石河子大学动物科技学院新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室
- 作品数：25 被引量：69H指数：5
- 相关作者：刘辉许程剑唐利艳王文华更多>>
- 相关机构：铜仁学院生物与农林工程学院更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 牛源耐药性金黄色葡萄球菌的分离鉴定及黏附因子基因FnBP和clfA的表达分析被引量：5
- 2014年
- 为探究致奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的生物学特性,对新疆垦区部分奶牛场乳房炎奶样进行病原学分析,并对病原菌进行耐药性、毒力因子的表达分析。从乳房炎奶样中分离得到S.aureus,采用血浆凝固酶试验、KB法、琼脂筛选法、生化鉴定法(VITEK32)、聚合酶链式反应等法进行鉴定。针对毒力基因clfA(凝集因子A)和FnBP(纤维结合素结合蛋白)进行特异性PCR扩增,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体,并构建原核表达载体pET-28a(+)-FnBP和pET-28a(+)-clfA。转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物。常规鉴定出葡萄球菌105株,其中金黄色葡萄球菌(S.aureus)62株,从62株S.aureus中检出耐药性金黄色葡萄球菌(MRSA)13株,检出率为20.10%,2株未确检。经测序证实与GenBank中FnBP基因(J04151)和clfA基因(AB245457)序列同源性分别为100%和95.69%。SDS-PAGE显示,clfA和FnBP蛋白相对分子质量分别为45ku和58ku。Western blot分析显示,clfA蛋白和FnBP蛋白均可与金黄色葡萄球菌多克隆抗血清发生特异性反应。病畜奶样中MRSA检出率较高,新疆垦区部分牛场呈蔓延趋势,成功表达了clfA、FnBP蛋白,具有一定的免疫保护效果。
- 孙志华刘君张辉刘娟许长萌张华雷陈创夫
- 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌
- 牛病毒性腹泻病毒石河子株的分离与基因型鉴定
- 牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)不同的基因型在抗原性方面存在差异,使疫苗免疫难以收到预期效果。本实验对分离到的BVDV石河子株和其它石河子分离株进行基因型鉴定,通过对...
- 任艳陈创夫乔军杨霞张辉王鹏雁盛金良倪伟
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒基因型
- 文献传递
- 北疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因克隆与遗传演化分析被引量：1
- 2016年
- 【目的】研究2014年新疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)遗传变异情况,监测PRRSV在新疆流行情况,为新疆的PRRSV血清学检测提供帮助。【方法】采用RT-PCR方法对分离自新疆地区的PRRS疑似病料进行ORF7基因扩增和测序,分析PRRSV ORF7基因变异情况。【结果】检测到18株PRRSV毒株具有ORF7碱基突变,均属北美洲型,与国外的参考毒株和国内的参考毒株有着不同的亲缘关系。其中,XJzx4、XJzx12与国外的参考毒株01NP1.2、PA8、VR-2332、LMY亲缘关系较近。除XJzx1、XJzx14外,其余毒株与内地毒株BJsy06、GD、HB-1sh2002、Hu N、JXA1、LN、NX06、SX2009亲缘关系较近,推断由内地毒株演化而来。【结论】新疆本地流行猪繁殖与呼吸综合征毒株是来自国内外不同地区毒株,ORF7基因在新疆具有不同的遗传变异类型。没有检测到新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因有缺失型突变。
- 吴鹏张勋梁田陈新凯肖媛媛盛金良
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCRORF7
- 致绵羊脑炎型肠球菌溶血素CylA基因的克隆及序列测定被引量：11
- 2007年
- 以致绵羊脑炎型肠球菌(Enterococcus)染色体DNA为模板,PCR扩增溶血素CylA的结构基因,将PCR产物克隆于pMD19-T载体,对PCR产物进行测序鉴定。与已发表的肠球菌溶血素CylA基因序列比较,同源性达99.3%。
- 韩素娟剡根强周霞王静梅马贵军
- 关键词：测序
- 绵羊肠球菌部分生物学特性的比较分析研究被引量：2
- 2007年
- 韩素娟剡根强周霞王静梅
- 关键词：肠球菌生物学特性绵羊正常菌群动物肠道尿道感染
- 羊种布鲁菌05/43株侵染绵羊肺泡巨噬细胞cDNA文库的构建被引量：2
- 2008年
- 目的构建羊种布鲁菌05/43株侵染绵羊肺泡巨噬细胞的cDNA文库。方法培养的绵羊肺泡巨噬细胞经羊种布鲁菌05/43株侵染后,以Trizol试剂提取其总RNA,用cDNA文库构建试剂盒构建巨噬细胞的cDNA文库。随机选取cDNA文库中的18个克隆进行表达序列标签(EST)序列测定,测序结果用BlastX和BlastN软件在GenBank蛋白质库和核酸库中进行序列同源性比对。结果构建的cDNA文库的库容量为1.192×106,重组率为95.65%。18个EST测序,12个与CD抗原基因、细胞因子基因、蛋白酶基因等已知功能的基因序列相关,6个为未知功能基因的EST序列。结论成功构建了羊种布鲁菌05/43株侵染绵羊肺泡巨噬细胞的cDNA文库,这将有助于阐明该菌株的致病机制。
- 王远志陈创夫曹旭东盛金良张辉任艳高剑峰王端明
- 关键词：基因文库
- 布鲁氏菌omp25基因真核表达载体的构建与分析被引量：5
- 2010年
- 构建表达流产布鲁氏菌外膜蛋白基因omp25的酿酒酵母表达菌并进行验证。对流产布鲁氏菌疫苗株S19外膜蛋白基因omp25设计特异引物进行PCR扩增,连接到pGM-T载体上,获得pGM-T-omp25,进行PCR扩增、酶切、测序鉴定。将质粒pGM-T-omp25与pGBKT7载体进行EcoRⅠ/SalⅠ双酶切,回收DNA片段,并进行连接,构建pGBKT7-omp25后,转化酿酒酵母菌Y187,并进行PCR鉴定、自激活实验和毒性检测。克隆了流产布鲁氏菌外膜蛋白基因omp25,PCR、酶切、测序表明成功构建了pGBKT7-omp25真核表达载体,获得的转化子酵母Y187菌株无自激活活性,无毒性。成功构建了表达流产布鲁氏菌外膜蛋白基因omp25的酿酒酵母表达菌,为揭示流产布鲁氏菌感染与母畜流产间的分子机制奠定基础。
- 王勇陈创夫张辉郭乾任艳蒋松
- 关键词：流产布鲁氏菌真核表达
- 羊种布鲁氏菌新疆流行株015株sodc基因缺失株的构建与初步评价被引量：6
- 2016年
- 为了构建布鲁氏菌015 sodc基因缺失株,本研究采用PCR方法以热灭活的羊种布鲁氏菌新疆流行株015为模板,分别扩增sodc基因的上下游同源臂序列;以枯草芽孢杆菌为模板,扩增Sac B基因,将扩增序列分别连至克隆载体p MD19-T simple上并测序,然后在双酶切后将上下游同源臂序列连接至自杀载体p GEM-7Zf+上,分别得到了p GEM-7zf-Δsodc,再将Sac B基因单酶切后连接至上述载体上,构建成同源重组自杀质粒pss。经8%蔗糖平板筛选鉴定Sac B基因的活性。将构建好的自杀质粒分别电转化至布鲁氏菌015感受态细胞中,通过氨苄抗性筛选和8%蔗糖敏感筛选后获得了015Δsodc基因缺失株。对获得的基因缺失株进行PCR鉴定和遗传稳定性检测。通过检测侵染小鼠巨噬细胞cfu、缺失株免疫小鼠后体内Ig G,IFN-γ的水平,及脾脏cfu,对其毒力进行了初步评价。结果表明,该缺失株20代内未发生回复性突变,成功构建了具有非抗性基因标记的缺失株,并且015Δsodc细胞cfu、脾脏cfu,及IFN-γ的水平都显著低与亲本株015,说明毒力与亲本株相比有一定程度的下降。本研究可为今后布鲁氏菌致病机理及新疫苗的研究提供实验材料。
- 易德武张俊波王远志李默李爽张欢王杰陈创夫
- 关键词：布鲁氏菌
- 布鲁氏菌M5-90ΔWboA基因缺失株的构建及免疫效果的初步评价被引量：11
- 2011年
- 为获得毒力较弱并能区分自然感染和疫苗免疫的布鲁氏菌候选疫苗株,本研究用PCR方法扩增WboA基因的上下游同源臂序列,构建重组质粒pGEM-7zf-Δ WboA-Sac,电转化布鲁氏菌M5-90感受态细胞,筛选布鲁氏菌疫苗株M5-90的WboA基因缺失株,并对获得的M5-90Δ WboA遗传稳定性、毒力、免疫保护性、抗体水平等指标进行检测。实验结果表明M5-90Δ WboA株的毒力比M5-90株明显减弱,差异极显著(p<0.01),体液免疫和细胞免疫结果表明M5-90Δ WboA株与亲本M5-90株相比差异不显著(p<0.05),M5-90Δ WboA株和亲本株的保护率分别为10%和20%,表明M5-90Δ WboA株与M5-90株具有相似的保护性。凝集试验和western blot试验显示M5-90Δ WboA株免疫小鼠的血清反应结果为阴性。本研究构建的布鲁氏菌基因缺失株M5-90Δ WboA具有较好的遗传稳定性,毒力比亲本株更弱,免疫保护性与亲本株相当,并能以血清学检测方法区分野毒株感染和缺失疫苗株免疫的动物。
- 张艳陈创夫张辉张沾李志强张俊波孟仁王震
- 关键词：布鲁氏菌基因同源重组免疫原性
- 牛种布鲁菌virB4基因酵母表达载体的构建被引量：1
- 2010年
- 根据GenBank中的牛种布鲁菌RB51株virB4基因保守序列设计引物，扩增virB4基因，将其克隆到pMD18-T载体上，鉴定正确后与酵母表达载体pGBKT7进行连接，转化酿酒酵母菌Y187后进行PCR、酶切鉴定，阳性克隆测序分析后转化酿酒酵母菌Y187感受态细胞进行自激活和毒性检测。结果表明：克隆的基因包含了virB4完整编码区的2496bp核苷酸序列，成功地构建了包含pGBKT7-virB4诱饵质粒的酿酒酵母菌Y187表达菌。
- 郭乾陈创夫张辉王勇任艳
