万忠海
- 作品数：64 被引量：100H指数：8
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 传染性非典型肺炎限制性内切酶检测方法的研究被引量：3
- 2006年
- 目的建立一种对传染性非典型肺炎,又称严重急性呼吸综合征(SARS)准确诊断的新方法。方法利用GCG软件将已公布的SARS病毒变异品系与人类基因组、人类易感病原体进行比对分析。结果筛选出了用于检测的ScDNA核苷酸片段,并在该片段中确定特异性的酶切位点,使检测方法的准确性得以保证。结论与传统检测方法比较,限制性内切酶分析法完全克服了检测中非特异性结果的产生,使检测结果准确可靠。
- 孙非刘立侠金扩世许守民金洪涛金宁一靳玉琴刘志屹张淑芹黄伟江禹万忠海赵文彬邹啸环
- 关键词：非典型肺炎传染性非典型肺炎酶检测人类基因组SARS病毒
- 抗人ICAM-1单链抗体表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建抗人细胞间黏附分子-1(ICAM-1)单链抗体(ScFv)的表达载体,并在大肠肝菌中表达。方法从分泌ICAM-1单抗的杂交瘤细胞中提取RNA,用RT-PCR扩增抗体VH和VL基因,重叠延伸PCR扩增人ICAM-1-ScFv基因,将其连接到pET-22b(+)载体上,转化大肠杆菌BL2(DE3),IPTG诱导表达,表达产物纯化及复性后,检测特异性及活性。结果序列分析表明抗ICAM-1 ScFv基因全长为744bp,编码247个氨基酸,其中含357bp的VH基因片段和342bp的VL基因片段。表达蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的32%。经变性和复性后,纯度达80%以上,复性率达25%。Western blot和ELISA检测,ScFv均可与ICAM-1抗原特异性结合。细胞黏附试验表明ScFv能抑制ICAM-1与HSB2细胞间的黏附,其作用稍弱于亲本mAb。结论已成功构建了抗人ICAM-1的ScFv表达载体,其表达产物具有抗体特异性和活性。
- 孙红万忠海张国利吴广谋朱平岳玉环
- 关键词：细胞间黏附分子-1单链抗体活性
- 试述高等级生物安全实验室的安全防范被引量：1
- 2017年
- 高等级生物安全实验室是专门从事高致病性病原微生物研究的技术平台,因此,高等级生物安全实验室的安全防范工作在实验室管理中占有极其重要的地位。本文结合工作实际从安全防范意识、安全防范措施及实验室资源3个方面加以阐述和探讨。
- 孟轲音王承宇万忠海
- 关键词：安全防范意识安全防范措施实验室资源
- GnRH脉冲模式对FSH分泌的影响被引量：11
- 2011年
- 本文目的是进行GnRH脉冲模式对FSH分泌影响的研究。用GnRH以不同的脉冲振幅、不同的频率对GTH细胞进行刺激后,检测FSH的24 h分泌量。结果表明,FSH的24 h分泌量,以频率为120 min、振幅20 nmol/L时的GnRH脉冲模式为最高,并且随着GnRH刺激频率的增快或减慢,FSH的分泌量均呈逐渐减少趋势。所以,GnRH脉冲频率本身就是一个调控信号,不同脉冲频率GnRH对FSH表达有着明显不同的影响,在相同振幅条件下,低频脉冲刺激(120 min间隔)时FSH的分泌达到高峰。
- 王新谭建华赖小平万忠海韦旭斌
- 关键词：FSHGNRH脉冲
- 生物安全型发酵菌液中空纤维超滤系统
- 本实用新型公开了生物安全型发酵菌液中空纤维超滤系统，从发酵罐、超滤罐、超滤器到消毒罐，采用全封闭管道连接运送、超滤；一方面防止外部微生物污染，另一方面防止发酵菌液外泄；可根据需要，通过打开或关闭（控制）各个阀门，对每个装...
- 张国利姜柏涛钱军万忠海岳玉环吴广谋田园史飞于新海冯书章
- 文献传递
- 人乙酰胆碱酯酶(AchE)cDNA克隆及真核表达载体的构建被引量：2
- 2003年
- 目的 克隆人乙酰胆碱酯酶 (AchE)cDNA并构建真核表达载体。方法 根据GeneBank中hAchE核苷酸序列 ,设计并合成 1对特异性扩增hAchE的引物 ,从 18周龄引产的胎儿大脑组织中提取RNA为模板 ,利用RT PCR技术扩增出hAchEcDNA片段 ,并与pGEM T载体连接 ,转化大肠杆菌DH5α中 ,经IPTG X gal诱导培养 ,筛选白斑提取重组载体 ,经酶切和PCR鉴定及序列测定与分析 ,并构建hAchE真核表达载体pcDNA3 .1(+) hAchE。结果 已克隆的hAchEcDNA片段全长约 1.9kb ,其测序结果与基因文库中的人乙酰胆碱酯酶cDNA序列相符。结论 在国内首次利用RT PCR成功地克隆了hAchEcDNA全长 ,并构建了hAchE真核表达载体pcDNA3 .1(+) hAchE ,为进行hAchE的结构与相关功能研究和基因工程生产奠定了基础。
- 马兴元谭建华李阳芳万忠海朱平姜力孙曼霁
- 关键词：CDNA克隆真核表达载体
- 一种用于生物气溶胶试验的装置
- 本实用新型属于生物安全实验装置，涉及一种用于生物气溶胶试验的装置。该装置包括自然环境模拟模块、气溶胶发生模块、试验舱、气溶胶粒子监测模块、数据采集与控制模块。自然环境模拟模块包括风力产生装置、温度产生装置、湿度产生装置和...
- 钱军刘林娜赵思言夏志平郭振东周博王承宇高玉伟李乾学万忠海岳玉环刘文森穆玉堂何扬孙玉成田多
- 文献传递
- 牛布鲁菌O链A抗原的提纯鉴定及种特异性单克隆抗体的研制被引量：3
- 2008年
- 应用热酚法提纯牛布鲁菌544A的O链,经Sephades G-50纯化后,琼脂糖凝胶免疫扩散和SDS聚丙烯酰胺凝胶进行电泳鉴定,用牛布鲁菌544A株全菌体免疫BALB/c小鼠,用纯化的O链筛选出4株针对O链表面A抗原的种特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株4B8、1C9、1G9和1E2,4株单克隆抗体均不与羊布鲁菌16 M、大肠杆菌O157、小肠结肠炎耶尔森菌O9、鼠伤寒沙门菌、放线杆菌发生交叉反应,具有高特异性,其中4B8的亲和常数达到了8.99×108M-1,适合用于鉴定牛种布鲁菌的研究。
- 梅建军王兴龙万忠海李晓燕马云志刘锴王学理任林柱
- 关键词：A抗原
- 大鼠腺垂体细胞的体外原代培养及其GTH分泌活动的观察被引量：11
- 2010年
- 本文旨在体外进行原代培养大鼠垂体细胞并观察GTH分泌活动规律;在每日观察细胞生长状态并分组检测其FSH、LH分泌水平,及做免疫组化染色实验,连续5d;结果表明,第7天时,细胞状态最佳,FSH、LH分泌水平最高,GTH的阳性率最大;所以大鼠垂体细胞体外培养生长最旺盛的时期是第7天。
- 王新谭建华赖小平万忠海韦旭斌
- 关键词：体外原代培养
- 抗PEA受体结合区单克隆抗体的制备及鉴定
- 2007年
- 目的：探讨绿脓杆菌外毒素A（PEA）中和性单克隆抗体在预防和治疗绿脓杆菌感染中的免疫保护作用。方法：以重组绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白免疫Balb／c小鼠，将免疫鼠脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，用ELISA方法筛选细胞培养上清，采用有限稀释法对阳性孔进行克隆，3次克隆后获得4株能稳定分泌抗PEA单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1CA，1134，2E12和3C6。结果：细胞培养上清ELISA效价为4000～8000，腹水ELISA效价可达25600～51200，其中3C6抗体在细胞上的中和试验显示具有较高的中和效价。其亲和常数为8．93×10^8。结论：获得的单克隆抗体可在抗烧伤绿脓杆菌感染中发挥重要作用。
- 万忠海岳玉环杜付彬谭建华朱平
- 关键词：绿脓杆菌外毒素AELISA单克隆抗体
