广西中医药大学生物化学教研室
- 作品数：2 被引量：11H指数：1
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- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西教育厅立项科研项目更多>>
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- 腰椎间盘突出症活血化瘀治疗的目标蛋白筛选及鉴定被引量：11
- 2016年
- 背景活血化瘀属于中医药特色疗法,也是临床上非手术治疗腰椎间盘突出症(LIDP)疗效优良的主要方法之一,既往有学者从病理、影像、免疫及基因等角度开展了大量研究,但有关活血化瘀治疗LIDP机制仍未明了。目的通过同位素标记相对和绝对定量技术(i TRAQ)结合液相色谱与串联质谱(LC-MS/MS)筛选和鉴定LIDP活血化瘀治疗前后差异表达蛋白,筛选LIDP活血化瘀治疗的目标蛋白。方法选取2013年7月—2014年12月于广西中医药大学第一附属医院治疗的血瘀证LIDP患者30例为研究对象,予活血化瘀治疗4周,观察患者临床疗效。分别于治疗前后提取患者外周血血清,通过去除高丰度蛋白、测定蛋白浓度、酶解蛋白、肽段i TRAQ标记、高效液相色谱分离、LC-MS/MS分析等程序和方法,筛选及鉴定治疗前后的差异表达蛋白。结合基因本体论注释及KEGG通路分析相关生物信息学,对差异蛋白的功能和代谢通路进行分析。结果治疗后临床控制19例,显效8例,有效2例,无效1例,总有效率为96.7%(29/30)。i TRAQ联合LC-MS/MS鉴定到300个蛋白质组,其中209个蛋白各通道标记标签均有定量信息,筛选出20个差异表达蛋白,其中呈上调表达及下调表达的差异蛋白各10个。本研究对20个差异蛋白的KEGG富集结果显示,9个差异蛋白富集到27条信号通路。补体和凝血级联反应富集到3个差异蛋白,PPAR信号通路、百日咳、美洲锥虫病、金黄色葡萄球菌感染及系统性红斑狼疮富集到2个差异蛋白。百日咳、美洲锥虫病、金黄色葡萄球菌感染及系统性红斑狼疮等11条信号通路富集到补体C3,PI3K-Akt信号通路、黏着斑、肌动蛋白细胞骨架调节等9条信号通路富集到纤维连接蛋白1。结论活血化瘀治疗血瘀证LIDP效果显著;载脂蛋白A1、载脂蛋白M、载脂蛋白C3、纤维连接蛋白1及补体C3很可能是血瘀证LIDP选用活血化瘀治疗的潜在血清靶蛋�
- 关鹏尹利军许建文韦家鼎李智斐邰志洪桂裕昌韦玉兰
- 关键词：椎间盘移位证型活血祛瘀剂蛋白质组学
- 癌-睾丸抗原GAGE-1基因的重组、表达及纯化
- 2014年
- 目的为进一步研究临床应用癌-睾丸抗原GAGE-1诱导特异性抗肿瘤免疫反应,对GAGE-1基因进行克隆、体外原核重组表达及蛋白分离纯化。方法运用RT-PCR技术从人QGY-7701肝癌细胞株中扩增GAGE-1基因片段,插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-GAGE-1,并导入大肠杆菌BL21,IPTG诱导目的蛋白表达;经包涵体透析复性及GST柱亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析鉴定。结果扩增得到GAGE-1基因5’端251 bp片段,与GeneBank公布的序列一致,构建的PGEX-6p-1-GAGE-1原核表达质粒经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达分子量约35.7 kD的GST-GAGE-1融合蛋白,纯化后蛋白纯度为90%以上。结论成功构建PGEX-6p-1-GAGE-1重组表达质粒,并成功表达纯化了GST-GAGE-1融合蛋白,为进一步深入研究GAGE蛋白奠定了基础。
- 赵飞兰李立志封毅卓少元钟卫干范蓉
- 关键词：原核表达纯化融合蛋白
