暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心
- 作品数：4 被引量：33H指数：3
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- VEGF189基因合成、原核表达及鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的获得编码VEGF189蛋白的基因,并通过原核表达系统表达VEGF189融合蛋白。方法应用SOE PCR技术合成VEGF189基因,克隆入pET-32a(+)原核表达载体,转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western blot检测,表达产物经HisTrapTMHP亲和柱层析纯化,测定蛋白浓度。结果DNA测序分析表明,合成的VEGF189基因与文献报道相一致。在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的Trx-VEGF189融合蛋白,以包涵体和可溶2种形式存在。表达产物可被兔抗鼠VEGF多抗特异识别。经HisTrapTMHP亲和柱纯化,获得纯度达85%的融合蛋白。结论成功合成VEGF189基因,并在原核表达系统中获得高表达,为研制高效抗肿瘤的VEGF抗体和疫苗奠定了前期基础。
- 陈丹王宏朱中松向军俭杨琴赵鑫邓宁
- 关键词：原核表达
- 镉离子单克隆抗体的鉴定及竞争ELISA的建立被引量：17
- 2009年
- 目的制备Cd2+单克隆抗体(McAbs,单抗),建立Cd2+间接竞争酶免疫学检测方法(ELISA)。方法利用双功能螯合剂iEDTA将Cd2+分别与血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备免疫抗原和检测抗原。免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术制备抗Cd2+的单抗。鉴定单抗的效价、特异性、亚类及亲和力。以该抗体为基础建立检测镉离子的间接竞争ELISA方法,分析该方法的灵敏度、检测限、工作范围。结果成功制备出Cd-iEDTA-KLH和Cd-iEDTA-BSA偶联物;筛选出一株稳定分泌抗Cd-iEDTA单抗的杂交瘤细胞株C2C5,该细胞株分泌的抗体亚类为IgG1,腹水抗体效价为1×106,相对亲和力结合常数Ka为1.6×109L/mol。特异性结果显示,除Hg2+外,该抗体与Pb2+、Fe3+、Mn2+、Mg2+、Zn2+、Al3+、Ni2+、Ca2+、Cu2+等金属离子的交叉反应低。建立了检测镉离子的间接竞争ELISA方法,该方法的检测限为10ng/mL,IC50为250ng/mL。结论建立了镉离子的竞争ELISA检测方法,检测限达到无公害水产品的国家标准(100ng/g)。
- 唐勇王建华向军俭王宏邓宁杨红宇
- 关键词：镉离子单克隆抗体竞争ELISA
- 牛乳中主要过敏原组分的分离纯化及鉴定被引量：10
- 2007年
- 目的:分离纯化并鉴定牛乳中引起过敏反应的主要致敏组分。方法:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE)分析了脱脂乳和乳清的蛋白组分,用饱和硫酸铵分段盐析-DEAE离子交换柱层析纯化过敏原蛋白,脱脂乳和乳清蛋白皮下注射Balb/c小鼠获得高效价特异性IgE抗血清用于免疫印迹分析。结果:免疫印迹分析显示β-乳球蛋白(β-Lg)是引起牛乳过敏的主要过敏原,建立了牛乳过敏小鼠模型。结论:明确了牛乳过敏的主要过敏组分,对牛乳过敏症的诊断治疗以及无过敏原牛乳的制备提供了实验依据。
- 毛露甜向军俭张在军
- 关键词：牛乳食物过敏原免疫印迹
- bFGF单抗的抗血管新生作用被引量：2
- 2011年
- 目的在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)以及鸡胚中来研究抗碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单抗对血管新生的作用。方法制备3种腹水型bFGF单抗MabF7,MabF10,MabF12。CCK-8法检测bFGF单抗对HUVECs细胞增殖的影响;Transwell小室研究bFGF单抗对HUVECs迁移的影响;ECM gel检测其对HUVEC体外成管的影响;并研究其体内对鸡胚尿囊膜(CAM)血管新生作用。结果 MabF7,MabF10,MabF12均可中和bFGF的活性;3株单抗均可抑制内皮细胞迁移过程,无抗体组,对照抗体组,MabF7,MabF10,MabF12组细胞迁移率分别为100%,106.25%±7.89%,69.50%±6.86%,74.00%±4.16%,67.75%±3.30%;3株单抗均可抑制内皮细胞成管过程,无抗体组,对照抗体组,MabF7,MabF10,MabF12组管状结构形成率分别为:100%,105.93%±3.85%,56.53%±4.35%,29.23%±6.45%,12.77%±2.67%;计数尿囊膜上加药滤纸周围呈放射状的血管条数,bFGF组,bFGF+MabF7组,bFGF+MabF10组,bFGF+MabF12呈放射状的血管条数分别为15±0.82,7.5±1.29,13.5±3.10,8.5±0.58。结论 bFGF单抗对HUVECs的增殖、迁移、成管以及鸡胚尿囊膜血管新生均有抑制作用,从而为具有抗肿瘤作用的抗体药物的研发奠定基础。
- 王盼盼王宏李丹向军俭邓宁
- 关键词：HUVECS鸡胚尿囊膜抗血管新生
