贵州医科大学基础医学院微生物学教研室
- 作品数：61 被引量：103H指数：6
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 幽门螺杆菌临床标本的最佳运送条件及最适培养基的实验研究
- 目的:探索幽门螺杆菌临床标本的最佳运送条件和最适培养基.方法:将实验菌株加入小牛血清、牛奶运送液,分别置不同温度及气体环境6h后接种于哥伦比亚血琼脂微需氧培养;将20例临床标本分别接种于MH和哥伦比亚血琼脂微需氧培养5天...
- 王琼杨杰潘科黄亚琴陈峥宏王菲綦廷娜
- 幽门螺杆菌katA基因功能及其在耐受氧化损伤中的作用分析
- 2024年
- 【目的】过氧化氢酶(KatA)是幽门螺杆菌编码的重要毒力因子,在抵抗宿主免疫杀伤和疫苗研发等方面具有重要功能。为了鉴定幽门螺杆菌KatA的酶学特性,并分析其在幽门螺杆菌氧化耐受中的功能。【方法】首先,从幽门螺杆菌临床耐药菌株Hp_G272基因组中分离katA基因,并在大肠杆菌中克隆表达、分离纯化KatA^(G272)蛋白;然后,利用CAT检测试剂盒体外分析KatA^(G272)的过氧化氢酶活性;其次,利用同源重组技术构建katA基因工程菌株,包括敲除菌株和回补菌株;最后,通过比较野生菌株与工程菌株生长表型差异、分解过氧化氢能力差异及耐受过氧化氢能力差异,阐述katA基因的功能及其在幽门螺杆菌耐受氧化损伤中的作用。【结果】在大肠杆菌中成功克隆表达并分离纯化KatA^(G272),体外酶学分析表明,KatA^(G272)是一类嗜酸性过氧化氢酶,基因敲除分析表明,敲除该基因幽门螺杆菌丧失分解和耐受过氧化氢的能力,而回补该基因幽门螺杆菌回复分解和耐受过氧化氢的能力。【结论】katA基因是幽门螺杆菌分解和耐受过氧化氢的唯一功能基因,在幽门螺杆菌氧化耐受中具有重要功能。
- 王鑫鑫管玉祝李晓苇洪伟吴道艳康颖倩刘永畅陈峥宏崔古贞
- 关键词：幽门螺杆菌过氧化氢酶KATA克隆表达基因敲除
- 瓷珠保藏法和脱纤维绵羊血介质保藏法对幽门螺杆菌的保藏效果被引量：1
- 2018年
- 目的比较瓷珠保藏法和脱纤维绵羊血介质保藏法对幽门螺杆菌(Hp)的保藏效果。方法对分离自胃炎和胃溃疡患者胃黏膜组织的10株Hp菌株,分别采用瓷珠保藏法和脱纤维绵羊血介质保藏法置于-80℃保藏。比较两种保藏方法在冻存1个月、反复冻存2、3、6个月以及直接保藏12个月的复苏存活率。结果 10株Hp菌株冻存1个月、反复冻存2、3、6个月,采用瓷珠保藏法的复苏存活率分别为90.0%、90.0%、90.0%、50.0%,而脱纤维绵羊血介质保藏法的复苏存活率分别为100%、100%、100%、80.0%,两种方法复苏存活率相比均无统计学差异(P>0.05)。瓷珠保藏法、脱纤维绵羊血介质保藏法和液体冻存的菌株在保藏12个月复苏时的存活率分别为70.0%、100%和100%;瓷珠保藏法与脱纤维绵羊血介质保藏法的复苏存活率相比无统计学差异(P>0.05)。结论瓷珠保藏法和脱纤维绵羊血介质保藏法均适用于Hp的保藏;吸附菌细胞的瓷珠和含有菌细胞的保藏管内液体可分别冻存。
- 郭长城刘芳吴芳草王琼印琳陈峥宏
- 关键词：幽门螺杆菌菌种保藏
- 结核分枝杆菌pyrF基因的生物信息学分析被引量：5
- 2019年
- 目的应用生物信息学软件分析预测结核分枝杆菌乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶(orotidine 5'-monophosphate decarboxylase,OMPdecase)的结构与生物学特性。方法采用ProtParam,ProtScale,TMPred,SignalP4.1,NetNGlyc1.0,Netphos3.1,SOPMA,SWISS-MODEL和STRING等生物信息学软件对结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis)H37Rv的pyrF基因及其编码蛋白OMPdecase的理化性质、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、三维结构和蛋白-蛋白相互作用网络等进行预测分析。结果预测结核分枝杆菌pyrF基因编码的OMPdecase为相对分子质量27.4×10~3的富含丙氨酸、甘氨酸和缬氨酸的稳定疏水性膜蛋白或胞浆蛋白,不含信号肽,且磷酸化程度较高。α螺旋和无规卷曲为OMPdecase的主要二级结构元件,分别占51.09%和27.37%。同源建模分析显示D93-K95-D98-I99-T102位于活性中心区域内。结论生物信息学方法预测结核分枝杆菌pyrF基因编码的OMPdecase相对分子质量为27.4×10~3,为稳定疏水性膜蛋白或胞浆蛋白,其含有的保守氨基酸残基D93-K95-D98-I99-T102与该蛋白的催化活性密切相关。
- 黄劲王洁牛雪可邱文赵亮王梅竹康颖倩冯永红秦莲花
- 关键词：结核分枝杆菌生物信息学
- 家蝇抗菌肽Sarcotoxin Ⅱ家族基因的克隆及原核表达条件优化
- [目的]克隆家蝇抗菌肽sarcotoxin Ⅱ 家族基因S50、S52、S88、S90,对其进行原核表达并优化表达条件.[方法]1.从家蝇转录组库中克隆差异表达基因sarcotoxin Ⅱ 家族基因S50、S52、S88...
- 王兵田川张雪婷黄伟康石玉玲杨丽萍覃海姚杨修江帆彭建朱贵明尚小丽王涛吴建伟
- 关键词：家蝇抗菌肽原核表达
- 乳双歧杆菌对旋毛虫感染小鼠炎性细胞因子及肠道菌群的影响被引量：1
- 2023年
- 目的探究不同剂量乳双歧杆菌对旋毛虫感染小鼠的虫荷量、炎症调节作用及肠道菌群组成的影响。方法取感染旋毛虫的小鼠(300条/只)随机分为模型组、乳双歧杆菌高剂量组、中剂量组、低剂量组,未感染旋毛虫小鼠作为空白对照组;高、中、低剂量组分别给予乳双歧杆菌灌胃,模型组和空白对照组每日给予等量磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline,PBS)连续灌胃30 d;胃蛋白酶消化法检测各组第7 d肠道成虫数量及第30 d肌肉幼虫数量。ELISA法检测各组模型小鼠血清中白细胞介素10(Interleukin-10,IL-10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)水平,采集各组小鼠肠道感染期粪便样本,采用16S rDNA高通量测序进行微生物组生物信息学分析,评估样本多样性和分类学特征。结果虫荷量结果显示,高剂量乳双歧杆菌显著降低旋毛虫感染小鼠第7 d肠道成虫及第30 d肌肉幼虫数量(P<0.05);炎性因子水平检测发现高剂量乳双歧杆菌使旋毛虫感染小鼠血清抑炎因子(IL-10)水平升高(P<0.05),促炎因子(TNF-α)水平降低(P<0.05)。肠道微生物组成结果显示,乳双歧杆菌干预使感染小鼠厚壁菌门与拟杆菌门比值上升,降低普雷沃菌属丰度,高剂量组中异杆菌属、颤螺菌属丰度增加,中剂量组中布劳特菌属增加。结论乳双歧杆菌能改善旋毛虫感染小鼠炎症表现,促进旋毛虫清除,提高感染小鼠肠道内有益菌丰度。
- 迟茜文解文利姚梦玮李玉迁魏洪
- 关键词：旋毛虫肠道菌群炎性因子
- 水泡性口炎病毒通过基质金属蛋白调控结肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭
- 2022年
- 目的探讨水泡性口炎病毒(VSV)对结肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法用Vero细胞对VSV进行扩增、浓缩和滴度测定。通过CCK-8法检测不同浓度的VSV对SW480细胞增殖活性的抑制作用;采用划痕实验、Transwell实验检测SW480细胞的迁移和侵袭能力;实时荧光定量聚合酶反应(qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)检测SW480细胞的MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达。结果VSV处理组增殖率小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。VSV处理组细胞的迁移能力低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。VSV处理组侵袭细胞数明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。VSV处理组MMP-2表达量高于对照组,MMP-9表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论VSV通过靶向调控基质金属蛋白的表达能够抑制结肠癌SW480细胞的侵袭、迁移。
- 李戈姚梦玮李玉迁李胜方小涵魏洪
- 关键词：水泡性口炎病毒
- 幽门螺杆菌培养中分离的胃内菌群的鉴定
- 印琳齐兴爽王琼刘芳郭长城陈峥宏
- 海南省39株幽门螺杆菌的耐药性及毒力基因特征
- 2024年
- 目的了解海南省幽门螺杆菌(Hp)耐药性及其毒力基因vacA、cagA和iceA基因型特征。方法对146例上消化道症状疾病患者进行胃镜检查,取胃黏膜组织进行Hp的分离和培养,对Hp进行药敏检测;通过聚合酶链式反应(PCR)对毒力基因cagA、vacA和iceA进行检测和分型,cagA测序进行聚类分析、并构建系统进化树;使用Fisher确切概率法分析各型毒力基因和患者疾病发生的相关性。结果共培养出39株Hp,对阿莫西林和克拉霉素的耐药率分别为2.6%和48.7%;39株均为vacA^(+)菌株,iceA 1型26株、2型13株;33株为cagA^(+)菌株,其中5株为西方型(EPIYA-ABC型),28株为东亚型(EPIYA-ABD型);cagA^(+)和vacA^(+)菌株与胃和十二指肠疾病有显著的相关性(P<0.05),iceA则无显著性差异(P>0.05)。结论海南省胃和十二指肠Hp患者中Hp毒力基因多样化,vacA s1am2/cagA^(+)基因型在消化性溃疡患者中占优势,不同毒力基因型对胃和十二指肠疾病的发生具有明显的差别,阿莫西林可作为该地区根除Hp首选抗生素。
- 卓书伟林美幸吴翔潘静琳周海清陈海陈峥宏
- 关键词：幽门螺杆菌耐药性基因多样性CAGAVACAICEA
- 热纤梭菌Cthe_2401蛋白功能预测及在大肠杆菌中的克隆表达与纯化
- 2024年
- 目的利用生信手段预测Cthe_2401蛋白的特性与功能,并在大肠杆菌中进行体外克隆、表达与纯化。方法利用国家生物技术信息中心数据库(NCBI)、蛋白保守结构域数据库(CDD)分析Cthe_2401蛋白的序列和进化特征,采用SWISS-MODEL在线软件进行同源建模并预测该蛋白的结构与功能;利用聚合酶链式反应(PCR)扩增Cthe_2401基因,并与pET28a载体链接构建pET28a-Cthe_2401表达质粒,转化大肠杆菌后利用异丙基硫代半乳糖(IPTG)诱导Cthe_2401蛋白表达;利用50%硫酸铵沉淀、Ni-NTA柱以及SephadexG75葡聚糖凝胶柱纯化Cthe_2401蛋白。结果生物信息学预测表明,Cthe_2401蛋白属于Veg蛋白家族,可能与生物膜的发生和孢子形成有关;Cthe_2401蛋白成功在大肠杆菌克隆与表达,体外纯化获得约10 ku大小的蛋白条带,与预期结果一致。结论成功预测Cthe_2401蛋白的功能,成功获得Cthe_2401蛋白在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化。
- 崔古贞管玉祝王鑫鑫花登雄吴道艳吴晓娟钟欣言洪伟陈峥宏
- 关键词：生物信息学大肠杆菌
