病毒表达系统表达重组人类ZP3蛋白的研究 2014年 目的:探讨利用重组表达系统制备重组人类ZP3(hZP3)蛋白的方法和技术难点,为hZP3蛋白的制备和应用打下技术基础。方法:构建hZP3的载体质粒pFASTBAC HTa-hZP3,在大肠杆菌宿主细胞中利用杆状病毒Bac-to-Bac系统同源重组构建重组的杆状病毒穿梭载体Bacmid,用重组的Bacmid转染Sf9细胞制备重组杆状病毒,分别表达带HIS标签的h ZP3全长蛋白(氨基酸1-424)和截短的hZP3蛋白(氨基酸23-348)。摸索重组hZP3蛋白的表达时间和纯化制备方法。结果:成功制备了表达重组人hZP3全长蛋白和截短体蛋白的Bacmid和杆状病毒颗粒,Western印迹检测表明,在Sf9细胞中较好的表达时间段为感染后72-96 h。重组表达的hZP3蛋白可以部分被钴柱亲和纯化,大量的重组hZP3蛋白不能结合到亲和介质而流穿,但确切的原因还未知。纯化得到的hZP3经荧光素Dylight Dye488标记,能与人精子结合。结论:利用昆虫细胞杆状病毒表达系统表达hZP3蛋白是可行的,可以进一步优化,但hZP3蛋白的有效富集和纯化方法是最大的瓶颈,还需要进一步摸索。 卢慧 刁华 肖玉芳 于合国 李铮 施惠娟关键词:精子 重组蛋白 调节精子运动能力及辅助生殖的化合物及其用途 本发明涉及调节精子运动能力及辅助生殖的化合物及其用途。具体而言,本发明涉及式I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备用于促进精子运动能力、延长精子运动时间的药剂、辅助生殖中的用途,以及体外促进精子运动能力、延长精子运动时间... 于合国 吴建辉 杨依婷 李玉华 刁华噻二唑烷二酮基GSK3抑制剂在调节精子运动能力中的用途 本发明涉及噻二唑烷二酮基GSK3抑制剂在调节精子运动能力中的用途。具体而言,本发明涉及下式I所示的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制精子运动能力的药剂、用于杀精的药剂、避孕药或避孕器具中的用途,式I中X、Y、R<S... 刁华 于合国 施惠娟 王健文献传递 Orionin对急性肝衰竭小鼠的保护作用及其对肝组织细胞因子水平的影响 被引量:2 2017年 目的探讨冬凌草甲素(Oridonin)对脂多糖/D-氨基半乳糖氨(LPS/D-Gal)联合诱导的急性肝衰竭(ALF)小鼠的保护作用及其对肝组织细胞因子水平的影响。方法取150只小鼠,随机分成5组,每组30只。采用LPS/D-Gal腹腔注射建立小鼠ALF模型,设生理盐水对照组、Oridonin对照组、LPS/D-Gal诱导模型组和LPS/D-Gal处理及不同剂量Oridonin干预组。采用Real-time PCR法检测肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1α、IL-1β和IL-6 m RNA水平。结果模型组小鼠48 h存活率为0.0%(0/30),而两个Oridonin干预组小鼠48 h存活率分别提高至64.5%(19/30)和80.6%(24/30,P<0.01);组织病理学检查显示模型组小鼠肝细胞呈大块或/和亚大块坏死,肝小叶结构消失,残存肝细胞肿胀、空泡变性,肝窦肿胀充血,炎细胞浸润。Oridonin干预组小鼠肝细胞坏死、空泡变性和炎细胞浸润等较模型组有明显的改善;模型组小鼠血清ALT和AST水平分别为(345.3±54.1)U/L和(500.2±53.5)U/L,明显高于对照组的[(42.3±0.6)U/L和(117.1±9.8)U/L,P<0.01],两个Oridonin干预组分别为(303.9±39.5)U/L和(340.6±2.8)U/L及[(130.2±38.3)U/L和(209.8±36.2)U/L,P<0.05];模型组小鼠肝组织TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 m RNA水平显著高于正常对照组(P<0.01),而两个Oridonin干预组肝组织TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 m RNA水平显著低于模型组(P<0.01)。结论 Oridonin对LPS/D-Gal诱导的ALF小鼠具有显著的保护作用,其作用机制可能与降低肝组织细胞因子水平有关。 邓怡林 于合国 施敏 石翠翠 范建高 李光明 刁华关键词:急性肝衰竭 脂多糖 冬凌草甲素 细胞因子 小鼠 噻二唑烷二酮基GSK3抑制剂在调节精子运动能力中的用途 本发明涉及噻二唑烷二酮基GSK3抑制剂在调节精子运动能力中的用途。具体而言,本发明涉及下式I所示的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制精子运动能力的药剂、用于杀精的药剂、避孕药或避孕器具中的用途,式I中X、Y、R<S... 刁华 于合国 施惠娟 王健文献传递 色瑞替尼对精子制动作用和质膜损伤的体外研究 被引量:1 2017年 目的研究前期筛选到的精子功能调节候选化合物色瑞替尼的体外精子制动作用和机制。方法计算机辅助精液分析(computer assistant sperm analysis,CASA)系统测定色瑞替尼对人和小鼠高活力精子20 s内的制动效果;低渗膨胀(hypo-osmotic swelling,HOS)实验、SYBR-14/PI染色探究精子质膜的完整性;用电镜观察色瑞替尼处理后精子质膜的变化;用色瑞替尼处理VK2/E6E7、End1/E6E7、Ect1/E6E7细胞,CCK-8及荧光染色法检测细胞活性。结果色瑞替尼对于(5~10)×106/mL人精子的20 s瞬间杀精最小有效浓度(minimal effective concentration,MEC)为(74.87±31.46)μmol/L,而相同条件下测到的杀精药物壬苯醇醚(nonoxynol-9,N-9)的MEC为(219.75±20.89)μmol/L。CASA系统分析表明,色瑞替尼对精子的制动作用有时间-浓度依赖关系。HOS实验及SYBR-14/PI染色法验证色瑞替尼对精子质膜有一定的损伤,并可致精子死亡。电镜显示色瑞替尼处理后的精子质膜破裂,头尾分离较多。色瑞替尼对上皮细胞有一定损伤。结论色瑞替尼对精子有快速的制动作用,具有潜在的避孕药效。 舒妮燕 于合国 王玉柱 李卫华 施惠娟 刁华关键词:小鼠 与雄性生殖相关的β-防御素家族研究进展 被引量:2 2010年 在动物中发现的抗微生物多肽家族主要有β-sheet peptide,包括α-防御素(defensins)和β-防御素、cathelicidins、protegrins、granulysin、histatins、secretory leukoprotease inhibitor、probiotics以及昆虫抗菌多肽等。对哺乳动物而言,主要的种类有cathelicidins和防御素。防御素家族包括3个亚家族,即α-防御素、β-防御素和θ-防御素。 于合国 刁华关键词:Β-防御素 雄性生殖 精子 天然免疫 附睾 β-防御素在男性不育方面的研究进展 被引量:1 2016年 β-防御素(β-defensins)是一类在男性生殖系统中大量表达并与精子功能关系密切的天然抗菌肽,与男性不育相关。β-防御素不仅通过其天然免疫活性,保持附睾上皮、管腔环境的稳定,还能中和脂多糖、抗炎并与精子直接作用而调节精子功能。最近,β-防御素已经作为精子功能检测、精子生育力评价的生物标志物被开发并连续报道。大量活性防御素的功能机制研究及其与男性不育的关系,将成为进一步开发精子功能评价生物标志物的方向之一。本文主要从β-防御素家族的精子功能相关活性及机制研究方面的进展作一综述。 舒妮燕 于合国 施惠娟 刁华关键词:Β-防御素 生物标志物 精子功能 一种哺乳动物通用的免疫避孕靶标及其特异性抗体 本发明涉及一种哺乳动物通用的免疫避孕靶标。本发明公开了一种来源于哺乳动物Bin1b蛋白的保守性抗原表位,本发明还公开了特异性与该抗原表位结合的抗Bin1b蛋白的抗体,特别是单克隆抗体,所述的抗体是一种哺乳动物通用型的抗体... 刁华 于合国 徐万祥 张永莲人β-防御素DEFB113的重组表达及活性鉴定 2012年 DEFB113为人β-防御素家族新成员,其生物学功能尚不清楚。为了探索一种可以较低成本和较高产量表达活性DEFB113多肽的方法,将编码DEFB113成熟肽的序列克隆到载体pTWIN1上,并转化至E.coliBL21(DE3)中进行表达。结果表明融合蛋白主要以可溶形式存在;重组载体中融合标签的几丁质结合域(CBD)和内含肽(intein)分别使亲和层析纯化和融合标签自剪切一步完成。最终得到DEFB113多肽的产率为6~7 mg/LLB。经活性鉴定,该重组DEFB113多肽对于S.aureus,E.coli K12D31和C.albicans均表现出较强的抑制作用;另外DEFB113无明显的溶血活性,是一种较理想的多肽抗生素。该研究为进一步研究DEFB113的生理功能以及其它人β-防御素结构与功能奠定了基础。 董靖 于合国 刁华 郭晨云 林东海关键词:原核表达 抑菌活性 溶血活性