贵州医科大学基础医学院免疫学教研室
- 作品数：72 被引量：111H指数：5
- 相关机构：安徽医科大学临床医学院基础医学部安徽医科大学临床医学院大连医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科技计划项目贵州省优秀青年科技人才计划更多>>
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- 贵州2起麻疹暴发疫情病毒分离株基因特征分析被引量：2
- 2016年
- 目的对2014年11月—2015年3月贵州发生的2起麻疹暴发疫情病毒分离株进行基因特征分析。方法采集暴发麻疹病例咽拭子标本，经Vero/SLAM细胞分离培养，从阳性培养物中提取病毒RNA，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增麻疹病毒核蛋白（N）基因，对扩增产物进行测序与分析。结果2起麻疹暴发共分离到11株麻疹病毒野毒株，均为H1基因型中的H1a基因亚型；进化树分析有2个明显的分支。11株暴发麻疹病毒与H1a基因亚型参考株Chin9322的核苷酸和氨基酸遗传距离差异分别为1.1%～1.6%和0.7%～3.4%。推导出氨基酸序列与参考株Chin9322及近年来贵州流行株比较，结果显示有6株在主要位点[47（G-S）、82（S-G）、122（R-K）]发生变异；2株在位点98（P-L）发生变异。结论H1a基因亚型麻疹病毒是引起2014—2015年贵州省2起麻疹疫情的主要病原，也是贵州省以及全国本土流行的优势基因亚型；且多个不同的H1a基因亚型病毒传播链在贵州省持续流行。本研究为贵州省麻疹的控制和消除提供了一定的基础资料。
- 唐小敏张丽叶绪芳任刚左丽
- 关键词：麻疹病毒基因型
- DENV-2对HUVECs自噬小体形成和自噬体-溶酶体融合及溶酶体降解途径的影响被引量：1
- 2022年
- 目的探讨登革2型病毒(DENV-2)对原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬小体形成、自噬体-溶酶体融合及溶酶体降解途径的影响。方法于DENV-2感染HUVECs 36 h时,采用透射电子显微镜观察HUVECs中自噬小体形成情况;于DENV-2感染HUVECs 12、24、36及48 h时,采用Western blot检测HUVECs中的微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)表达水平;于DENV-2感染2、4、6、8、10、12、18、24、30、36及48 h时,采用Western blot检测HUVECs中自噬选择性底物p62蛋白表达水平;于DENV-2感染后24、36及48 h,采用Western blot检测HUVECs中突触融合蛋白17(STX17)、突触体相关蛋白29(SNAP29)、囊泡相关膜蛋白8(VAMP8)的表达水平;采用溶酶体红色荧光探针(Lysotracker red)染色法观察DENV感染后HUVECs内溶酶体的pH变化;DENV-2感染HUVECs 24、36及48 h给予自噬抑制剂CQ处理或不处理的HUVECs中LC3-Ⅱ蛋白表达水平。结果透射电子显微镜结果显示,DENV-2感染可诱导自噬小体的形成;Western blot结果显示,DENV感染后12、24、36及48 h时LC3-Ⅱ表达显著增高(P<0.05);p62表达水平在感染早中期无明显变化,30 h后显著增高(P<0.05),36 h到达峰值;DENV-2感染后各时间点STX17蛋白表达水平均降低(P<0.05);感染24 h时,SNAP29、VAMP8蛋白水平增高(P<0.05),但随后36 h和48h蛋白表达均下降(P<0.05);Lysotracker red染色结果和Western blot结果显示DENV-2感染阻碍了溶酶体正常酸化。结论DENV-2感染可激活HUVEC自噬,诱导自噬小体的形成,但DENV-2阻碍了自噬-溶酶体融合,抑制溶酶体正常酸化。
- 胡盼苟小琴程瑶李志阳杨云巧何慧吴宁
- 关键词：登革病毒自噬溶酶体
- 人β防御素3对绿色荧光蛋白标记水疱性口炎病毒复制的作用
- 2024年
- 目的探讨人β防御素-3(HBD3)对绿色荧光蛋白(GFP)-水疱性口炎病毒(VSV)病毒株复制的作用。方法取对数生长期非洲绿猴肾细胞(Vero)分为Control组、1.00感染复数(MOI)组、0.10 MOI及0.01MOI组,Control组为无病毒对照组,后3组Vero细胞用1.00 MOI、0.10 MOI、0.01MOI VSV-GFP感染,采用噬斑形成实验观察感染第3天时各组Vero细胞存活情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测感染24 h时1.00、0.10及0.01 MOI组Vero细胞内病毒基质蛋白(M)和GFP信使RNA(mRNA)表达;取对数生长期人非小细胞肺癌细胞(A549)分为未处理组、VSV-GFP组及VSV-GFP+HBD3组,采用Imag J软件对各组镜下A549荧光进行相对定量分析,使用RT-PCR检测各组A549细胞内M和GFP mRNA表达。结果随着病毒滴度的增加,Vero细胞内空斑形成数目增多;Vero细胞内M和GFP mRNA表达表现为0.01 MOI组<0.10 MOI组<1.00 MOI组(P<0.05);VSV-GFP+HBD3组A549细胞单位面积内的荧光强度较VSV-GFP组减弱(P<0.05),M和GFP mRNA表达较VSV-GFP组降低(P<0.05)。结论HBD3可抑制VSV-GFP进入细胞后的病毒复制。
- 张乙进安利娟罗红舒莉萍江滟
- 关键词：水疱性口炎病毒病毒复制抗菌肽抗病毒
- 沉默MAL2对乳腺癌细胞增殖和药物敏感性的影响
- 2024年
- 目的探讨沉默髓鞘和淋巴细胞蛋白2(MAL2)基因对乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖和药物敏感性的影响,同时研究乳腺癌细胞对阿霉素(DOX)和顺铂(DDP)的耐药机制。方法利用数据库分析MAL2基因在正常组织、癌旁组织和乳腺癌组织中的表达及与预后的相关性;采用蛋白印迹(Western blot)法检测MAL2在人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7及MDA-MB-468细胞中的蛋白表达;利用转染干扰序列沉默乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞中MAL2的表达,根据序列不同分为对照组(siRNA-NC组)和实验组(siRNA-MAL2-1组、siRNA-MAL2-2组及siRNA-MAL2-3组);选取沉默效果最好的实验组(siRNA-MAL2-3组)序列进行慢病毒构建及实验,沉默乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞中MAL2的表达,分为sh-NC组(序列同siRNA-NC组)和sh-MAL2组(序列同siRNA-MAL2-3组),采用Western blot法检测MAL2的蛋白表达,CCK8法和平板克隆形成实验检测细胞的增殖能力;CCK8法、流式细胞术及Western blot检测沉默MAL2基因的表达后乳腺癌细胞对DOX和DDP的敏感性;Western blot检测p-AKT/m-TOR通路相关蛋白[磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、雷帕霉素靶蛋白(m-TOR)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)]的表达情况。结果生物信息学分析显示MAL2在乳腺癌组织中高表达、且其高表达和患者预后不良相关(P<0.05),MAL2在乳腺癌细胞系中高表达(P<0.01);与siRNA-NC组相比,siRNA-MAL2-3组的MAL2蛋白沉默效果较好(P<0.01);感染慢病毒实验结果表明,与sh-NC组比较,sh-MAL2组MAL2表达被抑制(P<0.05);与sh-NC组相比,sh-MAL2组细胞增殖能力无变化(P>0.05)、对DOX和DDP的敏感性增强(P<0.05)、p-AKT和p-mTOR蛋白表达下调(P<0.05)。结论沉默MAL2对乳腺癌细胞增殖能力没有影响,但可促进乳腺癌细胞对DOX和DDP的敏感性,其机制可能与AKT/m-TOR通路相关蛋白被抑制有关。
- 安丽君巩慧圆杨小敏余晓静艾海锋贺天辉刘杰麟杨留启
- 关键词：细胞增殖
- 人脐带来源的间充质干细胞运载3型呼肠孤病毒在杀伤K562细胞过程中相关细胞因子表达分析被引量：1
- 2021年
- 目的选择具有肿瘤归巢能力的人脐带来源的间充质干细胞(MSCs)作为细胞载体运载溶瘤病毒3型呼肠孤病毒(Reovirus3),并与慢性粒细胞白血病K562细胞共同培养,探讨细胞培养体系中相关细胞因子对MSCs运载Reovirus3杀伤K562细胞的影响,为利用细胞因子治疗或者辅助MSCs运载Reovirus3治疗慢性粒细胞白血病提供依据。方法通过体外试验从脐带中分离培养出MSCs,选用对数生长期的MSCs荷载Reovirus3,与对数生长期的K562细胞进行体外细胞培养,分为对照组:K562细胞;MSCs组:K562细胞+MSCs;Reovirus3组(阳性对照组):K562细胞+Reovirus3;实验组:K562细胞+Reovirus3+MSCs。细胞共培养24、48、72 h,收集各组细胞培养上清液,采用ELISA双抗体夹心法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-5、IL-6和IL-17水平。结果培养24、48、72 h时MSCs组和实验组TGF-β、IL-6水平与对照组比较均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05),Reovirus3组比对照组TGF-β、IL-6水平虽有所升高,但差异均无统计学意义(P>0.05);培养48 h时MSCs组、Reovirus3组和实验组TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4水平虽然均高于对照组,但差异均无统计学意义(P>0.05),培养48 h时4组细胞培养上清液均未检测出IL-5和IL-17;培养24、72 h时4组细胞培养上清液均未检测出TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5及IL-17。结论MSCs运载Reovirus3在体外试验的细胞培养体系中可有效抑制K562细胞,除了溶瘤病毒Reovirus3的溶瘤作用外,可能还与培养体系中的细胞因子促进细胞凋亡从而抑制K562细胞的增殖有关。
- 宋晓梅刘雨思赵书利李晨赵砚驰李化舒莉萍
- 关键词：间充质干细胞慢性粒细胞白血病K562细胞细胞因子
- 白介素10对人mDCs细胞骨架及其结合蛋白的影响
- 2019年
- 目的探讨白介素10(IC-10)对人成熟树突状细胞(mDCs)F-ccUn结构及其结合蛋白表达情况的影响&方法从新鲜的人外周血分选出CD141单核细胞,诱导培养成mDCs,用10 ng/ml IC-10处理48 h,利用激光共聚焦显微镜观察mDCs细胞骨架结构的变化,并通过Western b/t实验和免疫荧光实验分析IC-10对mDCs细胞骨架结合蛋白Fas-cin-1 Cofilin和磷酸化Cofilin(p-Cofilin)的表达及其定位的影响。结果IL-IO处理mDCs后,其F-actin含量明显上升,细胞突起增加,Fascin-1和p-Cofilin的表达水平上调,而且3种细胞骨架结合蛋白的定位均发生改变。结论IL-10能够影响mDCs细胞骨及其合的定位,细胞骨架结构发生重组,为研究IL-IO对mDCs免疫学功能的影响奠定了基础.
- 夏雪许筱莉龙金华王赟张世超欧阳燕朱贵明胡祖权曾柱
- 关键词：白介素10树突状细胞细胞骨架结构蛋白表达
- P21对HoxB4的调控机制及其影响造血干细胞增殖初步研究被引量：1
- 2018年
- 目的:利用转基因斑马鱼模型探讨P21是否作为Hox B4的下游基因参与调控造血干细胞(HSC)的增殖发育。方法:转基因斑马鱼系Tg(z Lmo2:LDe L-Hox B4-EGFP)与Tg(z Lmo2:Cre)交配后的胚胎作为Hox B4实验组、Tg(z Lmo2:LDe L-EGFP)与Tg(z Lmo2:Cre)交配后的胚胎作为EGFP对照组、野生型斑马鱼胚胎作为空白对照组,利用P21反义mRNA探针对斑马鱼全胚胎进行原位杂交,观察P21的表达情况。结果:Hox B4实验组胚胎、EGFP实验对照组胚胎及空白对照组胚胎在时相为18 hpf、24 hpf、72 hpf时原位杂交结果未见明显区别,30 hpf及36 hpf的Hox B4实验组斑马鱼胚胎脊椎部位P21的表达发生少量下调,48 hpf的Hox B4实验组、EGFP对照组两组胚胎胸腺部位P21较空白对照组发生少量下调。结论:转基因过表达Hoxb4的斑马鱼在造血细胞增殖异常旺盛的情况下,P21表达量出现下降,提示在胚胎期造血发育过程中P21可能作为Hox B4的下游基因,并通过Hox B4负调控作用来参与调节HSC的增殖发育。
- 李雪华姬牧远周艳华何志旭何志旭
- 关键词：造血干细胞斑马鱼转基因细胞增殖P21HOXB4
- 白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白可黏附大肠杆菌并抑制其生长
- 2020年
- 目的:探讨重组的白纹伊蚊唾液特异性34k2蛋白(rAlb-34k2)黏附大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等多种细菌的可能,及其对大肠杆菌OD600值的影响。方法:利用细菌结合实验,通过Western blot方法检测rAlb-34k2蛋白与大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的黏附效应,用分光光度计法检测不同浓度的rAlb-34k2蛋白对24 h内大肠杆菌OD600值的影响。结果:可在7%SDS处理后的大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌的细菌上清液、菌体沉淀和7%SDS处理的铜绿假单胞菌上清液中检测到rAlb-34k2蛋白,而在处理的乙型溶血性链球菌上清液及其菌体沉淀中未检测到相应的蛋白条带。不同浓度的rAlb-34k2蛋白(16~137 ng/μl)处理后大肠杆菌在12 h的OD600显著低于细菌对照组(P<0.05),其中以高浓度(137 ng/μl、112 ng/μl)的蛋白处理组细菌OD600值下降最为显著,且该现象与Ca^2+无关。此外,同源的rAalb-CTL2蛋白(重组白纹伊蚊唾液CTL2蛋白)在Ca^2+依赖下具有诱导大肠杆菌OD600增高的现象。结论:白纹伊蚊雌蚊唾液特异性rAlb-34k2蛋白可与多种细菌黏附,且可能具有抑制大肠杆菌的作用。
- 田炎珅徐倩金芮朱亚妮商正玲(指导)王政艳程金芝吴家红
- 关键词：白纹伊蚊抑菌试验
- 间充质干细胞作为溶瘤病毒细胞载体的研究进展被引量：1
- 2021年
- 溶瘤病毒能够在肿瘤细胞内大量增殖并最终裂解肿瘤细胞,同时还具有对肿瘤微环境的调控作用,激发宿主抗肿瘤免疫反应。但是溶瘤病毒经静脉注射后引发的机体抗病毒免疫应答以及溶瘤病毒的肿瘤靶向性差,使得临床上对肿瘤的疗效不佳。间充质干细胞具有肿瘤趋向性、免疫抑制功能和旁分泌效应。间充质干细胞运载溶瘤病毒既可以保护病毒不被免疫系统清除又可精准将病毒递送到肿瘤病变部位,同时病毒感染可改变间充质干细胞分泌的细胞因子谱,促进机体抗肿瘤免疫反应。因此,间充质干细胞运载溶瘤病毒是治疗复发/难治性实体肿瘤的理想选择。本文结合临床前及临床研究的有关进展,对间充质干细胞运载溶瘤病毒治疗实体肿瘤进行综述,为间充质干细胞运载溶瘤病毒的临床应用提供了理论依据。
- 汪显耀(综述)何志旭赵星(审阅)
- 关键词：溶瘤病毒间充质干细胞实体肿瘤细胞载体
- 埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制蛋白基因家族的筛选和表达谱分析被引量：2
- 2017年
- 目的筛选并鉴定埃及伊蚊(Aedes aegypti)全基因组中的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白(serine protease inhibitor,serpin)基因,分析其基因结构以及在不同发育时期和不同组织中的表达谱。方法运用生物信息学方法在埃及伊蚊全基因组数据库中筛选并鉴定埃及伊蚊serpin基因家族,利用Vector NTI11.0软件进行同源性比对、保守性分析,采用MEGA7.0软件构建系统进化树。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测埃及伊蚊不同发育时期(卵、Ⅰ~Ⅳ龄幼虫、蛹、雄蚊和未吸血雌蚊),以及未吸血雌蚊不同组织(唾液腺、中肠、脂肪体和卵巢)的serpin基因表达变化。结果从埃及伊蚊全基因组中筛选出26条serpin基因序列。生物信息学分析结果显示,19条具有信号肽,16条推测具有抑制酶活性。进化分析表明,埃及伊蚊serpin基因家族被分为A、B和C分支,B分支分为4组,每分支均具有同源性,且不同成员间在进化上相对保守。qRT-PCR结果显示,Aa SRPN25在雌蚊中特异性表达,相对表达量为0.074±0.015(P<0.01);Aa SRPN19~22在雄蚊中丰富表达;Aa SRPN23在Ⅰ龄幼虫时期特异性高表达,而且在唾液腺中也特异性高表达,相对表达量分别为22.9±5.28和4.24±1.39(P<0.01);Aa SRPN25在唾液腺中特异性高表达,相对表达量为74.44±25.76(P<0.01),Aa SRPN6、Aa SRPN14在中肠中的表达量最高,相对表达量分别为1.80±0.33、0.703±0.501;Aa SRPN17、Aa SRPN20在脂肪体中的表达量最高,相对表达量分别为0.34±0.09、0.15±0.03。结论从埃及伊蚊全基因组中筛选出26条serpin基因序列,其中19条具有信号肽,16条推测具有抑制酶活性的作用。
- 程金芝刘鉴翟慧吕清巧颜凤商正玲吴家红
- 关键词：埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制剂
