河南科技学院细胞工程重点实验室
- 作品数：14 被引量：15H指数：2
- 相关作者：项志峰更多>>
- 相关机构：河北农业大学动物科技学院中国科学院动物研究所河南农业大学牧医工程学院动物生理生化实验室更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 绵羊Granulysin在大肠杆菌中的表达与鉴定
- 2007年
- 根据GenBank中公布的绵羊Granulysin基因序列设计引物,用PCR法从重组质粒中扩增出含BamHI/XhoI酶切位点的Granulysin片段,双酶切后克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达质粒pGEX-Granulysin,转化宿主菌大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导进行表达,SDS-PAGE鉴定,表达的融合蛋白分子量约为41 kDa,并以包含体形式存在。
- 杨国宇乔新安朱彦彩贾海丽王月影韩立强王艳玲
- 关键词：绵羊原核表达大肠杆菌
- 绵羊鸟苷素基因的克隆与序列分析
- 2008年
- 基于电子延伸序列．本试验克隆并分析了绵羊鸟苷素基因．从绵羊十二指肠黏膜组织中提取总RNA·利用设计的引物进行RT-PCR扩增，PCR产物与pMD19-T载体连接后转化到E．coli JM109感受态细胞，检测阳性克隆并测序．结果表明：克隆的绵羊鸟苷素基因长341bp，编码109个氨基酸．与人、豚鼠、小鼠和牛的同源性分别为77％、75％、47％和94％．推测的氨基酸序列信号肽为l～16aa．整个氨基酸构成一个模域．编码鸟苷素前体蛋白．
- 乔新安王艳玲杨国宇朱彦彩范沛都军霞
- 关键词：绵羊克隆
- 抗堆型艾美耳球虫子孢子单抗对阶段特异性抗原的识别
- 2008年
- 为了用针对堆型艾美耳球虫子孢子的5株单抗检测各代裂殖子的反应性,分别用甲醇、丙酮、戌二醛和自然干燥等4种固定方法处理裂殖子,观察其对染色结果的影响;并运用免疫荧光技术(IFA),对单抗和裂殖子进行染色。结果显示,5株单抗中,单抗Easp-3H6和单抗Easp-5G10识别堆型艾美耳球虫裂殖子的抗原位于裂殖子的顶端,单抗5B4对各阶段裂殖子有较弱的反应,而单抗Easp-3G3和5G7不与堆型艾美耳球虫任何一代的裂殖子发生反应,表明鸡堆型艾美耳球虫的侵入阶段存在共有抗原,即种内各发育阶段的抗原。
- 王承民秦建华郑素玲何宏轩杭柏林魏刚才陈桂香
- 关键词：堆型艾美耳球虫免疫荧光裂殖子单克隆抗体
- 乳汁中RNA提取方法的建立被引量：1
- 2008年
- 用牛初乳作为试验材料,进行乳汁体细胞的提取及RNA的提取与扩增。结果显示:牛初乳中含有大量的体细胞(SCC约为20万/ml,活力约为60%),从体细胞中提取RNA,所提取的RNA完整性和纯度可以用来合成cDNA,管家基因GAPDH扩增条带正确,表明可以用合成的cDNA作为模板进行其它基因的扩增,为奶牛在基因工程方面的研究提供分子生物学技术平台。
- 乔新安朱彦彩范沛都军霞贾海丽韩立强杨国宇
- 关键词：牛初乳RNA提取
- 堆型艾美耳球虫子孢子和鸡十二指肠上皮细胞的共同抗原的研究被引量：2
- 2007年
- 以抗堆型艾美耳球虫子孢子的单抗EASP-3G3作为工具,对鸡各段消化道上皮细胞切片和子孢子进行免疫组化染色,并利用蛋白质印迹技术来检测单抗所识别子孢子可溶性抗原的分子量,来确定子孢子和十二指肠上皮细胞之间是否存在共同抗原.结果表明单抗只与十二指肠上皮细胞发生反应,而与其他肠段无染色反应.而且单抗所识别的可溶性抗原分子量为35～48 ku.抗子孢子的单抗同时与十二指肠上皮细胞和子孢子反应,而不与其他肠段反应,证明堆型艾美耳球虫寄生的位点特异性与十二指肠上皮细胞表面的某种抗原分子有内在的关系.
- 王承民魏刚才秦建华何宏轩刘丽艳齐永华吴艳云
- 抗堆型艾美耳球虫子孢子单链抗体的构建及表达被引量：2
- 2007年
- 应用RT-PCR技术,从稳定分泌抗堆型艾美耳球虫子孢子抗原的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞Easp-3G3中扩增出抗体VH和VL基因,通过在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗堆型艾美耳球虫的单链抗体基因,并将其克隆至表达载体pET28a(+)载体中进行表达,用Ni-NTA的金属亲和层析法进行纯化,通过SDS-PAGE和ELISA测定其纯度和生物学活性.电泳结果分析表明重组蛋白的相对分子量为32kDa,纯度为94%;ELISA反应结果证明该单链抗体保持了单克隆抗体的生物学特性,并能与堆型艾美耳球虫子孢子抗原发生特异性反应.
- 王承民初冬秦建华刘丽艳魏刚才谢红兵齐永华王三虎吴艳云何宏轩
- 关键词：堆型艾美耳球虫子孢子单链抗体基因克隆
- 生物技术在鸡球虫免疫研究中的应用
- 球虫是一种分布广泛且严重危害禽类生长和饲料利用率的肠道寄生性原虫。药物依然是传统的控制策略。由于抗药虫株的不断出现,急需建立新的防控方法以减少经济损失。深入了解宿主与寄生虫之间相互作用的基本生物学特点和宿主的保护性免疫机...
- 王承民何宏轩秦建华齐永华陈桂香杭柏林郑素玲
- 关键词：艾美耳球虫球虫病生物学技术
- 文献传递
- 猪附红细胞体特异性PCR诊断方法的建立与鉴定
- 建立一种检测猪外周血中附红细胞体的特异性PCR诊断方法．方法:从猪血中分离附红细胞体, 提取其基因组DNA,用EcoRl对基因组DNA进行酶切,将酶切片段进行琼脂糖电泳,得到一个1．8 kb的 DNA片段,根据DNA序列...
- 王承民何宏轩秦建华陈桂香赵坤杭柏林姚四新王丽荣
- 关键词：猪附红细胞体纯化PCR
- 文献传递
- 绵羊尿鸟苷素基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2008年
- 克隆并分析了绵羊尿鸟苷素(uroguanylin)基因。根据同源序列克隆原理设计一对克隆引物,对绵羊十二指肠黏膜组织提取的总RNA进行RT-PCR,将PCR产物克隆、测序。绵羊尿鸟苷素基因与人、小鼠和猪的同源性分别为83%,77%和88%,推测的氨基酸构成一个模域。克隆了绵羊尿鸟苷素基因片断,为进一步研究绵羊尿鸟苷素基因的生物学功能提供了理论基础。
- 乔新安王艳玲杨国宇朱彦彩范沛林茂旺
- 关键词：绵羊克隆
- 抗堆型艾美耳球虫子孢子表膜单链抗体基因的构建被引量：1
- 2008年
- 应用RT-PCR技术,从稳定分泌抗堆型艾美耳球虫子孢子表膜抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞Easp-3G3中扩增出抗体VH和VL基因,再通过重叠延伸拼接(Splice overlap extension)PCR方法在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗堆型艾美耳球虫的单链抗体基因,并将其克隆至pMD18-T载体中进行测序。经测序,基因全长为744bp,编码248个氨基酸残基;经计算机分析,VH和VL基因均为新发现的基因序列,符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征。结果表明,成功构建了抗堆型艾美耳球虫子孢子表面蛋白抗体的ScFv基因。
- 王承民魏刚才秦建华项志峰陈桂香杭柏林何宏轩
- 关键词：堆型艾美耳球虫子孢子单链抗体基因克隆
