山东农业大学动物医学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室 作品数:18 被引量:31 H指数:4 相关作者: 陈君豪 荆胜涛 李恩扩 陈雪锋 王肖祎 更多>> 相关机构: 山东师范大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金 山东省自然科学基金 山东省科技发展计划项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
1型鸭甲肝病毒LY0801株VP1基因在鸭胚传代中的变异规律研究 被引量:1 2014年 为了解1型鸭甲肝病毒(Duck hepatitis A virus type 1)VP1基因在鸭胚传代中的变异规律,本研究将LY0801株DHAV-1在鸭胚体内传代至30代,分别对1~5、10、15、20、25、30代病毒进行VP1基因的克隆测序。各代次病毒分别以108copies/胚接种9日龄健康鸭胚,测定各组鸭胚的平均死亡时间和病毒在鸭胚尿囊液中的增殖拷贝数。结果表明:DHAV-1在鸭胚传代过程中,不同代次之间出现12个氨基酸的反复变异和同步变异,分别为R43M(K)、T48A、T101S、L169F、T180I、S181L、R183Q、E184A(K)、G187D、D193N、M213R、H219Y;在传代过程中,病毒致死鸭胚的时间逐渐延迟,但病毒在鸭胚内的增殖拷贝数未呈现稳定增长的趋势。 马明杰 郭翠平 焦玉祥 吕佳泓 孙振 张瑞华 陈君豪 谢之景 姜世金关键词:VP1 致弱 2012-2013年山东省禽源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的检测 被引量:9 2014年 为研究近年来山东省禽源致病性大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药(plasmid-mediated quinolone resistance, PMQR)基因的基因型分布,及其对喹诺酮类抗生素的耐药性的影响,分别采用针对qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、oqxA、oqxB与qepA 8个耐药基因的通用引物,对93株2012-2013年分离自山东省的禽源大肠杆菌进行PCR检测,并对其进行了5种喹诺酮类药物的药敏试验。结果表明山东省禽源大肠杆菌对5种喹诺酮类抗生素均产生了较高耐药性(50.54%-86.30%);PMQR基因携带率达到60.21%(56/93),其中26.88%(25/93)的菌株携带2种PMQR基因,1.07%(1/93)的菌株携带3种PMQR基因;qnrA、qnrB、qnrC、qnrD与qepA基因未被检测到,qnrS、oqxA和oqxB基因在山东省禽源致病性大肠杆菌中分布较为广泛,其检出率依次为22.58%(21/93)、40.86%(38/93)和24.73%(23/93)。 孔令超 李志国 张瑞华 焦玉祥 马明杰 郭翠平 朱岩丽 谢之景 姜世金关键词:药敏试验 PCR 鸡源IFN-λ3的克隆表达及抗病毒活性分析 2020年 本研究旨在探究鸡源IFN-λ3的克隆表达及抗病毒活性。试验成功扩增ChIFN-λ3基因并将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)中。然后转化表达菌BL21并IPTG诱导表达,成功表达ChIFN-λ3重组蛋白(约35KD)。通过His柱纯化以及透析复性获得可溶蛋白(0.191mg/ml)。通过体外抗VSV-EGFP病毒复制实验及Image Pro Plus数据分析IOD(sum)/Area(sum),结果显示复性后的重组ChIFN-λ3可以显著减少(约48.45%)VSV-EGFP在DF-1细胞系上的复制。结果表明,复性的原核表达重组ChIFN-λ3具有良好的抗病毒活性,为体外大量制备高效廉价的重组ChIFN-λ3奠定了基础。 宋彦莹 王鹏 戴玉 刘聪 刘雨 王方昆关键词:蛋白纯化 抗病毒活性 鸡干扰素刺激基因12(ISG12)的克隆表达及抗病毒活性分析 被引量:1 2016年 干扰素刺激基因12(interferon-stimulated gene 12,ISG12)在病毒感染过程中已经被监测到,但是针对其抗病毒活性的研究却很少。本研究的主要目的是体外表达鸡的ISG12基因,以禽流感病毒(avian influenza viru,AIV)1215株为病毒模型,利用细胞培养检测其抗病毒活性。利用RT-PCR方法扩增鸡胚成纤维细胞(CEF)的ISG12基因,经测序分析,该基因序列与GenBank中登录的禽属ISG12基因序列相似性为100%。将该基因亚克隆至pET-32a载体构建重组原核表达质粒p32a-C12;工程菌p32a-C12/BL21经IPTG诱导表达,重组蛋白经Ni 2+琼脂糖凝胶柱层析纯化,获得相对分子质量约30 000的目的蛋白。利用ISG12蛋白预处理CEF和鸡外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL)后感染AIV 1215株,或者将该病毒与ISG12蛋白一起接种CEF细胞和PBL细胞,AIV在CEF中的复制能力与对照组无明显差异,而ISG12蛋白预处理鸡PBL细胞和同时感染AIV 1215株时的病毒含量均比对照低。体外抗病毒活性试验表明,ISG12蛋白能够抑制AIV 1215株在PBL细胞中的复制,但在CEF细胞上的作用不明显。 庞运倩 马秀丽 刘爱玲 刘华雷 黄兵 宋敏训 胡敬东关键词:禽流感病毒 病毒复制 人、猪和鸡血清中抗禽戊型肝炎病毒抗体的检测与鉴定 被引量:1 2010年 通过对人、猪和鸡血清中的抗禽戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)ORF2抗体的检测以及对阳性血清抗体特异性的鉴定,本研究结果表明,人、猪和禽血清中抗禽HEVORF2抗体阳性率为0.91%~62.5%。因为禽与哺乳动物HEV ORF2抗原具有共有的抗原表位,而阳性血清中抗禽HEV ORF2特异性抗原表位抗体的阳性率为41.3%~92.1%,提示人、猪和鸡都有感染禽HEV的可能性,这为进一步验证禽HEV可能造成的人兽共感染提供新的科学依据。 荆胜涛 张红霞 孙培明 董施伟 赵钦 张璐 周恩民关键词:戊型肝炎病毒 血清学调查 检测2种基因型鸭圆环病毒双重PCR方法的建立与应用 被引量:7 2015年 为了研究2种基因型鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)在我国鸭群中的混合感染情况,根据鸭圆环Cap蛋白基因序列设计了4条特异性引物,建立了可以同时检测2种基因型DuCV的双重PCR检测方法。结果显示,该方法特异性强,灵敏度高,最低可检测到1拷贝的DuCV核酸。使用建立的双重PCR方法对收集的山东省6个鸭群150只病死雏鸭的组织DNA进行检测,结果显示有50.0%(3/6)的鸭群检出DuCV-1和DuCV-2的混合感染,33.33%(2/6)的鸭群检出DuCV-2的单独感染。19只雏鸭被检出感染DuCV,其中2.67%(4/150)的雏鸭检出DuCV-1和DuCV-2的混合感染,10.0%(15/150)的雏鸭只感染DuCV-1或DuCV-2。结果表明,山东省鸭群中存在较为严重的DuCV-1和DuCV-2混合感染的现象。 李志国 王鑫 张瑞华 陈君豪 夏琳琳 林少莉 谢之景 姜世金关键词:鸭圆环病毒 双重PCR 基因型 鸡白细胞介素18双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用 被引量:1 2014年 应用识别不同表位的鸡白细胞介素18成熟蛋白(Mature chicken interleukin-18,mChIL-18)的2株单克隆抗体(mAb)1G9和2E6,建立检测mChIL-18的双抗体夹心ELISA,并利用此方法对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)人工感染SPF鸡体内mChIL-18的分泌水平进行检测。结果显示,捕获抗体的最佳质量浓度为8mg/L,检测抗体的工作效价为1∶800,待检样品的最佳稀释度为1∶400,检测敏感度可达31.5ng/L,与其他细胞因子等抗原蛋白无交叉反应;跟对照组相比,REV感染鸡体内mChIL-18的表达量在7、14、21、28、35、42、49d均呈现升高,但只有14日龄时表现差异显著(P<0.05)。结果表明,本试验成功建立了ChIL-18的双抗体夹心ELISA,为鸡传染病的细胞免疫学研究提供了可靠方法。 王肖祎 苏倩倩 李恩扩 胡敬东关键词:单克隆抗体 双抗体夹心ELISA 鸭圆环病毒Rep蛋白的核定位信号研究 引言近年来动物圆环病毒受到研究人员越来越多的关注,一是由于越来越多的圆环病毒家族成员在动物中被发现;二是随着对圆环病毒特别是对CAV和PCV2等动物圆环病毒研究的深入,人类越来越认识到圆环病毒在动物体内导致的促进免疫细胞... 王鑫 李志国 张瑞华 陈君豪 夏琳琳 林少莉 谢之景 朱岩丽 姜世金2014年~2016年山东省猪嵴病毒流行病学调查 被引量:5 2018年 为了解猪嵴病毒(PKV)在山东省内的流行情况,本研究根据PKV的3D基因保守区域设计一对引物,对2014年冬~2016年冬来自山东省350份病料样品进行RT-PCR检测和统计分析。结果显示:在350份病料样品中,PKV阳性率为56%(196/350),阳性猪场占80%(24/30);非腹泻猪个体阳性率(65.38%,153/234)明显高于腹泻猪个体阳性率(37.07%,43/116);育肥猪的PKV阳性率(97.50%)远高于哺乳期仔猪(45.40%)、断奶期仔猪(52.75%)以及成年猪(66.67%);夏秋季节采集的样品PKV检出率(71.94%)明显高于冬春季节(45.50%)。统计PKV与PEDV、TGEV混合感染结果显示,虽然PKV在非腹泻猪群中单独感染率(61.11%,143/234)远高于腹泻猪群(18.97%,22/116),但非腹泻猪群PKV与PEDV和TGEV的混合感染率却明显低于腹泻猪群。对5份PKV阳性样品的3D基因测序分析显示,5份阳性样品该基因核苷酸同源性为90.8%~99.7%,与GenBank中的参考株之间的核苷酸同源性为88.8%~94.1%。上述研究结果表明在山东省范围内PKV感染与猪腹泻之间无必然关系,PKV的3D基因进化与病毒株的分离年代和地域无明显相关性。 王玮 刘海源 李鹏飞 宋莎莎 张瑞华 陈君豪 蓝晶晶 谢之景 姜世金关键词:3D基因 RT-PCR 流行病学调查 检测新型鹅细小病毒的半套式PCR方法的建立及应用 被引量:3 2018年 2015年以来山东、江苏等地的樱桃谷肉鸭暴发了一种由新型鹅细小病毒(NGPV)引起的短喙-侏儒综合征(BADS)的疾病,造成了严重的经济损失。为探究该病毒在鸭体内分布规律,本研究根据Gen Bank已登录的NGPV的VP3基因设计了3条引物,建立了检测NGPV的半套式PCR方法。该方法对其它常见鸭病原微生物无特异扩增,特异性好;最低可检出100拷贝/μL的病毒核酸,灵敏度高。采用建立的半套式PCR方法对山东、江苏两地8个樱桃谷肉鸭鸭群120只病死鸭的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊、胰腺、脑和胆汁进行检测,结果显示患病鸭群的群体检出率为100%,个体检出率为80.8%(97/120);10种组织脏器中均检出NGPV,其中心脏检出率最高为93.8%,脑组织检出率最低为9.3%。本研究首次对NGPV在鸭体内10个脏器组织的分布进行统计分析,证明了NGPV对樱桃谷鸭具有广泛的组织嗜性。 高沙沙 李鹏飞 孙大鹏 张瑞华 陈君豪 蓝晶晶 谢之景 姜世金关键词:检出率