苏州大学医学部病理生理学教研室
- 作品数：7 被引量：19H指数：4
- 相关作者：李玉玲白小明张秀芬更多>>
- 相关机构：南京医科大学附属无锡人民医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会基础研究重点项目全球变化研究国家重大科学研究计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- GCS通过影响凋亡相关基因致白血病细胞耐药的分子病理机制探讨被引量：4
- 2009年
- 目的通过研究苯基棕榈酰胺吗啡丙醇(PPMP)和小干扰RNA(siRNA)对白血病多药耐药细胞K562/AO2葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)基因的调节及对凋亡相关基因的影响,以探讨GCS基因致白血病多药耐药的分子病理机制。方法应用体外细胞培养技术和RNA干扰技术观察GCS特异性的化学抑制剂PPMP及针对GCS的siRNA对K562/AO2细胞GCS基因的抑制作用,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析GCS基因被抑制前后K562/AO2细胞中GCS基因﹑Bcl-2基因﹑Bax基因的表达水平及差异。结果PPMP和siRNA可抑制K562/AO2细胞GCSmRNA的表达,同时致相应细胞的Bcl-2基因表达下降,Bax基因则无明显变化。结论GCS可能是通过Bcl-2信号转导途径使细胞的抗凋亡能力增强,从而导致白血病细胞的多药耐药。
- 刘艳谢平谢可鸣白小明穆会君张滨
- 关键词：葡萄糖神经酰胺合成酶小干扰RNA白血病
- NF-κB介导白血病多药耐药细胞中葡萄糖神经酰胺合成酶对P-糖蛋白的调节作用被引量：5
- 2014年
- 目的探讨在自血病耐药细胞K562／A02中核因子κB（nuclear transcription factor-kappaB,NF-κB）是否参与葡萄糖神经酰胺合成酶（glucosylceramide synthase, GCS）对P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）的调节作用，并研究在该调节作用信号通路中NF-κB出与细胞外信号调节激酶（ extracelluar signal-regulated kinase, ERK）的相互关系。方法应用特异性的GCS小干扰RNA（multidrug resistance protein 1, MDR1） mRNA抑制GCS基因后，实时荧光定量PCR方法检测靶基因抑制率以及对多药耐药蛋白1（multidrug resistance protein 1, MDR1）mRNA表达水平的影响；同时应用Western印迹检测各种蛋白的表达情况。使用NF-κB的特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）抑制NF-κB后，应用Western印迹检测P—gP的表达情况。U0126抑制P-ERK（phosphorylated-ERK）后，Western印迹检测细胞核内以及总的NF_KBp65和P—gP的表达。结果GCSsiRNA转染48h后，GCSmRNA的表达被抑制，抑制率为62％（51％～73％），同时下调MDRlmRNA的表达，抑制率为52％（43％～61％），与阴性干扰对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；GCSsiRNA转染72h后，GCSsiRNA组细胞核内NF-eBp65及P—ERK的表达水平均明显下调（P〈0．05），同时对P～gP的表达亦有显著的抑制作用（P〈0．05）。NF-κB的抑制剂PDTC处理K562／A02细胞后，对P—gP有明显的抑制作用（P〈0．05）。P—ERK抑制剂U0126处理K562／A02细胞，除了能显著抑制PERK1／2的表达外（P〈0．01），还可明显抑制细胞核内NF-κBp65的表达和P—gP的表达（P〈0．01）。结论NF-κB介导了白血病多药耐药细胞中GCS对P—gp的调节作用，且在这一调节作用信号通路中位于ERK下游。
- 张秀芬谢可鸣邹健李玉玲穆会君张滨谢平
- 关键词：葡萄糖神经酰胺合成酶P-糖蛋白细胞外信号调节激酶1多药耐药
- LPS对小鼠腹腔巨噬细胞HIF-1α表达的影响及其机制的研究
- 2009年
- 目的:探讨在体外常氧环境下脂多糖(LPS)对小鼠腹腔巨噬细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响及其可能的机制。方法:分别以LPS单独或联合NF-κB抑制剂柳氮磺胺吡啶、一氧化氮合酶抑制剂L-NMMA作用于BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HIF-1αmRNA的变化,用免疫细胞化学法检测HIF-1α蛋白和血管内皮生长因子蛋白(VEGF)的变化。结果:LPS作用于小鼠巨噬细胞10h后,HIF-1αmRNA无明显变化,HIF-1α蛋白和VEGF蛋白明显增加(P<0.01),NF-κB抑制剂柳氮磺胺吡啶和一氧化氮合酶抑制剂L-NMMA均可降低LPS对HIF-1α蛋白和VEGF蛋白表达的诱导作用(P<0.05)。结论:LPS可通过转录后途径上调HIF-1α的表达,HIF-1α蛋白的表达又可进一步诱导其靶基因VEGF的表达。
- 王亮谢可鸣孙晓东谢平
- 关键词：脂多糖缺氧诱导因子-1Α巨噬细胞小鼠
- GCS和MDR1与白血病细胞耐药形成的关联研究被引量：6
- 2010年
- 目的 探讨葡萄糖神经酰胺合成酶基因（glucosylceramide synthase gene,GCS）和多药耐药基因（multidrug resistance 1 gene,MDR1）在人白血病多药耐药细胞株K562/A02耐药形成中的相关性,以便为逆转白血病细胞耐药提供新的思路.方法 应用逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-PCR,RT-PCR）方法检测野生株K562及其耐药株K562/A02中GCS、MDR1基因的表达情况;采用RNA干扰技术（RNA interference,RNAi）,将靶基因为GCS的小干扰RNA（GCS siRNA）和靶基因为MDR1的小干扰RNA（MDR1 siRNA）分别传染K562/A02细胞后,通过定性和荧光实时定量PCR的方法观察GCS及MDR1 mRNA的基因沉默现象及两者之间的交互影响.结果 KS62/A02细胞GCS和MDR1 mRNA的表达明显强于药物敏感株K562细胞;GCS siRNA组K562/A02细胞GCS和MDR1基因表达均被抑制,抑制率分别为73%（59%～82%）和67%（38%～82%）;MDR1 siRNA组K562/A02细胞MDR1基因被抑制,抑制率为81%（63%～91%）,GCS基因表达无改变.结论 GCS与MDR1 mRNA的表达在K562/A02细胞呈正相关,特异性的沉默GCS基因可以下调MDR1 mRNA的表达水平.
- 杨国青谢可鸣王平穆会君乔伟振张滨谢平
- 关键词：多药耐药基因小干扰RNA白血病
- 环孢素A对人滋养细胞nm23-H1表达的调控作用被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨环孢素A(CsA)对人滋养细胞系Bewo的23号非转移性基因(nometastatic gene 23)H1型即nm23-H1表达的调控作用,为治疗滋养细胞疾病提供新的依据。方法:将Bewo细胞分为对照组(加溶媒)、环孢素组加入终浓度由10-2μmol/L-10μmol/L环孢素A。分别于48h后用RT-PCR检测nm23-H1基因mR-NA表达水平,于72h后用Incell Western分析nm23-H1蛋白表达水平。结果:与对照组相比,nm23-H1的表达水平随环孢素A浓度10-2μmol/L-1μmol/L呈现降低趋势,其中1.0μmol/L环孢素Anm23-H1 mRNA和蛋白水平均明显降低(P<0.05,P<0.01);当浓度升高至10μmol/L时,nm23-H1则呈升高趋势。结论:低浓度环孢素A可通过降调节nm23-H1的表达,继而改善滋养细胞的侵袭力。
- 侯晓帆谢可鸣李明清李大金
- 关键词：环孢菌素NM23-H1滋养细胞
- 创伤刺激、肾上腺素和地塞米松对小鼠应激能力的影响被引量：1
- 2008年
- 目的比较创伤刺激和使用肾上腺素、地塞米松或两药合用对小鼠应激能力的影响。方法分别采用剪尾法及游泳法结合血糖水平测定观察小鼠应激状态的变化;进一步在给予地塞米松、不同浓度肾上腺素及两药合用条件下,测定血糖水平和游泳力竭时间,观察药物对小鼠应激能力的影响。结果剪尾组血糖水平与生理盐水对照组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);给予一定剂量肾上腺素的小鼠,其血糖水平明显高于创伤刺激组和对照组小鼠,差异有统计学意义(P<0.05);在各种药物使用的比较中,较高浓度肾上腺素组游泳力竭时间明显短于地塞米松组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);较高浓度肾上腺素组、两药合用组游泳后血糖水平均明显高于地塞米松组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);低浓度肾上腺素组游泳后血糖水平也明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与对照组相比,剪尾创伤并不足以引起显著的以血糖升高为特点的应激反应;给予肾上腺素及肾上腺素与地塞米松合用虽均显著升高血糖水平但会降低小鼠的运动应激能力。
- 乔曼虞敏晶翟建涛谢可鸣
- 关键词：应激创伤肾上腺素地塞米松血糖小鼠
- 白血病耐药细胞中葡萄糖神经酰胺合成酶经ERK信号转导通路对P-gp表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨葡萄糖神经酰胺合成酶（glucosylceramidesynthase，GCS）在白血病细胞耐药形成过程中是否经过细胞外信号调节激酶（extracellularsignal—regulatedkinase，ERK）通路影响P糖蛋白（P—glycoprotein，P—gP）的表达。方法应用RNA干扰技术和实时荧光定量PCR技术观察针对GCS的siRNA（GCSsiRNA）及ERK特异性化学抑制剂U0126分别作用于白血病耐药细胞株K562／A02细胞后，MDRlmRNA在不同情况下的表达情况；同时应用Western印迹法检测转染GCSsiRNA后细胞中ERK1／2（extracellarsignal—regulatedkinase1／2）蛋白的磷酸化及非磷酸化的变化，以及各组中P—gP的表达情况。结果与空白对照组比较，当ERK抑制剂U0126的浓度为10tLmol／L时，对磷酸化一ERK1／2（phosphorylated—ERK1／2，P—ERK1／2）无明显抑制，P—gP表达亦无明显差别；而随着U0126浓度的逐渐升高，达到20μmol／L、40μmol／L、60μmol／L时，对P—ERK1／2的抑制则呈浓度依赖性增强，同时P—gP的表达水平亦明显下调。RNA干扰实验显示：GCSsiRNA组的GCSmRNA表达被明显抑制，抑制率为70．50％（58．00％～76．00％）；与阴性干扰对照组比较，GCSsiRNA组在siRNA转染72h后P-ERK1／2的表达水平显著下调（P〈O．01），同时P-gp的表达亦明显下调（P〈O．05）。结论GCS可通过ERK1／2信号通路调控多药耐药蛋白P—gP的表达。
- 李玉玲谢可鸣张杨杨穆会君张滨邹健谢平
- 关键词：葡萄糖神经酰胺合成酶P-糖蛋白ERK信号转导通路白血病细胞
