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重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室: 作品数：41 被引量：104H指数：6; 相关作者：姚莉韩晓凤夏飞徐晓明邓莉更多>>; 相关机构：第三军医大学高原军事医学系第三军医大学基础部重庆大学生物医学工程联合学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”重庆市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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JNK在小鼠毛囊周期中的动态表达: 2012年; 目的研究JNK在生后小鼠背皮毛囊周期中的表达规律及探讨其对毛囊周期的调控作用。方法选择生后不同时期(1、7、14、16、21、31 d)C57BL/6J小鼠54只,采用RT-PCR技术,检测JNK mRNA在小鼠背皮毛囊周期中的表达情况;采用Western blot和免疫组化技术,进一步检测JNK蛋白在毛囊周期中的表达规律。结果 RT-PCR检测结果表明,在毛囊周期中,JNK1在生长早期(生后7、31 d)表达最强,退化期(生后16 d)和静止期(生后21 d)维持较弱的表达;JNK2在各时相点均有中等强度表达。单因素方差分析显示,JNK1的表达水平在生长早期(0.99±0.02)与静止期(0.30±0.01)间存在显著差异(P<0.05),JNK2在生长早期(0.77±0.01)与退化期(0.97±0.03)间存在显著差异(P<0.05)。Western blot与RT-PCR检测结果一致。免疫组化结果显示,在毛囊生长期,JNK主要表达于毛母质和外根鞘;进入退化期,JNK表达于外根鞘和上皮索;静止期毛囊中无表达。结论 JNK在毛囊周期中呈动态表达模式,生长期JNK可能通过影响毛母质细胞的增殖和/或分化来调节毛囊生长;退化期JNK可能涉及毛囊细胞的凋亡过程。; 王瑞敏星懿展郭海英何龙杨恬连小华查何彭惠民; 关键词：JNK 毛囊毛囊周期小鼠

PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法被引量：42: 2008年; 目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度。结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100+NP40法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度。结论:Chelex-100+NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR。; 胡晓红彭惠民刘昕黄正根袁科; 关键词：DNA提取 PCR 实时荧光定量PCR

LncRNA H2k2促进高糖培养的肾小球系膜细胞增殖的研究被引量：1: 2020年; 该研究主要探讨lncRNA H2k2对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖的影响,采用qRTPCR检测lncH2k2在正常及糖尿病肾病小鼠肾脏组织中的表达,以及高低糖培养的系膜细胞中的表达;FISH与qRT-PCR检测lncH2k2的亚细胞定位;qRT-PCR检测lncH2k2过表达质粒及siRNA的转染效率;EdU检测转染lncH2k2过表达质粒或siRNA后系膜细胞增殖的变化。结果表明,lncH2k2在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及高糖培养的系膜细胞中的表达升高,且lncH2k2主要分布于系膜细胞的细胞质中。在低糖培养的系膜细胞中转染lncH2k2过表达质粒后,与低糖培养的系膜细胞相比,过表达lncH2k2的低糖培养的系膜细胞增殖能力显著提高,并且将qRT-PCR检测筛选出的一条lncH2k2 siRNA转染到高糖培养的系膜细胞内,与高糖培养的系膜细胞相比,敲低lncH2k2后系膜细胞增殖能力显著降低。研究结果揭示,lncRNA H2k2在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及系膜细胞中表达显著,lncRNA H2k2促进了系膜细胞增殖,这些结果表明,lncRNA H2k2可能参与了糖尿病肾病的发生发展。; 廖雨滋陈雯韵孙艳彭睿张政; 关键词：糖尿病肾病长链非编码RNA 肾小球系膜细胞增殖

腺病毒介导人ATF6基因修饰对体外细胞增殖凋亡的实验研究: 2015年; 目的:构建携带人活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)的重组腺病毒Ad-ATF6和Ad-ATF6 si RNA,并探讨内质网应激(ER Stress,ERS)时其对人软骨肉瘤细胞SW1353增殖凋亡的影响。方法:将ATF6基因序列与靶向ATF6的si RNA序列分别克隆到p Ad Track-cmv和p SES-HUS穿梭质粒上,然后分别与腺病毒骨架质粒p Ad Easy-1在大肠杆菌BJ5183感受态中同源重组,得到腺病毒重组质粒p Ad-ATF6和p Ad-ATF6 si RNA,通过脂质体介导在HEK293细胞中进行包装和扩增。通过RT-PCR和Western blot检测病毒效果。流式细胞仪法(flow cytometry,FCM)、MTT法及Western blot检测ERS状态下ATF6对SW1353细胞增殖凋亡的影响。结果:成功获得了重组腺病毒Ad-ATF6和Ad-ATF6 si RNA。RT-PCR和Western blot结果表明,重组腺病毒能有效的感染细胞。FCM检测结果表明,ERS条件下,ATF6感染组S期细胞比例明显升高,凋亡率明显降低(P=0.000);Ad-ATF6 si RNA感染组S期细胞比例明显降低,凋亡率明显上升(P=0.000)。MTT与Western blot实验结果与FCM结果一致。结论:ERS状态下,ATF6能促进SW1353细胞的增殖,抑制其凋亡。; 韩晓凤李美玲夏飞张鹏郭风劲; 关键词：重组腺病毒

沉默核糖核酸酶抑制因子促进膀胱癌BIU-87细胞生长和转移潜能: 2011年; 目的研究沉默核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因表达,对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和侵袭能力及肿瘤生长的影响。方法通过用RI mRNA的特异性siRNA表达载体和无同源性的对照载体,在脂质体介导下稳定转染膀胱癌BIU-87细胞,通过筛选、鉴定后,用Am-blue法检测细胞增殖能力及用Western blot分析细胞中MMP-2和MMP-9的表达。将siRNA RI BIU-87(实验组)及对照组细胞皮下注射到BALB/c裸鼠中,观察肿瘤的生长和肿瘤微血管密度的变化,以及nm23-H1和E-cadherin在肿瘤中的表达。结果 RI基因表达下调显著增加了细胞的增殖,而且显著增强了MMP-2和MMP-9的表达。动物实验结果显示,实验组显著促进了肿瘤的生长(促瘤增长率31.85%),具有更大的瘤质量和更高的肿瘤微血管密度以及更低的nm23-H1和E-cadherin的表达。结论抑制RI基因的表达能显著提高膀胱癌细胞的生长和侵袭潜能,RI可能作为治疗膀胱癌的靶蛋白。; 陈俊霞高娟朱军姜蓉; 关键词：核糖核酸酶抑制因子膀胱癌细胞肿瘤生长

临床医学七年制普通生物学、细胞生物学及医学遗传学教学改革初探: 本文旨在探讨适合临床医学七年制普通生物学、细胞生物学及医学遗传学的教学内容和教学方法.根据七年制的培养目标和学生的实际情况,通过调查研究后,协调上述三门课程的教学内容,减少与其它学科的重复,体现学科发展前沿,作重为临床医...; 彭惠民陈俊霞郭风劲蒲淑萍; 关键词：高等医学教育普通生物学细胞生物学医学遗传学教学改革; 文献传递

ATF4重组慢病毒对C2C12细胞增殖和凋亡的影响: 目的：构建人活性转录因子4(activating transcriptional facror4,ATF4)慢病毒载体并包装慢病毒颗粒(lentivirus),探讨成肌细胞C2C12中ATF4基因慢病毒修饰对BMP2诱导...; 夏飞伍志盟李美玲邓莉郭风劲; 关键词：慢病毒 C2C12 分化细胞增殖凋亡

siIRE1α重组腺病毒对内质网应激介导凋亡的影响被引量：2: 2014年; 目的构建内质网跨膜蛋白肌醇酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)基因干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)重组腺病毒,并探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)状态下其对C2C12细胞增殖凋亡的影响。方法人工合成靶向IRE1α的siRNA序列,连接到穿梭载体pSES-HUS上,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183感受态中进行同源重组,得到pAdSES-HUS-IRE1αsiRNA重组质粒。通过脂质体介导在HEK293细胞中包装并扩增重组腺病毒Ad-IRE1αsiRNA,在C2C12细胞中采用RT-PCR和Western blot检测其干扰效果,并通过FCM法和MTT检测Tm诱导ERS时病毒对C2C12细胞增殖凋亡的影响(分为4组:NC组、Tm单独处理组、Tm+Ad-RFP组和Tm+AdIRE1αsiRNA组),Western blot检测C2C12细胞中Cleaved Caspase-3和Chop蛋白的表达。结果成功获得了病毒滴度约为4.3×1011PFU/mL的重组腺病毒Ad-IRE1αsiRNA。RT-PCR和Western blot检测结果表明,该重组腺病毒有效地抑制了C2C12细胞中IRE1α的表达。FCM检测结果表明,ERS条件下,Tm+Ad-IRE1αsiRNA组S期的细胞比例分别比Tm单独处理组和Tm+Ad-RFP组升高12.62%和14.80%(P<0.05);凋亡率比Tm单独处理组和Tm+Ad-RFP组降低16.64%和16.26%(P<0.05)。MTT实验结果与Cleaved Caspase-3和Chop蛋白的表达与FCM结果一致。结论重组腺病毒Ad-IRE1αsiRNA在C2C12细胞中能有效抑制IRE1α的表达;ERS状态下,RNA干扰IRE1α基因可促进C2C12细胞的增殖,抑制其凋亡。; 韩晓凤李美玲张鹏夏飞郭风劲; 关键词：RNA干扰重组腺病毒 C2C12细胞

组蛋白乙酰化参与NO信号激活人肝细胞内源FⅧ重表达的研究: 2018年; 通过对组蛋白乙酰化和去乙酰化的研究,探索NO信号激活LO2细胞中凝血因子FⅧ（coagulation factorⅧ,FⅧ）重表达的分子机制。建立L-精氨酸激活人肝细胞LO2内源凝血因子FⅧ重表达的分子细胞模型。取对数生长期人类永生化肝细胞LO2随机分为：正常组和L-精氨酸组、组蛋白乙酰化抑制剂组和组蛋白去乙酰化抑制剂组。分别培养0、12 h、24 h、36 h、48 h、60 h。用RT-PCR方法检测各组中人FⅧ基因的转录水平。构建核转录因子（nuclear factor k B,NF-k B1）flag标签质粒,转染LO2细胞,用染色质免疫共沉淀（Ch IP）检测FⅧ基因启动子区域组蛋白乙酰化水平。实验显示L-精氨酸组和组蛋白去乙酰化抑制剂组中有人FⅧ基因m RNA的转录,正常组和组蛋白乙酰化抑制剂组没有出现FⅧ基因m RNA的转录。Ch IP检测NF-k B1与FⅧ基因启动子区域结合时,FⅧ基因启动子区域组蛋白乙酰化水平提高。上述研究表明组蛋白乙酰化抑制剂能取消LO2细胞中内源人FⅧ基因的上调,而组蛋白去乙酰化抑制剂能协同LO2细胞中内源人FⅧ基因的上调。NO信号在LO2细胞中通过调节FⅧ基因启动子区域组蛋白乙酰化,招募转录因子NF-k B1激活人FⅧ基因的重表达。; 代晓璐刘桂岑苏小超张军; 关键词：组蛋白乙酰化表观遗传修饰

半乳糖凝集素3调控高糖下肾小球系膜细胞增殖的研究被引量：7: 2020年; 目的探究半乳糖凝集素3(galectin-3,Gal-3)对高糖培养的肾小球系膜细胞(mesangial cells,MCs)增殖的作用及机制。方法实时定量PCR(qRT-PCR)检测Gal-3在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)、正常小鼠肾脏组织和高低糖条件下MCs中的表达;构建、合成Gal-3过表达质粒和siRNA,qRT-PCR和Western blot检测转染效率;在高糖培养的MCs中转染Gal-3-siRNA;在低糖培养的MCs中转染Gal-3过表达质粒,通过5-乙基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2′-deoxyuridine, EdU)检测MCs的增殖能力,通过Western blot检测高低表达Gal-3对Mek和磷酸化Mek表达的影响。结果 qRT-PCR结果显示:与正常小鼠相比,Gal-3在DN小鼠肾脏组织中表达显著升高(P<0.01),且与低糖下的MCs相比,高糖条件下的MCs中Gal-3表达显著升高(P<0.01)。过表达Gal-3后,MCs增殖能力显著提高(P<0.01)且磷酸化Mek表达上调(P<0.01),而在siRNA沉默Gal-3后,MCs增殖能力显著降低(P<0.01)且磷酸化Mek表达下调(P<0.001)。结论 Gal-3在DN中显著上调,并且可能通过调控Mek磷酸化影响MCs的增殖,进而在DN中发挥重要的调节作用。; 林子越张攀扬崇馨煜孙艳彭睿张政; 关键词：GALECTIN-3 肾小球系膜细胞细胞增殖 MEK

重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室

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