西北农林科技大学动物医学院预防兽医系
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 携带CD163报告载体的猪诱导多能干细胞株的建立被引量：2
- 2023年
- 猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)是包括猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在内的多种高致病病毒的受体细胞,是研究病毒与宿主互作机制的重要模型。然而PAM来源有限,难以满足当前需求。利用猪诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)向巨噬细胞定向诱导是解决PAM细胞数量不足的有效方法。CD163是PAM细胞的重要标记,也是PRRSV等病毒的主要受体。建立实时报告CD163激活程度的报告系统对于建立并优化猪iPSCs向PAM的诱导分化体系具有指导意义。本研究利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统,设计靶向CD163终止密码子的sgRNA并构建相应的打靶载体,将其导入到猪PAM中的检测报告系统。进一步将该报告系统导入猪iPSCs中,通过碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色和EDU染色等手段来检测其安全性。将猪内源CD163的报告载体系统转染至原代PAM中,检测到了红色荧光的表达,证明了该载体系统的可靠性;将CD163-reporter系统转染至猪iPSCs中,获得CD163 reporter-iPSCs。结果表明,CD163 reporter-iPSCs可以维持正常的多能性基因的表达,并具有与正常猪iPSCs一致的克隆形态和增殖能力。证实成功构建了CD163的报告载体,并将其转染至猪iPSCs,获得含有CD163报告载体的猪iPSCs系。该报告载体既不影响猪iPSCs的多能性,又能够实时指示CD163的表达,为深入解析猪iPSCs分化为PAM的机制以及解析PRRSV等重大病原与宿主的互作研究奠定了基础。
- 岳威张炬庆吴晓龙杨昕淳沈巧艳于帅祝振硕王承宝张仕强华进联
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导多能干细胞
- 应用噬菌体展示技术鉴定禽和猪戊型肝炎病毒衣壳蛋白一个共有抗原表
- 禽戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)在遗传性和抗原性与猪HEVs具有一定的相关性,而且禽HEV衣壳蛋白上存在着禽和猪HEV共有的抗原表位。前期我们制备的抗禽HEV单抗3E8可以与猪HEV的衣壳蛋白...
- 王鑫杰赵钦赵冀楠党露周恩民
- 关键词：噬菌体展示技术
- 文献传递
- 猪免疫抑制因子MNSFβ的克隆、表达与组织分布
- 2013年
- MNSFβ(Monoclonal nonspecific suppressor factorβ)是一种天然免疫抑制因子,参与机体免疫反应、应激反应、细胞分裂、细胞凋亡和核转运等生物过程,但其功能在猪中鲜有报道。文章通过电子克隆得到猪MNSFβ的全长序列,利用RT-PCR首次从猪脾脏中克隆了包含完整开放阅读框的MNSFβcDNA(GenBank登录号:KF77642500)片段,测序正确后分析猪MNSFβ的核酸序列和蛋白质序列。将猪MNSFβ基因编码区序列插入表达载体pEGFP-C1,构建真核表达载体pEGFP-MNSFβ;用脂质体将重组质粒转染到猪脐静脉内皮细胞(SUVEC)中,利用荧光检测、Western blot和激光共聚焦分析SUVEC中猪MNSFβ的表达;并用实时荧光定量PCR对猪MNSFβ在不同组织的表达丰度进行分析。结果表明:猪MNSFβ基因全长402 bp,编码133个氨基酸,含一个外显子。生物信息学分析表明,猪MNSFβ为无信号肽的稳定蛋白,由泛素样结构域与核糖体蛋白S30组成。对猪MNSFβ与已发现的18个物种的MNSFβ氨基酸序列进行相似性分析和进化树分析,显示其蛋白相似度均在91%以上,且进化距离都小于0.05,说明MNSFβ在各物种间高度保守。荧光检测和Western blot结果显示,猪MNSFβ在SUVEC中成功表达,激光共聚焦显示其在细胞质与细胞核内均有分布。组织表达谱分析表明,猪MNSFβ在各免疫相关组织广泛表达,但在肺脏中未检测到表达,说明其在机体免疫反应中发挥重要作用。
- 王静娜蒋朋飞亢展展李登云华琳琳张洋张淑霞张德礼
- 关键词：真核表达
