哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室
- 作品数：17 被引量：89H指数：6
- 相关作者：杨金峰李容李宇崔奇齐彬彬更多>>
- 相关机构：东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室佳木斯大学基础医学院黑龙江中医药大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生理学文化科学更多>>
- 人呼吸道腺病毒通用特异检测试剂的研究及应用被引量：1
- 2008年
- 目的建立一种特异性强、灵敏度高、操作简便的呼吸道腺病毒检测方法，为临床呼吸道腺病毒通用特异诊断试剂的研发奠定实验基础。方法用生物信息学软件DNAMAN5．2．2、GeneRunner3．05、BLAST对GenBank中已收录的10个型别人呼吸道腺病毒核酸全序列进行比对分析，找m高度保守序列，设计5对腺病毒通用特异引物，同时确保PCR产物具有型别特异性。用NP-40裂解法制备模板，对引物的有效性、特异性及灵敏忡进行验证．并应用于64例急性呼吸道感染患儿咽拭子标本的检测，阳性标本的PCR产物直接测序鉴定血清型．将阳性标本接种HeLa细胞，光镜下观察细胞病变，电镜下观察病毒形态。结果BLAST结果表明，5对引物与其他病毒、细菌及人类基因组等无高度同源性，是腺病毒特异性引物。用5对引物扩增人3型腺病毒DNA，均出现阳性目的条带，但不能检测呼吸道合胞病毒和柯萨奇病毒，验证了引物的有效性和腺病毒特异性。模板稀释、病毒稀释均可检测到10。梯度，说明引物具有较高的灵敏性，同时验证了NP-40裂解法的稳定性。64例临床咽拭子标本巾检测出2例阳性标本，阳性率为3．13％（2／64）。阳性标本接种HeLa细胞，光镜下可见细胞变圆、聚集成葡萄串状、脱落等腺病毒所致细胞病变，电镜下可见细胞核内有典型的品格状排列的腺病毒颗粒。PCR产物测序结果表明，2株病毒均为B组腺病毒。结论成功设计了腺病毒通用的、特异的，同时扩增产物又具有腺病毒型别特异性的引物。用该引物建立的PCR方法检测呼吸道标本中的腺病毒DNA具有灵敏和特异的特点，适用于临床常规诊断腺病毒感染。
- 陈晶曲章义魏凤香张鸿彦王鹏王迎晨姜海英
- 关键词：聚合酶链反应
- 人腺病毒六邻体高变区蛋白的亚克隆表达及纯化
- 2019年
- 目的克隆表达人腺病六邻体高变区片段,了解其结构和功能,为研发腺病毒基因工程重组疫苗奠定基础。方法根据生物信息学软件预测的腺病毒六邻体的高变区域,选择目标基因,设计其对应的引物,并以团队保存的人腺病毒六邻体核酸序列为模板,聚合酶链反应扩增目标基因,定向插入载体pQE32中构建工程质粒。通过酶切和基因测序鉴定阳性工程质粒,并诱导其在大肠杆菌M15中高效表达带有组氨酸标记的靶蛋白,应用镍树脂亲和层析的方法分离纯化靶蛋白。结果构建了含有人腺病毒六邻体高变区片段的重组质粒,同时探索出其在大肠杆菌M15中高效表达的条件,纯化目标蛋白,其分子量约为188000,与应用生物信息学分析预测的结果相同。结论成功地克隆、表达和纯化了人腺病毒六邻体高变区片段。
- 李烨曲丽欣董妥王迎晨张哲杜溪乔路冰高虹商蕾李宇O.N.RevaV.I.Zlobin曲章义
- 关键词：人腺病毒蛋白质表达蛋白质纯化
- 人3型腺病毒六邻体蛋白同源建模及其进化轨迹分析被引量：9
- 2009年
- 用同源建模方法构建了人3型腺病毒六邻体完整的空间结构,对此结构模型的合理性进行检验,并通过基于多重序列比对的进化轨迹分析发现,不同型别的人腺病毒六邻体型特异性序列主要存在于六邻体的塔区上,结合二级结构分析,预测位于六邻体塔区表面的几个环区是型特异性中和表位的所在区域.
- 袁晓辉曲章义吴晓敏王迎晨魏凤香张鸿彦刘蕾杨志伟
- 关键词：同源建模中和表位
- 新冠病毒变异株奥密克戎的变异特点及对免疫学特性的影响被引量：31
- 2022年
- 严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome-coronavirus 2,SARS-CoV-2)新变异株奥密克戎(Omicron)的出现加剧了新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)疫情的传播。奥密克戎变异株首先在非洲发现,Pango lineage进化分类系统将该变异株划分为B.1.1.529变异株,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)将该变异株确定为"关切病毒株",命名为Omicron变异株。与以前的"关切病毒株"相比,奥密克戎变异株突变位点多,传播速度快,在感染性和免疫学特性上都有很大的变化,存在着免疫逃逸和突破现有疫苗免疫保护作用的风险。在被发现以来的一个多月时间内,该变异株已在全球77个国家和地区迅速传播,引起了全球的广泛关注。文章就奥密克戎变异株发现过程、流行现状、变异特点、免疫逃逸及防控策略等进行概述。
- 李宇张哲杜溪乔王迎晨董妥曲章义
- 关键词：免疫逃逸疫苗
- 嗜热菌Anoxybacillus sp.DL5菌株产β-葡萄糖苷酶培养基优化及产酶条件研究
- 2020年
- 目的对产β-葡萄糖苷酶的嗜热菌Anoxybacillus sp.DL5菌株进行产酶培养基优化及产酶条件研究,为下一步菌株的诱变育种提供基础。方法应用常规方法液体培养菌株,用七叶苷平板初筛和DNS(3,5-二硝基水杨酸)法复筛选择产β-葡萄糖苷酶能力较高的菌株;单因素筛选培养基最佳的碳源、氮源、Ca^(2+)浓度、Mg^(2+)浓度,对单因素筛选得到的最佳碳源、最佳氮源、Ca^(2+)和Mg2+的三个较佳浓度进行四因素三水平多因素的正交实验优化产酶培养基,并筛选出培养条件的最佳培养温度、培养基pH值。结果嗜热菌Anoxybacillus sp.均有产β-葡萄糖苷酶能力,其中DL5产β-葡萄糖苷酶活力最高;培养基单因素筛选显示最佳碳源是乳糖,最佳氮源是蛋白胨+酵母膏,最佳Ca^(2+)浓度是0.060%,最佳Mg^(2+)浓度是0.005%,差异均有统计学意义(P<0.05);多因素培养基优化结果显示:碳源0.2%、氮源0.2%、Mg2+浓度0.005%、Ca^(2+)浓度0.040%为最佳的培养基成分组合。产酶条件筛选结果显示,DL5菌株产β-葡萄糖苷酶的最佳培养温度是55℃,培养基最佳pH值是7.0,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论培养基及培养条件的优化能提高嗜热菌Anoxybacillus sp.DL5产β-葡萄糖苷酶的能力,Ca^(2+)离子、Mg^(2+)离子对菌株产β-葡萄糖苷酶有促进作用。
- 周亚南胡玉婕应长青李旭颖
- 关键词：嗜热菌Β-葡萄糖苷酶培养基优化产酶条件
- PI3KCA在子宫内膜癌中的表达及与临床病理特征的关系
- 2022年
- 目的探讨PI3KCA在子宫内膜癌(EC)中的表达及其与临床病理特征的关系。方法选取2017年9月至2019年9月在哈尔滨医科大学附属第一医院妇科住院治疗的83例EC患者作为EC组,选取同期83例子宫肌瘤患者作为子宫肌瘤组。利用反转录实时荧光定量聚合酶链反应技术检测子宫内膜组织中PI3KCA基因的表达情况;利用免疫组织化学技术检测EC组织细胞中PI3KCA相关蛋白的表达情况。评估PI3KCA表达情况与EC患者淋巴结转移、病理分级、肌层浸润深度、国际妇产科联盟(FIGO)分期之间的关联。结果EC组子宫内膜组织PI3KCA基因表达量明显高于子宫肌瘤组[(1.24±0.24)比(0.26±0.11)](t=33.417,P<0.001)。EC组织标本中,PI3KCA基因高表达率为51.8%(43/83),低表达率为48.2%(40/83)。EC患者不同淋巴转移情况、肌层浸润深度及FIGO分期的PI3KCA基因高表达率比较差异有统计学意义(P<0.05);不同病理分级的PI3KCA基因高表达率比较差异无统计学意义(P>0.05),PI3KCA相关蛋白在EC细胞中主要表达于细胞质及细胞膜。EC组PI3KCA相关蛋白表达阳性率明显高于子宫肌瘤组[100.0%(83/83)比33.7%(28/83)](χ^(2)=82.250,P<0.001)。在EC患者子宫内膜组织标本中,PI3KCA相关蛋白高表达率为32.5%(27/83)、中表达率为25.3%(21/83)、低表达率为42.2%(35/83)。EC患者不同组织淋巴转移情况、肌层浸润深度、FIGO分期的PI3KCA相关蛋白表达情况比较差异有统计学意义(P<0.05),不同病理分级的PI3KCA相关蛋白表达情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PI3KCA在EC组织中表达水平升高,且PI3KCA表达与EC患者的临床病理特征有一定的相关性。
- 马莹张哲曲章义韩旭
- 关键词：子宫内膜癌病理特征
- 人3型腺病毒六邻体基底区重组蛋白的克隆表达和纯化被引量：4
- 2017年
- 目的克隆、表达人腺病毒六邻体蛋白基底区片段,为后续研究六邻体蛋白的抗原性及蛋白结构,进而研发腺病毒的基因工程疫苗及诊断试剂奠定基础。方法以3型人腺病毒核酸为模板,用PCR法扩增六邻体基底区片段,将该片段定向克隆至p QE32质粒,在大肠杆菌表达系统中表达带有组氨酸标签的重组蛋白片段,利用镍亲和层析法对重组蛋白进行纯化。结果构建出重组表达质粒,通过测序验证了克隆结果的正确性;在大肠杆菌表达体系中获得了高效表达。结论成功表达并获得了纯化的人3型腺病毒六邻体基底区重组蛋白片段。
- 崔奇董妥王迎晨李宇齐彬彬Vladimir I.ZlobinYuri P.DzhioevOleg N.Reva曲章义
- 关键词：腺病毒蛋白表达蛋白纯化
- 病毒蛋白质结构与功能的线上线下混合式教学设计
- 2022年
- 病毒蛋白质结构属于医学微生物学的教学难点问题。为突破难点,我们以呼吸道病毒的蛋白质结构和变异为核心,将生物信息学中的序列检索、比对、蛋白质结构同源建模,与进化轨迹可视化等知识紧密结合。线上以流感病毒为例讲解每个环节的操作流程,学生根据指导书对腺病毒和新冠肺炎病毒进行分析。线下讨论课形式由学生汇报分析结果,该教学设计在实践中取得了良好的效果和反馈,是新冠疫情背景下线上线下进行教学的有益探索。
- 王迎晨董妥高虹商蕾曲章义
- 关键词：病毒学结构生物学虚拟仿真实验混合式教学
- N40：一种新近发现的由流感病毒PB1节段编码的蛋白被引量：2
- 2010年
- N40蛋白是一种新发现的甲型流感病毒表达产物，该蛋白由流感病毒基因组PB1节段编码，是流感病毒PB1蛋白的变体，同PB1蛋白相比在N末端有40个氨基酸残基的缺失。N40蛋白和PB1节段编码的另外两种产物（PB1蛋白、PB1-F2蛋白）在表达水平上相互关联。2009年甲型H1N1亚型流感病毒的基因组中存在N40蛋白的开放阅读框。N40蛋白的生物学意义以及同流感病毒毒力的关系尚有待于深入研究。
- 王迎晨曲章义
- 关键词：甲型流感病毒基因组
- 新型冠状病毒变异株对新冠病毒疫苗免疫效力的影响被引量：9
- 2021年
- 随着严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome-coronavirus 2,SARS-CoV-2)疫苗的研发上市,接种疫苗已成为阻断新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)传播的最有效途径。然而,SARS-CoV-2变异株的不断出现对疫苗的免疫效力带来了一定影响,引起了人们的广泛关注。文章对目前主要出现的SARS-CoV-2变异株及其变异位点进行了总结,分析了SARS-CoV-2变异株对疫苗免疫保护效力的影响。
- 张哲马莹董妥王迎晨曲章义
- 关键词：病毒突变疫苗效力刺突蛋白
