吉林大学生命科学学院艾滋病疫苗国家工程实验室
- 作品数：22 被引量：24H指数：3
- 相关作者：孙瑶朱瑞王子璇王玉倩更多>>
- 相关机构：东北师范大学附属中学北华大学生命科学研究中心延边大学农学院园艺园林系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金吉林省科技厅科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程理学更多>>
- 胰岛素对血脑屏障通透性的影响
- 2017年
- 目的初步探讨胰岛素调节血脑屏障模型通透性的机制,并评价其对血脑屏障转运功能的影响及致炎症作用,为阿尔兹海默病(Alzheimer disease,AD)等神经系统疾病的治疗及预防奠定基础。方法将不同浓度胰岛素(20和200μU/ml)作用于永生化人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells/D3,h CMEC/D3)建立的体外血脑屏障模型,通过监测跨上皮细胞电阻抗(trans epithellal electric resistance,TEER)变化,评价其对血脑屏障模型通透性的影响;实时定量PCR(QRT-PCR)检测与血脑屏障通透性相关的紧密连接蛋白(FHL2、ITGB1和CDH5)、转运载体蛋白(ABCB1、ANXA2)以及细胞炎症因子(VCAM、CCL2)基因m RNA转录水平的变化。结果胰岛素能在48 h内迅速提高血脑屏障的TEER,高于对照组(加入RPMI1640培养基)20~30Ω·cm^2 (P<0.05);胰岛素可促进紧密连接蛋白(FHL2、ITGB1和CDH5)和转运载体蛋白(ABCB1、ANXA2)基因m RNA的转录水平明显升高,而对细胞炎症因子(VCAM、CCL2)基因m RNA的转录水平无明显作用。结论胰岛素可能通过促进细胞紧密连接降低血脑屏障通透性,维持一定水平的胰岛素对于建立和维持符合脑内皮微环境状态下的体外血脑屏障模型具有重要意义。因而,胰岛素水平的变化对于AD研究可能具有重要意义。
- 姜晓宇管珊珊宁楚楠吴斯豪李慧文孙紫霄张明明刘云娇单亚明石玉华
- 关键词：阿尔兹海默病血脑屏障通透性胰岛素紧密连接蛋白
- 新型7-苯甲酰基中氮茚-1-羧酸乙酯类化合物的合成及HIV-1病毒感染因子抑制活性研究
- 2012年
- 目的设计合成7-苯甲酰基中氮茚-1-羧酸乙酯类化合物,并对其抗HIV-1活性进行初步研究。方法以异烟酸、溴乙酸苄酯、丙炔酸乙酯为原料,经取代、Friedel-Crafts反应、1,3-偶极环加成反应、水解、缩合得到目标化合物;采用荧光筛选方法对目标化合物抗HIV-1病毒感染因子(viral infectivity factor,VIF)活性进行评价。结果共合成30个未经文献报道的新化合物,其结构经1H-NMR、13C-NMR、HRMS确证;活性结果表明,化合物30、31、36、37等4个化合物抗HIV-1活性与先导化合物相当。结论 7-苯甲酰基中氮茚-1-羧酸乙酯类化合物作为HIV-1 VIF复合物抑制剂,中氮茚环与取代芳环之间含3～4个原子长度为保持活性所必须,进一步的构效关系值得继续研究。
- 顾海东黄文林夏杰左陶张亮仁于湘晖
- 关键词：中氮茚化学合成
- 多巴胺能神经营养因子真核表达、纯化及多克隆抗体制备被引量：1
- 2015年
- 目的:获得具有活性的脑多巴胺能神经营养因子(CDNF)蛋白并制备CDNF多克隆抗体。方法:选用VR1012作为真核表达载体,在HEK293T细胞中表达带有his标签的CDNF蛋白,镍柱亲和层析进行纯化,SDS-PAGE检测纯化情况,Western blot鉴定蛋白的正确性,MTT检测CDNF蛋白对PC12细胞的保护活性。免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果:构建的p VR1012-CDNF-his在HEK 293T细胞中高效分泌表达,镍柱亲和层析获得纯度90%以上的CDNF蛋白,MTT结果显示纯化获得的蛋白具有对PC12细胞的保护作用。免疫动物后,成功制备出CDNF多克隆抗体。结论:通过HEK293T细胞中表达-镍柱亲和层析获得具有纯度较高且具有生物活性的CDNF蛋白,并成功制备多克隆抗体以方便后续对于CDNF应用及相关机制的研究。
- 王立正王子璇朱瑞刘镇天于彬于湘晖赵兴红
- 关键词：多克隆抗体帕金森病
- 神经氨酸酶突变体影响奥司他韦结合病毒能力的分子模拟研究
- 甲型流感是一种严重的传染性疾病,其每年都会在全球范围内夺去几十万人的生命。奥司他韦(oseltamivir)是神经氨酸酶(neuraminidase,NA)的竞争性抑制剂,它被视为目前防治流感病毒较为有效的药物。
- 管珊珊
- 关键词：甲型流感奥司他韦耐药性分子动力学模拟
- 双顺反子表达载体DV的构建及其表达效率
- 2011年
- 目的构建双顺反子表达载体DV,并检测其表达效率。方法以载体VR1012为模板,PCR扩增BGH基因和启动子CMV-intronA基因片段,分别连接至载体VR1012启动子和终止子之间的相应位点上,构建双顺反子表达载体DV。另以质粒pshuttle-luciferase为模板,PCR扩增报告基因luciferase片段,分别连接至DV的两个启动子后,得到质粒DV-luc1和DV-luc2。将质粒DV-luc1、DV-luc2和阳性质粒pshuttle-luciferase分别转染COS-7细胞,Western blot检测luciferase蛋白的表达情况,荧光酶标仪检测luciferase降解底物的水平。结果双顺反子表达载体DV经双酶切鉴定证明构建正确;转染重组质粒DV-luc1和DV-luc2的COS-7细胞中均有luciferase的表达,且表达效率DV-luc2略高于DV-luc1。结论 已成功构建了双顺反子表达载体DV,且载体的第2个启动子的启动效率略高于第1个启动子,为基因治疗、转录调控、多价疫苗等的研究奠定了基础。
- 张丽星张喜珍王玉倩刘晨露夏秋孔维于湘晖张海红
- 关键词：双顺反子
- CCID_(50)法检测流感病毒滴度方法的建立及验证被引量：2
- 2016年
- 目的建立基于MDCK细胞的三价流感减毒活疫苗病毒滴度检测方法,并进行验证。方法以抗流感病毒血清中和三价流感减毒活疫苗中两种型别病毒,采用CCID_(50)法检测未中和型别病毒感染性滴度,并对方法的专属性、线性、准确性、精密度、耐用性进行验证。结果样品中的辅料成分、其他型别病毒和异源抗病毒血清均不会对病毒滴度测定结果产生干扰;该方法检测H1N1、H3N2和B型流感病毒滴度的线性范围分别为3.81~8.48、3.48~7.65和2.45~6.98 log CCID_(50)/0.2 ml,在线性范围内,线性回归系数(R^2)分别为1、0.994 6和0.994 5;该方法检测3种型别流感病毒滴度重复性和中间精密度的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于15%,平均回收率在85%~115%之间;同一样品不同时间点检出结果差异无统计学意义(P均>0.05)。结论建立的CCID_(50)法专属性、准确度、线性、精密度、耐用性良好,是一种简便、快速、成本低、检测误差小的方法,可用于三价流感减毒活疫苗病毒滴度的检测。
- 孙瑶申镇维姜春来孟祥博徐菲
- 关键词：病毒滴度MDCK细胞
- 直接免疫荧光法检测狂犬病病毒滴度条件的优化及验证被引量：3
- 2014年
- 目的对直接免疫荧光法检测狂犬病病毒(rabies virus,RV)滴度的条件进行优化及验证。方法考察直接免疫荧光法中细胞不同接种方式(分步接种法、一步接种法)、病毒不同培养温度(34、37℃)及培养时间(6、12、24、48、72、96 h)对狂犬病病毒滴度的影响;对优化的方法进行试验间精密性和特异性验证,并与小鼠脑内滴定法的检测结果进行比较。结果选择一步接种法作为直接免疫荧光法的细胞接种方式;34℃作为病毒培养温度;病毒培养至96 h时进行染色,判定实验结果;病毒培养至第3天时进行荧光灶计数,计算病毒液中病毒的数量。两名操作人员12次检测结果的变异系数仅为0.05%;用该方法检测不同病毒,仅狂犬病病毒组出现特异性荧光,而犬瘟热病毒和犬细小病毒组未观察到荧光灶。采用直接免疫荧光法和小鼠脑内滴定法检测狂犬病病毒样品的病毒滴度结果差异无统计学意义(P>0.05),具有较好的一致性。结论优化的直接免疫荧光法精密性良好,特异性强,操作简便,检测周期短,可用于狂犬病病毒滴度的定量检测。
- 王梦舒郑宇郭丽姝陶雷程晓耕徐菲
- 关键词：狂犬病病毒直接免疫荧光法病毒滴度
- B型流感病毒在MDCK细胞上的遗传稳定性被引量：1
- 2019年
- 目的研究流感病毒NYMC BX-51B株在MDCK细胞上连续传代的遗传稳定性。方法将SPF级鸡胚制备的流感病毒NYMC BX-51B尿囊液毒株接种至MDCK细胞上,连续传代培养至10代(M1~M10),参照《中国药典》三部(2015版)毒种检定方法进行支原体和无菌检查、外源因子检查、鉴别试验,并进行血凝试验和病毒滴度检测。提取尿囊液、M1代、M10代病毒总RNA,RT-PCR法扩增血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因,并进行测序。结果流感病毒NYMC BX-51B株在MDCK细胞上连续传代培养至M10代,血凝滴度最高可达1∶256,病毒滴度最高可达6. 5 LgCCID50/mL;鉴别试验、无菌检查、支原体检查、外源因子检查结果均符合药典要求。尿囊液、M1代、M10代病毒的HA和NA基因的氨基酸序列与GenBank中登录的流感病毒NYMC BX-51B的HA和NA基因比对结果完全一致。结论 NYMC BX-51B型流感病毒在MDCK细胞基质上连续传代培养至M10代,遗传稳定性良好,为MDCK细胞基质流感疫苗的研究和生产奠定了基础。
- 刘飞雪单亚明赵大鹏张雪梅
- 关键词：B型流感病毒MDCK细胞
- 柯萨奇病毒A组6型衣壳蛋白VP1的原核表达及其抗血清的制备被引量：2
- 2019年
- 目的原核表达柯萨奇病毒A组6型(Coxsackie virus group A 6 strain,CVA6)衣壳蛋白VP1,并制备其抗血清。方法合成经密码子优化的CVA6-VP1全长基因,克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-VP1,转化感受态E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达目的蛋白,同时优化IPTG终浓度(0. 1、0. 2、0. 3、0. 5 mmol/L)、诱导温度(15、20、25、30℃)及诱导时间(6、8、12、16 h)。表达产物采用Ni-NTA柱亲和层析纯化,将纯化重组蛋白免疫新西兰兔,制备VP1抗血清,微量细胞病变法检测血清抗体效价。结果重组质粒p ET-28a-VP1经双酶切及测序鉴定,构建正确。重组蛋白最适诱导条件为:IPTG终浓度为0. 3 mmol/L,诱导温度为15℃,诱导时间为12 h。重组蛋白相对分子质量约34 000,于上清和包涵体中均有表达,纯化后纯度可达95%以上。兔血清效价均> 1∶8,呈阳性。结论成功于原核表达系统中高效表达了可溶性CVA6-VP1蛋白,且获得效价较高的抗血清。
- 刘宜赵志磊孙世洋姜春来刘照惠
- 关键词：基因重组原核表达抗血清
- 柯萨奇病毒A16型感染293T细胞的转录组研究
- 柯萨奇病毒A16 型(CVA16)作为小RNA 病毒科肠道病毒属的成员，是世界范围内导致手足口病的主要病原之一.CVA16 引起的手足口病症状多为肢端、口颊部位疱疹，严重的中枢神经系统炎症也有零星的报道.
- 苏维恒李茹姣肖景发姜春来
- 关键词：转录组MRNA-SEQ
