贵州医科大学微生物与生化药学工程中心
- 作品数：18 被引量：40H指数：4
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- 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>
- 黄连素对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤的治疗作用研究被引量：5
- 2022年
- 为了探究黄连素对四氯化碳(CCl_(4))诱导的肝损伤的治疗效果及作用机制,试验选取80只健康昆明雌性小鼠,其中40只用于急性肝损伤试验,另外40只用于慢性肝损伤试验。急、慢性肝损伤试验中均将小鼠均随机分为对照组、模型组、黄连素组、水飞蓟宾组,每组10只。急性肝损伤试验中,黄连素组、水飞蓟宾组每天分别以黄连素(按体重25 mg/kg)溶液、水飞蓟宾(50 mg/kg)溶液预处理小鼠7 d后,一次性口服0.6%CCl_(4)(按体重5μL/g)。慢性肝损伤试验中,采用灌胃0.6%CCl_(4)溶液(按体重5μL/g),每周2次,连用6周,成功复制慢性肝损伤模型后黄连素组、水飞蓟宾组每天用黄连素(按体重50 mg/kg)溶液、水飞蓟宾(50 mg/kg)溶液治疗30 d。急性肝损伤和慢性肝损伤小鼠末次给药后间隔24 h,眼眶采血后处死小鼠,收集血清,检测天门冬氨酸氨基转移(AST)与丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性;取肝脏称湿重,计算肝脏指数;取肝脏左叶约1 cm×1 cm×0.25 cm,浸泡于4%多聚甲醛缓冲液中,用于病理组织学检查;其余肝脏组织称重匀浆,检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)活性及丙二醛(MDA)含量。结果表明:在急、慢性肝损伤试验中,与模型组比较,黄连素组小鼠肝脏指数极显著降低(P<0.01),肝脏组织病变明显减轻。在急性肝损伤试验中,与模型组比较,黄连素组小鼠血清AST、ALT活性均极显著降低(P<0.01),肝脏中MDA含量显著降低(P<0.05),SOD、GSH活性均显著升高(P<0.05)。在慢性肝损伤试验中,与模型组比较,黄连素组小鼠血清AST活性极显著降低(P<0.01),ALT活性显著降低(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05),肝脏中SOD、GSH活性均极显著升高(P<0.01)。说明黄连素可减轻肝损伤小鼠炎症程度并明显改善慢性肝损伤小鼠组织增生情况。
- 陈岩勤范婷婷杨盛刚张二东刘绍欢文波何彬王聪高秀丽
- 关键词：急性肝损伤慢性肝损伤黄连素四氯化碳
- 白纹伊蚊rAlb-34k2蛋白诱导小鼠皮肤补体固有成分及CRIg的变化
- 2020年
- 目的探讨白纹伊蚊唾液特异性34k2重组蛋白(rAlb-34k2)刺激(小鼠腹腔巨噬细胞)RAW264.7及C57BL/6小鼠后补体相关成分mRNA的变化。方法分别用不同浓度rAlb-34k2蛋白刺激RAW264.7细胞和C57BL/6小鼠足垫,采集样本,Trizol提取RNA,逆转录为cDNA后经实时荧光定量PCR方法检测刺激后不同时间各组标本中补体C3、C1q、CfB、CRIg的mRNA变化。结果rAlb-34k2诱导CfB、C3、C1q的mRNA表达上调,且皮肤组织上调幅度高于RAW264.7细胞,其中以CfB mRNA的上调幅度及持续更为显著,在诱导24h时各组(5μg、20μg)2-△△CT值分别是23.90±8.38、8.50±1.64(P<0.05);但刺激12-24h时高剂量组与低剂量组比较上调幅度差异无统计学意义(P>0.05)。在RAW264.7细胞,以刺激6h各种补体固有分成CfB、C3、C1q表达上调,但随时间延长均恢复至正常水平,各剂量组间差异不明显。在局部皮肤组织,rAlb-34k2刺激24h后CRIg表达上调,且呈浓度和时间依赖趋势;48h时,各组rAlb-34k2(5μg、20μg)2-△△CT值达到高峰,分别为8.67±2.44和32.98±9.74,有统计学差异(P<0.05)。在Raw264.7细胞,刺激6h时CRIg有上调表达趋势,但随时间延长而下调,各剂量组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白参与调控巨噬细胞及皮肤补体重要成分的表达变化,在组织中尤为显著,且显著上调定居组织的巨噬细胞特异性膜受体CRIg。
- 金芮田炎珅朱亚妮代薇露卢涛徐昊朱俐兰朱家洪吴家红吴家红
- 关键词：白纹伊蚊补体巨噬细胞
- 姜黄素结肠定位片的制备及其体外释放评价被引量：1
- 2020年
- 目的制备姜黄素结肠定位包衣片,对其进行质量控制,并考察其体外释放度。方法片芯采用湿法制粒制备,测定其脆碎度、重量差异、硬度;Ⅲ号丙烯酸树脂作为包衣材料,普通滚转包衣法对片芯进行包衣,对其进行冲击强度试验、耐湿耐水试验;采用紫外可见分光光度法测定其体外释放度。结果制备的姜黄素片芯和包衣片按2015版的《中国药典》方法进行检测,均达标。结论制备的姜黄素结肠定位包衣片具有结肠定位靶向释药作用。
- 陈岩勤黄家宇陆家堂杨盛刚高秀丽
- 关键词：姜黄素结肠定位包衣片体外释放度
- 苗岭纳豆素胶囊对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用被引量：2
- 2018年
- 目的探讨苗岭纳豆素胶囊对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法 48只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注模型组,阳性药物普萘洛尔组,苗岭纳豆素胶囊高、中、低剂量组;假手术组及模型组每天按1 m L/100 g灌胃生理盐水,普萘洛尔阳性组,高、中、低剂量组,药物用生理盐水配置,灌胃给药,每天2次。用8%水合氯醛麻醉,按结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支方法造模,缺血30 min,再灌注180 min,实时监测心电图ST段及T波的变化。假手术组只穿线不结扎冠状动脉前降支。再灌注末股动脉采血,检测血清中谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(c Tn I)、超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等相关指标变化,同时利用TTC染色法对各组心肌梗死面积进行测定。结果与假手术组比较,模型组ST段明显抬高或T波高耸,血清中AST、LDH、CK-MB活性及c Tn I、MDA、TNF-α的量均明显升高,SOD活性显著降低,梗死面积显著增大(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较,普萘洛尔组和苗岭纳豆素胶囊各剂量组抑制ST段抬升或T波增大,降低AST、LDH、CK-MB释放,同时显著抑制血清中c Tn I、MDA、TNF-α上升,提高SOD活力(P<0.01或P<0.05),并且心肌梗死面积明显减小(P<0.001)。结论苗岭纳豆素胶囊对心肌缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用。
- 向红霞王鹏娇刘燕张硕孟小夏王佳高秀丽
- 关键词：心肌缺血再灌注梗死面积
- 姜黄素对小鼠溃疡性结肠炎疗效及免疫作用机制
- 2023年
- 目的研究姜黄素(Cur)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠急性溃疡性结肠炎(UC)的疗效及免疫作用机制。方法采用DSS灌胃造模,随机分为正常组(N组)、模型组(M组)、柳氮磺胺吡啶组(SASP组)和Cur高、中、低剂量组(Cur-H、Cur-M、Cur-L组),给予相应剂量药物,通过进行疾病活动指数(DAI)评分、结肠组织学观察、小鼠血清白细胞介素(IL)-17A、IL-2、IL-23、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量检测、碳粒廓清及结肠组织髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的水平测定来研究Cur对UC小鼠免疫作用机制的影响。结果经Cur治疗后,DAI评分降低、溃疡程度减轻、IL-2表达水平增加,IL-17A、IL-23、TNF-α表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Cur-H组、Cur-M组脾脏指数、廓清指数k及校正吞噬指数α与M组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论对UC小鼠具有治疗作用的Cur可增强小鼠的免疫功能。
- 陈岩勤李燕杨盛刚张二东文波何彬王聪高秀丽
- 关键词：溃疡性结肠炎姜黄素疾病活动指数
- 埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制蛋白基因家族的筛选和表达谱分析被引量：2
- 2017年
- 目的筛选并鉴定埃及伊蚊(Aedes aegypti)全基因组中的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白(serine protease inhibitor,serpin)基因,分析其基因结构以及在不同发育时期和不同组织中的表达谱。方法运用生物信息学方法在埃及伊蚊全基因组数据库中筛选并鉴定埃及伊蚊serpin基因家族,利用Vector NTI11.0软件进行同源性比对、保守性分析,采用MEGA7.0软件构建系统进化树。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测埃及伊蚊不同发育时期(卵、Ⅰ~Ⅳ龄幼虫、蛹、雄蚊和未吸血雌蚊),以及未吸血雌蚊不同组织(唾液腺、中肠、脂肪体和卵巢)的serpin基因表达变化。结果从埃及伊蚊全基因组中筛选出26条serpin基因序列。生物信息学分析结果显示,19条具有信号肽,16条推测具有抑制酶活性。进化分析表明,埃及伊蚊serpin基因家族被分为A、B和C分支,B分支分为4组,每分支均具有同源性,且不同成员间在进化上相对保守。qRT-PCR结果显示,Aa SRPN25在雌蚊中特异性表达,相对表达量为0.074±0.015(P<0.01);Aa SRPN19~22在雄蚊中丰富表达;Aa SRPN23在Ⅰ龄幼虫时期特异性高表达,而且在唾液腺中也特异性高表达,相对表达量分别为22.9±5.28和4.24±1.39(P<0.01);Aa SRPN25在唾液腺中特异性高表达,相对表达量为74.44±25.76(P<0.01),Aa SRPN6、Aa SRPN14在中肠中的表达量最高,相对表达量分别为1.80±0.33、0.703±0.501;Aa SRPN17、Aa SRPN20在脂肪体中的表达量最高,相对表达量分别为0.34±0.09、0.15±0.03。结论从埃及伊蚊全基因组中筛选出26条serpin基因序列,其中19条具有信号肽,16条推测具有抑制酶活性的作用。
- 程金芝刘鉴翟慧吕清巧颜凤商正玲吴家红
- 关键词：埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制剂
- 不同相对分子质量的聚乙二醇对黄芩苷药代动力学的影响被引量：2
- 2021年
- 本文旨在考察不同相对分子质量(MW:400、1 000、4 000)的药用辅料聚乙二醇(PEGs)对黄芩苷药代动力学的影响,并初步分析其作用机制。分别给大鼠灌胃相应的黄芩苷(168 mg·kg~(-1))+水溶液和黄芩苷+PEGs溶液收集给药后0~24 h内的血浆,使用UPLC-MS/MS测定不同时间点黄芩苷及其主要代谢物黄芩素6-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(B6G)在血浆内的浓度,并以DAS 3.0软件求算药代动力学参数。基于体外代谢酶孵育法探究不同相对分子质量的PEGs对尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A8 (UGT1A8)和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A9 (UGT1A9)活性的影响。不同相对分子质量的PEGs与黄芩苷共给药后,显著提高了黄芩苷及B6G的AUC_(0-t),同时使C_(max)升高t_(1/2)延长,结果表明PEGs能有效提高黄芩苷及B6G的体内浓度,其机制可能为不同相对分子质量的PEGs能够促进UGT1A8和UGT1A9的活性,使得黄芩苷和B6G的转化速率提升,其中对B6G的促进程度高于原型药物黄芩苷,表明PEGs对UGT1A8具有更高的亲和力,其中以PEG400的作用最为显著。本研究以期对黄芩苷等黄酮类药物的临床安全用药及PEGs参与的药物新剂型的设计提供依据。本研究中动物实验方案已获得贵州医科大学实验动物伦理委员会的批准。
- 周明皓张敏张硕王鹏娇孟小夏曹思源杨七妹高秀丽
- 关键词：聚乙二醇黄芩苷药代动力学
- 刺梨中鞣花酸的分离鉴定及提取工艺的优化
- 2023年
- 目的:本研究旨在建立刺梨中鞣花酸的分离纯化方法,并对提取鞣花酸的酸水解法进行工艺优化。方法:以刺梨干果为原料,通过超声辅助提取法提取单宁酸,加酸进行水解制得粗鞣花酸,并通过甲醇重结晶进行纯化,采用高效液相色谱测定其纯度,及核磁共振波谱法(NMR)、红外光谱法(IR)、质谱法(MS)、高效液相色谱法(HPLC)、紫外光谱法(UV)对提取得到的鞣花酸进行结构确证,另外,以得率为指标,以酸浓度、提取温度、提取时间、液料比为自变量,在单因素实验的基础上,通过Box-Benhnken中心组合设计和响应面分析法确定刺梨鞣花酸的酸水解工艺条件。结果:从刺梨中提取得到了鞣花酸提取物,通过HPLC分析测定其纯度达到92%,鞣花酸提取物的最大吸收波长254 nm,分子离子峰m/z 301.00,红外吸收各波数与标准品一致,并利用^(1)H-NMR,^(13)C-NMR确定了其结构。通过响应面法得到了酸水解法制取鞣花酸的最优工艺:酸浓度5%,提取温度127℃,液料比为8:1 mL/g,提取时间9.8 h,在此条件下刺梨鞣花酸的得率为30.2%±2.3%(与预测值相比P>0.05)。结论:本研究建立了一种刺梨中鞣花酸简便高效的纯化方法并对其进行了结构确证,并获得了酸水解法制取鞣花酸的最优工艺,为刺梨资源的开发利用提供了参考。
- 刘玉杰季嘉城张硕唐丽陈浪张敏王鹏娇李韬高秀丽
- 关键词：刺梨鞣花酸纯化
- 检测DENV-2活病毒含量RTCA标准曲线法的建立
- 2018年
- 目的利用实时无标记细胞分析系统(real-time cellular analysis,RTCA)建立半数细胞指数时间(CIT50)与病毒滴度(TCID50)相关性的标准曲线,评估RTCA技术在监测2型登革病毒(DENV-2)感染BHK细胞后引发细胞病变效应(CPE)中的可行性和应用价值。方法检测不同培养条件下BHK细胞的CI值变化,筛选合适的初始细胞接种密度及血清浓度;应用RTCA分析已知不同TCID50滴度DENV-2感染BHK细胞的CIT50值,构建CIT50-TCID50标准曲线,计算回归方程;收集DENV-2感染C6/36细胞后第1~4d的培养上清(D1,D2,D3,D4),利用RTCA法和TCID50法分别检测上清中DENV-2滴度,分析CIT50-TCID50标准曲线法的灵敏度和可行性。结果 BHK细胞以初始接种密度为2×104个/孔,血清浓度为2%的培养条件为最佳;不同滴度DENV-2感染后BHK细胞的生长曲线均左移,CIT50与TCID50间呈线性负相关,线性方程为y=-7.007x+75.546(R2=0.9854);不同时间感染C6/36细胞培养上清中病毒含量(logTCID50/mL):RTCA标准曲线法为4.90±0.05(D2)、6.18±0.20(D3)、6.04±0.10(D4);传统TCID50法为0(D1)、6.25±0.49(D3)、5.87±0.35(D4)。结论利用RTCA技术建立的CIT50-TCID50标准曲线法,可用于已知DENV-2在BHK细胞的定量检测,结果较TCID50法更客观,且该法操作便捷且灵敏度高,为评估DENV-2感染性活病毒颗粒的毒力提供了新的技术手段。
- 宋航田炎珅徐倩马亚萍程金芝吴家红吴家红
- 关键词：登革病毒TCID50细胞病变效应
- 贵阳市致倦库蚊成蚊对4种常用杀虫剂抗药性调查被引量：2
- 2019年
- 目的了解贵阳市致倦库蚊成蚊对4种常用杀虫剂的抗药性水平。方法2015年8 - 9月,用幼虫勺捕法采集贵阳市8个地区的野外致倦库蚊幼虫,在实验室饲养至成蚊。采用接触筒法测定成蚊对4种常用杀虫剂的抗药性,计算1 h击倒率和恢复24 h死亡率。根据死亡率判断抗药性水平:< 90%为抗性群体(R);90%~< 98%为可能抗性群体(M);≥98%为敏感群体(S)。结果将致倦库蚊成蚊分别暴露于7.70 g/L敌敌畏、3.30 g/L残杀威、0.25 g/L高效氯氰菊酯和0.20 g/L溴氰菊酯,1 h击倒率范围分别为57.78%(52/90)~91.11%(82/90)、86.67%(78/90)~100.00%(90/90)、23.33%(21/90)~77.78%(70/90)和27.78%(25/90)~88.89%(80/90);恢复24 h死亡率范围分别为61.11%(55/90)~94.44%(85/90)、90.00%(81/90)~97.78%(88/90)、23.33%(21/90)~73.33%(66/90)和21.11%(19/90)~72.22%(65/90)。结论贵阳市致倦库蚊成蚊对4种常用杀虫剂均产生了一定程度的抗药性,其中对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯等拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性较高。
- 梁秋果王政艳杨茜程金芝吴家红
- 关键词：库蚊属除虫菊酯类
