黑龙江省生物医药工程重点实验室
- 作品数：40 被引量：123H指数：7
- 相关作者：李丹马洪星更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学附属第二医院哈尔滨商业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学经济管理更多>>
- 类风湿性关节炎相关基因PTPN22 C1858T在中国6个民族中的遗传多态性研究被引量：7
- 2007年
- 目的研究与类风湿性关节炎相关的PTPN22 C1858T在中国蒙古族、满族、达斡尔族、哈萨克族、回族和四川汉族6个民族中的遗传多态性。方法应用PCR—RFLP方法检测6个民族共539个个体中P即PTPN22 1858T等位基因频率。结果6个民族中PTPN22 1858T等位基因频率是0．0195（n=539）分布符合Hardy—Weinberg平衡；在蒙古族、满族、达斡尔族、哈萨克族、回族和四川汉族民族中PTPN22 1858T等位基因频率分别是0．0114、0．0143、0、0．0698、0．0216和0，且6个民族间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论获得了中国6个民族PTPN22 1858T等位基因频率数据，为评估中国不同人群对类风湿性关节炎的遗传易感性及流行病学研究提供了基本的数据。
- 张志红张学龙陈峰白静傅松滨
- 关键词：PTPN22类风湿性关节炎基因多态性
- 15-羟廿碳四烯酸对大鼠缺氧性肺动脉环的作用被引量：2
- 2004年
- 目的 研究15-羟廿碳四烯酸(15-HETE)对缺氧(FiO2 10％)大鼠第三级肺动脉环的作用,以探讨15-HETE在大鼠缺氧性肺血管收缩(HPV)中的作用,为肺动脉高压及其并发症的手术麻醉采取相应的治疗措施,以减少低氧血症的发生。方法 16只健康Wistar大鼠随机分为两组(n=8):A组为对照组,吸大气,其吸入氧浓度(FiO2)为21％;B组为缺氧组,即将大鼠置于FiO2为10％的缺氧箱中。9d后将大鼠处死,游离直径为0.5-1.0 mm肺动脉(PA)剪成3mm长的血管环,血管环在37℃的KH液中平衡40min。KH液中15-HETE的浓度逐渐从10-8增至10-6mol·L-1,分别加入不同K+通道阻断剂后,再加入15-HETE。肺动脉环收缩张力信号通过Medlab-U-4CS生物信号采集处理系统的四通道接头传输到计算机相应处理软件上进行数据记录和分析,并根据血管张力的变化绘制浓度反应曲线;分别计算出收缩率。结果 15-HETE以浓度依赖方式(10-8-10-6mol·L-1)使游离肺动脉环张力明显增加(P<0.05),其在B组中作用更为明显。2mmol·L-1 4-AP、2mmol·L-1 4-AP+10-6mol·L-115-HETE使肺动脉环张力显著性增高(P<0.05),二组间比较,差异无显著性(P>0.05);10-2mol·L-1TEA、10-6mol·L-1GLYB,对血管环张力无明显影响(P>0.05);10-2mol·L-1 TEA+10-6mol·L-115-HETE和10-6mol·L-1
- 孟丽巍龚秀萍姚红娟王静朱大岭
- 关键词：肺动脉环肺动脉高压低氧血症缺氧性肺血管收缩麻醉
- 兔抗人细胞色素P450 1A2多克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的：制备兔抗人细胞色素P4501A2（CYP1A2）抗体及其特性鉴定。方法：利用生物信息学方法分析CYP1A2蛋白的序列，根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择多肽序列，合成CYP1A2多肽，与载体蛋白钥孔戚血蓝素（Keyhole limpet hemocyanin，KLH）偶联，免疫日本大耳白兔制备抗CYP1A2抗体。辛酸-硫酸铵法纯化抗体，间接ELISA法测定抗体的效价及相对亲和力常数，Western blot鉴定其特异性，免疫组化进行定位。结果：获得针对小分子CYP1A2的抗体。该抗体效价为1∶16000；相对亲和力常数在10^5-10^6/M，具有实用价值；可与CYP1A2合成肽及天然CYP1A2出现特异性反应；可识别正常人肝脏组织CYP1A2；Western blot的结果显示，该抗体识别的相应抗原的相对分子质量为58000。结论：合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性，可用于制备相应的抗体。制备的兔抗CYP1A2合成肽抗体可应用于酶联免疫吸附试验、免疫印迹、免疫组化实验。
- 刘海英杨微李郁梅郭蕾吴春玲徐东花唐晓波朱大岭
- 关键词：CYP1A2合成肽多克隆抗体
- 肿瘤抑素相关肽T42对人脐静脉内皮细胞和人胃腺癌细胞的抑制作用被引量：4
- 2007年
- 目的:观察大肠杆菌内表达的pTYB2-T42重组质粒经纯化后获得的肿瘤抑素相关肽T42,在体外对人脐静脉内皮细胞及肿瘤细胞的抑制作用。方法:实验于2006-06/11在哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室完成。在大肠杆菌中表达肿瘤抑素相关T42肽并用几丁质亲和层析纯化。采用四甲基偶氮唑盐比色法研究10～200mg/L肿瘤抑素相关肽T42、T19、T21、T19+T21半量联合和顺铂对人脐静脉内皮细胞和人SGC-7901胃腺癌细胞生长的影响,采用苏木精-伊红染色检测40mg/LT42肽作用24h后对细胞形态的影响,划痕修复实验研究40mg/LT42肽和40mg/L的T19肽+T21肽半量联合分别作用24,48h后对细胞迁移的影响。结果:①四甲基偶氮唑盐试验表明10～200mg/LT42肽对人脐静脉内皮细胞和人SGC-7901胃腺癌细胞有明显抑制作用且呈剂量依赖性,IC50分别为45mg/L和51mg/L。②40mg/LT42肽作用24h后可见人脐静脉内皮细胞和人SGC-7901胃癌细胞单个凋亡细胞与周围细胞分离,细胞皱缩呈圆形或卵圆,深染,染色质边集。③40mg/L的T42肽单独作用24h或者48h均可明显抑制人脐静脉内皮细胞、人SGC-7901胃癌细胞的迁移(P<0.05),与40mg/L的T19肽+T21肽半量联合组比较对两种细胞的迁移能力没有显著影响(P>0.05)。结论:T42肽能抑制人脐静脉内皮细胞和人SGC-7901胃腺癌细胞的生长及迁移,其抗肿瘤细胞作用强于T21肽,抑制内皮细胞增殖作用强于T19肽,抑制细胞增殖活性与T19肽+T21肽半量联合用药基本相同。
- 栗亚刘兴汉林雪松马洪星张宇雯李冀宏刘远莉李丹
- 关键词：肿瘤
- MTHFR基因多态性与银屑病的遗传易感性被引量：5
- 2007年
- 目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase），MTHFR基因单核苷酸多态与中国北方地区银屑病的关系。方法针对123例寻常型银屑病患者和129名正常对照个体，分别用PCR—RFLP和AS—PCR的方法，分析C677T、G1793A和A1298C3个多态位点基因型，并进行统计分析。结果在病例组中，MTHFR677C、T等位基因频率分别为45．13％、54．87％，1298A、C等位基因频率为88．37％、11．63％，1793G、A等位基因频率为95．12％、4．88％。在正常对照组中，677C、T等位基因频率分别为44．96％、54．87％，1298A、C等位基因频率为86．44％、13．56％，1793G、A等位基因频率为96．12％、3．88％。经统计学分析，MTHFRC677T、A1298C、G1793A各多态位点基因型、等位基因频率在病例组和对照组中的分布差异无统计学性意义，C677T与A1298C基因型联合分析也未发现有统计学意义。结论MTHFR基因的3个多态位点（C677T、A1298C、G1793A）与寻常型银屑病的易感性无明显的相关关系。
- 吴杰栗玉珍马虹宇白静陈峰傅松滨
- 关键词：寻常型银屑病亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性疾病易感性
- 缺氧肺动脉高压发病机制研究进展:15-LO/15-HETE的作用被引量：13
- 2009年
- 缺氧肺动脉高压(HPH)以急性缺氧肺动脉收缩(HPV)和慢性缺氧导致的肺血管床重构(HPVR)引起的肺动脉压持续升高为特征的临床常见病症。参与HPH的中介因子很多,但没有一种可以完整地阐述其发病机制。本实验室前期工作发现缺氧可使肺血管15-脂酯氧化酶(15-LO)表达升高,后者催化花生四烯酸,生成15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)。研究发现15-LO/15-HETE参与HPV与HPVR的众多过程,提示15-LO/15-HETE可能是HPH发病过程的一个中介因子。对15-LO/15-HETE研究将更好地阐述HPH的发病机制,寻找更有效的临床治疗靶点。
- 郑晓东朱大岭
- 关键词：烯酸
- 15-脂氧化酶-1分子酶学研究进展
- 2006年
- 吕昌莲朱大岭
- 关键词：酶学研究网织细胞花生四烯酸脂氧化酶动物体内细胞型
- 高浓度的staurosporine aglycone激活大鼠肺动脉平滑肌细胞中的ERK1／2被引量：2
- 2009年
- 目的有报道表明staurosporine作为一种蛋白激酶C（PKC）的抑制剂，可以在多种细胞系内调节细胞外信号调节激酶（ERK1／2）的活性，但是它的衍生物staurosporineagly—COfle（SA）是否具有相同的作用还不清楚，本次实验旨在阐明其对ERK1／2活性的调节作用。方法培养至4～8代的大鼠肺动脉平滑肌细胞，经过SA处理后提取细胞蛋白，应用Westernblot方法检测磷酸化ERK1／2的含量，观察不同浓度和时间点的SA对ERK1／2活性的影响。结果在纳摩尔浓度水平的SA可以降低大鼠肺动脉平滑肌细胞中ERK1／2的磷酸化水平，但是30μmol·L-1的SA可以激活ERK1／2，这种激活作用可以被丝裂素活化蛋白激酶的激酶（MEK）的抑制剂PD98059或蛋白激酶A（PKA）的激活剂异丙肾上腺素（isoproteren01）所抑制。结论sA对肺动脉平滑肌细胞中的ERK1／2活性有双向调节作用，这种作用是通过PKC和（或）PKA通路产生的。
- 张家宁褚晓杰吕昌莲吴春铃包红霞唐晓波朱大岭
- 关键词：STAUROSPORINE细胞外信号调节激酶蛋白激酶A
- 白花蛇舌草水提取物对大鼠细胞色素P450 1A2亚型的影响被引量：7
- 2007年
- 目的观察白花蛇舌草水提取物对大鼠细胞色素P450 1A2亚型(CYP 1A2)的影响。方法实验组(高、中、低剂量组)大鼠分别给予白花蛇舌草水提取物5．84g/kg、8．26g／kg、11．68g/kg,对照组给予生理盐水,用蛋白印迹方法测定大鼠CYP 1A2的蛋白表达。通过高效液相色谱(HPLC)法测定全血中咖啡因的代谢率,研究白花蛇舌草水提取物对大鼠肝脏CYP 1A2的影响;用HPLC法测定非那西丁的代谢率,确定白花蛇舌草水提取物对大鼠肝微粒体CYP 1A2活性的影响。结果蛋白印迹分析结果表明,白花蛇舌草水提取物对CYP 1A2蛋白表达没有影响。给予高、中、低剂量白花蛇草水提物的大鼠咖啡因代谢率分别为(33．62±5．08)％、(32．19±4．87)％、(31．05±4．93)％;对照组大鼠咖啡因代谢率为(30．73±5．40)％,实验组间及与对照组比较均无显著性差异(P>0．05)。肝微粒体体外温孵实验中,实验各剂量组和对照组非那西丁代谢率分别为(3．76±0．83)％、(3．61±0．79)％、(3．84±0．86)％、(3．81±0．82)％,实验组间及与对照组比较均无显著性差异(P>0．05)。结论体内、体外实验结果均表明,白花蛇舌草水提取物对大鼠肝脏CYP 1A2没有抑制作用。
- 鲍岩岩刘艳唐晓波刘秉义武正华朱大岭
- 关键词：白花蛇舌草细胞色素P450肝微粒体高效液相色谱
- 小鼠H_2B-GFP真核表达载体的构建与鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的构建小鼠H2B-绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体,为动态观察小鼠细胞中染色体的形态变化,从而进一步研究小鼠耐药细胞中双微体(DMs)的形成机制提供有效的分子工具。方法利用RT-PCR的方法获得小鼠H2B cDNA,以羧基端插入pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO载体上,构建H2B-GFP真核表达载体,经菌液PCR、酶切及DNA测序鉴定插入片段大小、方向及序列的正确性,提取质粒转染小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3进行鉴定。结果经菌液PCR、酶切和测序,证明小鼠H2B-GFP真核表达载体含有大小、方向及序列正确的H2B cDNA片段,转染NIH3T3后在细胞核中表达。结论成功构建了同时携带有G418筛选位点及多酶切位点的小鼠H2B-GFP真核表达载体,为其在小鼠体外培养细胞中的表达奠定了基础。
- 孙文靖马琳琳韩菲菲任聪傅松滨
- 关键词：绿色荧光蛋白真核表达载体小鼠
