贵州医科大学肝胆胰脾重点实验室
- 作品数：17 被引量：58H指数：6
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- 乐伐替尼与瑞格菲尼对肝癌细胞PD-L1的作用及机制被引量：6
- 2020年
- 目的:探究乐伐替尼与瑞格菲尼在肝癌细胞中对程序性细胞死亡配体1(PD-L1)作用的分子机制。方法:取人肝癌Hep3B、SMMC-7721细胞,分别转染转化生长因子-β1(TGF-β1)空载体、干扰质粒后的肝癌细胞培养,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF 1α)、髓细胞增生原癌基因(MYC)、缺氧诱导因子-2α(HIF 2α)、信号传导与转录激活因子3(STAT 3)、黏蛋白1-C(MUC 1-C)、细胞周期素依赖蛋白激酶5(CDK 5)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK 14)、表皮生长因子受体(EGFR)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)及TGF-β1的mRNA表达,采用Western blot实验检测各组肝癌细胞中PD-L1和TGF-β1的蛋白表达量;取4周龄雌性裸鼠(BALB/c)小鼠30只,人肝癌Hep3B细胞皮下接种于小鼠右侧腹肋下,1周后将皮下成瘤的小鼠随机均分为对照组(DMSO)、乐伐替尼组(注射乐伐替尼)及瑞格菲尼组(注射瑞格菲尼),于末次给药后24 h处死小鼠,采用Western blot实验检测各组小鼠皮下瘤组织PD-L1和TGF-β1的蛋白表达量。结果:与对照组比较,乐伐替尼组和瑞格菲尼组小鼠皮下肝癌移植瘤组织中HIF 1α、MYC、HIF 2α及MUC 1-C mRNA表达均上调,STAT 3、CDK 5、MAPK14、EGFR及ALK mRNA表达均下调,但乐伐替尼组TGF-β1 mRNA表达增加,瑞格菲尼组TGF-β1 mRNA表达降低(P<0.05);与对照组比较,乐伐替尼组肝癌细胞Hep3B和SMMC-7721的TGF-β1 mRNA、PD-L1和TGF-β1蛋白表达均上升,瑞格菲尼组的TGF-β1 mRNA、PD-L1及TGF-β1蛋白表达均下降(P<0.05);肝癌细胞Hep3B和SMMC-7721干扰组TGF-β1 mRNA、PD-L 1 mRNA、TGF-β1及PD-L1蛋白表达分别较对照组降低(P<0.05)。结论:乐伐替尼使肝癌细胞PD-L 1表达上调,瑞格菲尼使PD-L 1表达下调,其机制可能是通过影响TGF-β1的表达。
- 许静喻超杨盛力孙诚谊
- 关键词：转化生长因子-Β1耐药
- 过表达microRNA-137对体外人胰腺癌细胞增殖能力的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:过表达microRNA-137(miR-137)对体外人胰腺癌增殖能力的影响及其机制初探。方法:将胰腺癌PANC-1和As PC细胞分为miR-137 mimics转染组和对照组,并通过qRT-RCR检测转染效率;利用流式细胞仪检测细胞凋亡率和周期阻滞变化,CCK-8实验、平板克隆实验检测miR-137对胰腺癌细胞增殖能力的影响,qRT-RCR、Western blot等实验检测miR-137对PTN的mRNA及蛋白表达的影响。结果:上调miR-137表达后,PANC-1、As PC胰腺癌细胞凋亡率增加(P<0.05)、周期阻滞于G1期比例增加(P<0.05);CCK8及平板克隆实验结果均显示过表达miR-137后,胰腺癌细胞增殖能力降低PTN表达显著下调。结论:miR-137在胰腺癌细胞中的表达水平影响抑制胰腺癌的增殖能力,其机制可能与抑制PTN的表达有关。
- 何志伟喻超喻超陈世裕田舍潘耀振孙诚谊
- 关键词：胰腺肿瘤增殖流式细胞术
- 缺氧下HIF-1α对胰腺癌细胞“干性”的影响及机制被引量：2
- 2017年
- 目的:通过构建人胰腺癌PANC-1、As PC细胞缺氧模型、检测缺氧对胰腺癌细胞"干性"及生物学恶性行为的影响。方法:在缺氧培养箱中构建人胰腺癌PANC-1、As PC细胞缺氧模型,通过Western Blot检测胰腺癌细胞中缺氧诱导因子(HIF-la)表达情况;通过悬浮培养成球实验检测肿瘤细胞成球生长能力,流式细胞术检测胰腺癌细胞表面CD133阳性率,PCR和Western blot实验检测常氧和缺氧培养下干性相关基因(BMI-1、OCT4A、Nanog、SOX2)在mRNA以及蛋白水平的表达差异,免疫荧光观察CD133的表达量以及其定位变化。结果:随着缺氧时间的延长,HIF-1a、CD133表达逐渐上升,在16 h时HIF-1a表达处于高峰;缺氧时间超过16 h后,随着HIF-1a表达降低,CD133表达也降低,同时缺氧胰腺癌细胞悬浮成球能力增强,CD133+细胞比例增多,干性标记物mRNA表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05);缺氧培养下胰腺癌表面标记CD133阳性率显著上调,差异具有统计学意义(P<0.05);在缺氧条件下,下调HIF-1α后,BMI-1、OCT4A、Nanog、SOX2表达显著下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:缺氧可诱导胰腺癌细胞"干性"维持或增强,在缺氧条件下HIF-lα对胰腺癌细胞"干性"调节有着重要作用。
- 何志伟喻超喻超陈世裕田舍潘耀振孙诚谊
- 关键词：胰腺肿瘤缺氧缺氧诱导因子干性CD133
- SYT1对肝癌细胞侵袭、转移的影响及其分子机制被引量：1
- 2020年
- 目的:研究突触囊泡蛋白Ⅰ(SYT1)对肝癌侵袭转移的影响及其机制。方法:选择人肝癌细胞(Hep3B、Huh7、HCCLM3、SMMC-7721、HLF和BEL-7404)和人正常肝细胞HL-7702作为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应实验(q PCR)检测SYT1在这些细胞中的表达;选取150例原发性肝癌组织及其对应癌旁组织作为研究对象,通过免疫组化实验分析SYT1在这两种组织中的表达;选择肝癌细胞Hep3B、Huh7作为观察对象,根据转染的载体不同分别将其分为对照组(转染表达空载体)、干扰组(转染干扰质粒)和过表达组(转染过表达质粒),通过Transwell迁移实验和OrisTM细胞迁移实验检测SYT1对肝癌细胞迁移能力的影响,通过Transwell侵袭实验检测SYT1对肝癌细胞侵袭能力的影响,采用Western blot实验检测上皮-间充质细胞转化(EMT)相关蛋白钙黏附蛋白E(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:SYT1的m RNA和蛋白在肝癌组织中的表达高于对应的癌旁组织(P<0.05);从基因水平检测SYT1的表达,SYT1在肝癌细胞中的表达高于正常肝细胞,Huh7和Hep3B细胞中SYT1的表达高于其他肝癌细胞(P<0.05);与对照组比较,干扰组的肝癌细胞迁移、侵袭能力降低,过表达组的肝癌细胞迁移、侵袭能力增强(P<0.05);与对照组比较,干扰组的肝癌细胞E-cadherin蛋白表达增多,Vimentin蛋白表达量减少(P<0.05)。结论:干扰SYT1的表达能抑制肝癌细胞EMT过程,进而抑制其侵袭、迁移能力。
- 许静喻超杨盛力孙诚谊
- 关键词：肝肿瘤波形蛋白迁移
- 原发性肝癌患者血清代谢产物初步研究被引量：7
- 2017年
- 目的:分析原发性肝癌(PHC)患者血清中小分子代谢产物的改变,为早期诊断和治疗原发性肝癌提供依据。方法:收集52例原发性肝癌(实验组)和同期17例正常体健者(对照组)血清,Bruker 600核磁共振检测两组血清中小分子代谢产物,通过主成分分析法比较两组受检者血清中代谢产物含量的差别情况。结果:与对照组比较实验组血清中α-葡萄糖、β-葡萄糖、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、糖蛋白、乳酸盐、异丁酸盐、丙氨酸、精氨酸、赖氨酸及肌酸等含量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:质子核磁共振代谢组学技术可以无创而有效地识别肝癌患者血清代谢变化,有望成早期诊断原发性肝癌的一种新的方法。
- 蔡坤田舍喻超陈世裕张乙凡潘耀振孙诚谊
- 关键词：肝肿瘤血清
- microRNA-100对胰腺癌细胞侵袭和转移能力的影响及机制被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨miR-100对胰腺癌细胞在体外侵袭和迁徙能力的影响及其机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶连反应(qRT-PCR)检测miR-100在6株人胰腺癌细胞系及1株人正常胰腺上皮细胞系中的表达,选取表达差异较明显的PANC-1和MIA PaCa-2细胞系进行后续实验;针对miR-100设计miR-100 mimic和空载体(NC),并转染上述两株细胞系中,用PCR检测转染效率;Transwell实验及划痕实验检测miR-100对胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响,免疫荧光检测miR-100对胰腺癌细胞骨架的影响,Western blot检测转染细胞后FZD-8的表达。结果:PCR实验显示miR-100在胰腺癌细胞系中低表达,在正常胰腺上皮细胞系中高表达,所设计的miR-100 mimic可以有效地升高PANC-1和MIA PaCa-2细胞系中miR-100的表达;Transwell实验及划痕实验显示转染miR-100之后,能有效的抑制胰腺癌细胞的侵袭及迁移能力(P<0.05);免疫荧光显示转染miR-100后,F-肌动蛋白(F-actin)减少;Western blot结果显示,转染miR-100后,FZD-8的表达减少,胰腺癌细胞的侵袭转移能力明显降低。结论:上调miR-100后,胰腺癌细胞可能通过下调FZD-8的表达来抑制其侵袭转移的能力,提示miR-100有望成为胰腺癌治疗的潜在靶点。
- 黄巍孙诚谊喻超潘耀振田舍张乙凡陈世裕江建新
- 关键词：胰腺肿瘤
- 青藤碱对人胰腺癌细胞系PANC-1侵袭转移的影响
- 2017年
- 目的:体外实验探讨青藤碱对胰腺癌细胞PANC-1侵袭和迁移能力的影响。方法:用高糖培养基DMEM培养胰腺癌PANC-1细胞,取对数期生长的细胞,实验组用0.5、1.0 mmol/L青藤碱处理,运用侵袭和迁移实验研究青藤碱对胰腺癌侵袭转移的影响,采用激光共聚焦实验观察青藤碱对细胞骨架的改变,免疫印迹技术检测青藤碱对胰腺癌细胞PANC-1 E-钙粘着蛋白Nimentin和波形蛋白(E-cadherin)表达水平的改变。结果:实验组PANC-1细胞穿过铺有Matrigel胶小室的细胞数量显著减少,差异有统计学意义(P<0.05);细胞划痕实验表明,青藤碱处理24 h和48 h的胰腺癌细胞迁移速度明显小于对照组(P<0.05);激光共聚焦显示,实验组PANC-1细胞内绿色荧光染色的F-actin与对照组比较显著减少,且荧光强度也较弱(P<0.05);β-微管蛋白(β-tubulin)红色荧光强度明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05);免疫印迹结果显示,实验组Vimentin逐渐减少,E-cadherin逐渐增多,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:一定浓度的青藤碱可抑制体外胰腺癌PANC-1细胞的侵袭和转移能力。
- 朱昌毫孙诚谊喻超田舍张乙凡陈世裕潘耀振
- 关键词：胰腺肿瘤植物药青藤碱
- 艾迪注射液对人肝癌细胞株多药耐药性的逆转作用被引量：7
- 2017年
- 目的:探讨艾迪注射液对人肝癌细胞株Bel-7402/5-FU多药耐药性(MDR)的逆转作用及可能机制。方法:采用5-氟尿嘧啶(5-FU)药物浓度梯度递增法建立人肝癌MDR细胞株Bel-7402/5-FU,采用cck-8法检测Bel-7402及Bel-7402/5-FU对5-FU、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)、甲氨蝶呤(MTX)、环玲酰胺(CTX)及顺铂(CDDP)6种化疗药物的敏感性、并计算半数致死浓度(IC50)及6种化疗药物对Bel-7402/5-FU细胞的IC50及耐药指数(RI),同时观察不同浓度艾迪注射液对Bel-7402/5-FU细胞的抑制率,Western blot法检测经过IC50艾迪注射液处理的Bel-7402/5-FU细胞中多药耐药相关蛋白1(MRP1)、P-糖蛋白(P-gp)、程序化死亡因子5蛋白(PDCD5)的表达水平。结果:6种化疗药物对Bel-7402/5-FU细胞株的IC50较Bel-7402细胞株明显升高,与Bel-7402细胞相比,Bel-7402/5-FU细胞株中MRP1、P-gp表达明显升高,PDCD5表达明显降低(P<0.05);经IC50艾迪注射液处理后的Bel-7402/5-FU细胞中升高的MRP1、P-gp表达和PDCD5降低得到抑制(P<0.05)。结论:艾迪注射液具有逆转肝癌细胞MDR的作用,其机制可能与下调多药耐药相关蛋白MRP1、P-gp表达,上调凋亡相关蛋白PDCD5的表达有关。
- 喻贡金李红霞喻超刘兴贵
- 关键词：多药耐药交叉耐药艾迪注射液
- 肝癌ceRNA调控网络的分析研究被引量：1
- 2018年
- 目的:通过对TCGA数据库中肝癌和癌旁组织lnc RNA、mi RNA和m RNA进行差异表达分析,研究lnc RNA、mi RNA和m RNA对肝癌发生发展的影响。方法:用得到差异表达的lnc RNA、mi RNA和m RNA构建肝癌ce RNA调控网,明确肝癌中lnc RNA、mi RNA和m RNA之间相互作用的关系及其对肝癌发生发展的影响;为了进一步明确ce RNA调控网对肝癌疾病的作用,对ce RNA调控网中的m RNA进行GO注释分析、KEGG通路分析和蛋白互作分析。结果:发现调控网中的m RNA在肿瘤Mi RNAs、细胞周期、膀胱癌、黑色素瘤、小细胞肺癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌、P53信号通路、PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路等18个KEGG信号通路中明显富集(校正后的P<0.01),通过对肝癌ce RNA调控网中的lnc RNA、mi RNA和m RNA进行Kaplan-Meier曲线分析,筛选与肝癌预后有明显相关性的lnc RNA、mi RNA和m RNA。结论:lnc RNA LOC107985899影响mi RNA-137的表达,从而调控m RNA MITF的表达;lnc RNA C2orf48、C10orf91、LINC00114影响mi RNA-204的表达,从而调控m RNA ITPR1、BCL2、AP1S2、TGFBR2、SLC43A1、PRLR、ZCCHC24、ANGPTL2、CHRDL1的表达;lnc RNA LOC107985899影响mi RNA-222的表达,从而调控m RNA ESR1、TIMP3、ZEB2、GALNT3的表达。
- 张乙凡潘耀振陈玲喻超孙诚谊
- 关键词：肝癌长链非编码RNAMICRORNA
- CDCA7通过与MCM3相互作用介导胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移被引量：3
- 2021年
- 目的:探讨细胞分裂周期相关蛋白7(cell division cycle-associated protein 7,CDCA7)对人胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,及其可能的作用机制。方法:利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达谱数据动态分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库分析胰腺癌组织及癌旁组织中CDCA7表达水平的差异,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测CDCA7 mRNA和蛋白在人正常胰腺导管上皮细胞HPDE和人胰腺癌Bxpc-3、CFPAC-1、PANC-1、MIA PaCa-2、Capan2及SW1990细胞中的表达水平。构建干扰CDCA7基因表达的重组慢病毒,稳定转入PANC-1细胞,并分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测干扰效率。干扰CDCA7基因表达后,分别采用CCK-8法和平板克隆实验检测对PANC-1细胞增殖能力的影响,细胞划痕愈合实验及Transwell小室法检测对PANC-1细胞迁移及侵袭能力的影响;进一步采用蛋白质印迹法检测干扰CDCA7表达后对上皮-间质转化相关蛋白波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin),以及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cyclin E1表达水平的影响。通过生物信息学网站(STING和GEPIA)预测CDCA7与微型染色体维持蛋白3(minichromosome maintenance protein 3,MCM3)的关系,并进一步采用免疫共沉淀法检测CDCA7与MCM3的相互作用,采用蛋白质印迹法检测干扰CDCA7表达后MCM3蛋白表达水平的变化。结果:CDCA7在胰腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05);CDCA7 mRNA及蛋白在胰腺癌PANC-1、MIA PaCa-2和SW1990细胞中的表达水平均明显高于人正常胰腺导管上皮细胞HPDE(P值均<0.05)。干扰CDCA7表达后,PANC-1细胞中CDCA7 mRNA和蛋白的表达水平明显下降(P值均<0.05),PANC-1细胞的增殖、侵袭及迁移能力明显降低(P值均<0.05);Vimentin、cyclin D1和cyclin E1蛋白的表达水平均明显下调,而E-cadherin蛋白的表达水平明显上调(P值均<0.05)。CDCA7与MCM3�
- 邓路何志伟朱昌毫陈世裕刘燕青李琳孙诚谊喻超
- 关键词：胰腺肿瘤细胞增殖细胞运动
