本文以β2-肾上腺素能受体(beta-2 adrenergic receptor,β2-AR)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、血管紧张素Ⅱ-1型受体(angiotensin II type 1 receptor,AT1R)为例,建立可快速预测G蛋白偶联受体(G proteincoupled receptors,GPCRs)N端、C端、胞内环、胞外环、跨膜(transmembrane,TM)区氨基酸起始位置的方法,并通过此方法预测Mas相关基因G蛋白偶联受体X3(Mas-related G protein-coupled receptors X3,MRGPRX3)的结构。具体操作为利用不依赖序列和连接的克隆方法(sequence and ligation-independent cloning,Slic)将纳米荧光素酶(nanoluciferase,NLuc)插入GPCRs的不同位点,在同一受体表达水平相同的条件下,检测NLuc插入GPCRs不同位点对于发光值的影响。结果显示,当NLuc插入GPCRs不同位点时,检测到的NLuc发光值不同。当NLuc插入N端、C端、胞内环、胞外环等柔性区域时,发光值在100万以上;插入TM区域(刚性区域)时,发光值在10万以下,甚至在1万以下;插在柔性区域与刚性区域的交界处时,发光值在10万~50万之间,一般在10万左右。本研究建立了一种可快速确定GPCRs结构的生化方法,并用此方法成功预测MRGPRX3的结构。此方法能够为配体的虚拟筛选提供有效信息,为结构药理学提供一定的实验依据。
从链霉菌S001的重组菌株S001-PoTeM(S023)中分离获得1个结构新颖的含有5/5/6三环体系的多环特特拉姆酸大环内酰胺(PoTeMs)类化合物montamide A (1),通过一维和二维核磁(NMR)、高分辨质谱和圆二色谱确定了其化学结构.采用滤纸片法测定了化合物1的抗细菌和抗真菌活性,结果显示在载样量40μg时化合物1无抗菌活性;采用噻唑蓝(MTT)比色法测定了化合物1的细胞毒活性,结果显示化合物1对人肺癌细胞A549有较弱的细胞毒性(IC(50)~22.6μmol/L),其中C16位为细胞毒活性关键位点.此外,在链霉菌S001基因组中定位了化合物1的生物合成基因簇mtm,推测了其可能的生物合成途径.
