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重组工程介导的基因突变以及新型的容纳毒性基因ccdB菌株的构建: 重组工程是一种高效的适用于体内遗传工程的方法，能适用于大肠杆菌染色体和游离型复制子，可以在任何位点实现DNA分子的重组修饰而无需受到限制性内切酶位点的制约，通过重组工程很容易获得基因敲除、点突变和基因标签的插入，是大肠杆...; 严振亚; 关键词：基因突变毒性基因 DNA序列; 文献传递

一种大肠杆菌表达菌株及用其生产N-乙酰-D-神经氨酸的方法: 本发明涉及一种基于基因组的酶催化合成N-乙酰-D-神经氨酸的方法。本方法采用的是将分别置于T7强启动子之下的来源于多形拟杆菌VPI-5482基因组中的异构酶基因BT0453和来源于大肠杆菌的醛缩酶基因nanA整合至大肠杆...; 尚广东李玲严振亚石牡丹; 文献传递

寡核苷酸介导的重组工程法构建容纳毒性基因ccdB的新型菌株被引量：1: 2016年; 毒性基因ccd B是最为常用的一种负筛选标记,ccd B基因和R6K复制子一起组成了高效的基因克隆和基因组修饰的遗传操作元件.为获得高转化效率的容纳ccd B基因的菌株,本研究采用重组工程手段,以经优化去除了错配修复的寡核苷酸与p UC骨架、含有ccd B基因的质粒p MK2010共转化,直接对含pir116基因型的大肠杆菌DH10B衍生菌株的基因组进行修饰.在筛选的10个菌株中,7个为预期的Gyr A462基因型.为消除p MK2010,构建了一个p UC骨架、氨苄青霉素抗性的诱导自剪切质粒p LS2750.p LS2750通过质粒不相容性去除p MK2010后,经诱导I-Sce I自剪切而消除.所得菌株LS027的电转化效率为6.9×10~8/mg,是对照菌株的约100倍,R6K质粒呈现高拷贝.以LS027为宿主菌的构建了系列克隆载体,以只进行基因克隆可避免载体自连的干扰.新型ccd B基因容纳菌株LS027有着基因操作方面广泛运用的潜力.; 严振亚柴美霞张青骆希尚广东; 关键词：CCD 寡核苷酸

一种大肠杆菌表达菌株及用其生产N-乙酰-D-神经氨酸的方法: 本发明涉及一种基于基因组的酶催化合成N-乙酰-D-神经氨酸的方法。本方法采用的是将分别置于T7强启动子之下的来源于多形拟杆菌VPI-5482基因组中的异构酶基因BT0453和来源于大肠杆菌的醛缩酶基因nanA整合至大肠杆...; 尚广东李玲严振亚石牡丹; 文献传递

水稻秸秆青贮饲料中可培养微生物多样性分析及优势乳酸菌的分离鉴定被引量：7: 2014年; 为探究影响水稻(Oryza sativa L.)秸秆青贮质量的腐败菌种类并筛选适合其青贮的优质乳酸菌,研究了青贮前后水稻秸秆中可培养微生物的变化并分离鉴定2株乳酸菌。使用稀释平板涂布法将青贮前后可培养微生物计数并分离纯化,限制性酶切分析ARDRA技术分析分离纯化后的微生物多样性,结合ARDRA和RAPD-PCR技术对青贮中优势乳酸菌进行分离鉴定。结果表明:青贮前后好氧或兼性厌氧细菌菌落总数由7.6×10~7 cfu·g^(-1)下降到2.43×10~6 cfu·g^(-1),真菌菌落数变化较为明显,从4.43×10~5 cfu·g^(-1)下降到86 cfu·g^(-1),乳酸菌菌落数从4.16×10~5 cfu·g^(-1)上升到6.61×10~6 cfu·g^(-1)。ARDRA聚类分析及16SrDNA测序显示青贮前存在腐败细菌芽孢杆菌(Bacillus)和致病菌阴沟肠杆菌(Enterobacter),青贮后腐败细菌主要是芽孢杆菌,腐败真菌主要为青霉菌属(Pemicillium)。筛选出的2株乳酸菌分别属于乳杆菌属(Lactobacillus casei)和片球菌属(Pediococcus ethanolidurans),需进一步验证是否可作为青贮饲料添加剂。水稻秸秆青贮后依然有腐败菌的存在,需进一步提高其青贮发酵工艺,防治有氧恶化。; 王彦苏张一凡严振亚丁成龙戴传超; 关键词：腐败菌乳酸菌

‘圣剑’洋桔梗植株高频再生体系建立及卡那霉素敏感性测定被引量：2: 2014年; 洋桔梗是国际上十分流行的盆花和切花种类。以洋桔梗‘圣剑’无菌苗叶片为外植体,研究了6-BA与NAA不同浓度组合对其不定芽再生的影响,并分别比较了不同浓度IBA和NAA诱导其生根的效果,测定了该品种在不定芽再生时对卡那霉素(Km)的敏感性。结果表明:MS+0.5 mg·L-16-BA+0.01 mg·L-1NAA为不定芽再生最适培养基,不定芽再生率达91%;1/2 MS+0.2 mg·L-1IBA为不定根再生的最适培养基,生根率达89%;抑制叶片不定芽再生的Km最低浓度为25 mg·L-1。建立了‘圣剑’洋桔梗植株高频再生体系,并确定了其对卡那霉素的敏感性,为该品种的基因工程研究奠定了基础。; 韦银凤王瑞鑫阮春燕梅谱成严振亚陈崇顺

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严振亚