中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室
- 作品数：2,535 被引量：6,390H指数：25
- 相关作者：谢庆阁刘军龙骆学农马米玲周继章更多>>
- 相关机构：甘肃农业大学动物医学院华南农业大学兽医学院石河子大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制分子Ts-serpin-2对人THP-1细胞炎性细胞因子的表达影响
- 2023年
- 为了深入研究猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制分子(Ts-serpin-2)对THP-1细胞炎性细胞因子分泌的调节作用,本实验通过RTPCR从猪带绦虫成虫扩增获得Ts-serpin-2(TsM_000807300)的编码序列CDS,利用毕赤酵母表达Ts-serpin-2重组蛋白。利用发色底物特异性反应检测Ts-serpin-2蛋白对猪胰蛋白酶、胰弹性蛋白酶、牛α-糜蛋白酶、猪胃蛋白酶、木瓜酶、凝血酶和组织蛋白酶G的抑制效果。重组蛋白Ts-serpin-2处理THP-1细胞24 h,应用qRT-PCR和ELISA方法检测各炎性细胞因子差异表达水平。结果显示,真核酵母表达的重组蛋白Ts-serpin-2分子量约为48 kDa,具有蛋白酶抑制活性,对牛α-糜蛋白酶、猪胰弹性蛋白酶及猪胰蛋白酶的活性均有明显的抑制作用。重组蛋白Ts-serpin-2可抑制LPS活化的THP-1细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12α、IFN-γ和iNOS2 mRNA的转录水平,促进IL-4刺激的THP-1细胞抗炎性细胞因子IL-10的表达。ELISA结果显示,Ts-serpin-2能够抑制巨噬细胞分泌致炎因子TNF-α、IL-6和IFN-γ,刺激IL-10的分泌,与qRT-PCR检测结果基本一致。上述研究结果表明猪带绦虫Ts-serpin-2可通过调节宿主巨噬细胞分泌的炎性因子影响虫体入侵过程中宿主的免疫应答。
- 毕研丽刘仲藜郭爱疆张少华王帅才学鹏
- 关键词：猪带绦虫真核表达THP-1细胞炎性细胞因子
- 寄生蠕虫胰岛素受体的研究进展
- 胰岛素受体家族是一类重要的受体酪氨酸激酶(RTKs)。作为起始胰岛素信号传导的第一步，胰岛素(insulin)与胰岛素样生长因子-1(IGF-1)作为配体分别结合至胰岛素受体(IR)与胰岛素样生长因子受体(IGF-1R)...
- 杨锐张少华骆学农史云洁才学鹏
- 关键词：胰岛素胰岛素样生长因子蠕虫
- 山羊支原体山羊肺炎亚种单克隆抗体的制备及抗体结合抗原表位的筛选被引量：2
- 2014年
- 本研究旨在制备山羊支原体山羊肺炎亚种(M.capricolumsubsp.capripneumoniae,Mccp)的单克隆抗体并筛选与抗体结合的抗原表位。试验用甲醛灭活的Mccp免疫BALB/c小鼠,运用传统的细胞融合技术进行融合获得杂交瘤细胞,亚克隆,制备单克隆抗体腹水,采用酶联免疫技术(ELISA)和免疫印迹(Western blotting)技术鉴定单克隆抗体的特异性及胶内酶切鉴定与抗体结合的抗原表位。最终成功筛选获得5株单克隆抗体,鉴定到3个与抗体结合的抗原表位,为下一步科学研究提供了初步且可靠的试验基础。
- 郑莹莹骈亚亚储岳峰赵萍贺英简莹娜姜永强逯忠新
- 关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种单克隆抗体
- 猪带绦虫六钩蚴超微结构的观察被引量：3
- 2009年
- 目的观察猪带绦虫六钩蚴的超微结构。方法猪带绦虫病患者驱虫,收集成熟虫卵。次氯酸钠法破卵壳后,等渗细胞分离液(Percoll)收集六钩蚴,人工肠液激活。热琼脂离心法制备电镜样品,透射电镜观察。结果猪带绦虫成熟六钩蚴呈卵圆形,(14～17)μm×(10～13)μm,表面有不规则的突起或皱褶。六钩蚴小钩从外至内由颗粒带、纤维层和芯髓组成。成熟六钩蚴具成肌细胞、小钩生发细胞和皮层细胞等几种细胞类型。结论猪带绦虫六钩蚴的超微结构和缩小膜壳绦虫(Hymenolepis diminuta)六钩蚴的超微结构相似,但小钩的结构不同;猪带绦虫六钩蚴有形成上皮的双核细胞。
- 孙晓林才学鹏景志忠米晓云王佩雅陈怀涛
- 关键词：猪带绦虫六钩蚴超微结构透射电镜
- DNA疫苗安全性的研究进展被引量：9
- 2009年
- DNA疫苗自问世以来就显示出传统疫苗无法比拟的优越性,在传染病、肿瘤等众多疾病的预防和治疗方面具有广阔的应用前景。目前制约DNA疫苗发展的因素主要来自两方面:一方面DNA疫苗在临床实验中有时不能有效激发全面的免疫应答,致使免疫效果不佳;另一方面则是DNA疫苗的安全性问题悬而未决。本文中主要从基因整合、生殖毒性、免疫耐受、自身免疫疾病和对环境的扩散等方面对DNA疫苗安全性进行探讨。
- 侯俊玲郑亚东骆学农才学鹏
- 关键词：DNA疫苗安全性
- 甘肃兰州地区屠宰市场兔球虫病流行病学调查被引量：20
- 2009年
- 兔球虫病是由艾美耳科球虫引起的一种原虫病,对养兔业危害较大。本研究对甘肃省兰州市5个菜市场屠宰兔的球虫感染情况进行了调查,并鉴定出感染球虫的种类,为虫种的分离和球虫病的防治提供了依据。
- 马永华贾万忠闫鸿斌田广孚陈士恩
- 关键词：球虫病流行病学
- 云岭牛毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫分子流行病学调查研究被引量：5
- 2021年
- 为了探究云南省云岭牛毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫的感染情况,从云南省昆明市和楚雄市随机采集云岭牛粪便样品391份。基于毕氏肠微孢子虫核糖体RNA内转录间隔区(ITS)序列和芽囊原虫的SSU rRNA基因序列,应用PCR扩增粪便DNA并对阳性产物进行测序,确定样品毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫的感染情况。结果显示:共有17份样品为毕氏肠微孢子虫阳性,总感染率为4.35%(17/391);序列分析鉴定出2种已知基因型(1份为BEB8,16份为J);统计学分析显示云岭牛毕氏肠微孢子虫的感染率在不同年龄段的差异具有统计学意义(P<0.01);通过对芽囊原虫的检测,108份粪便样品为芽囊原虫阳性,总感染率达27.62%(108/391);经测序和序列比对,共发现4种芽囊原虫的基因亚型,分别为:ST1(n=4)、ST5(n=15)、ST10(n=84)、ST14(n=5),其中ST10为优势基因亚型;统计学分析发现,芽囊原虫的感染率与年龄(P<0.01)和性别(P<0.05)显著相关。本研究是国内外首次对云岭牛毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫感染情况的调查和基因分型的研究,研究结果不仅扩展了毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫的宿主范围,也为预防和控制云岭牛的这两种肠道原虫病提供了基础科学数据。
- 梁霞霞邹扬李涛善陈红曹富琼杨建发邹丰才孙晓林朱兴全
- 关键词：芽囊原虫感染率基因型
- 环形泰勒虫DnaJ蛋白C末端(128aa-458aa)多克隆抗体的制备与反应原性分析被引量：1
- 2021年
- 为获取DnaJ蛋白多克隆抗体,将截短的环形泰勒虫DnaJ蛋白C末端核酸序列构建在pET-30a(+)质粒并转化至Rosetta(DE3)感受态细胞,经终浓度1 mmol/L IPTG 37℃诱导表达,蛋白可溶性分析结果显示,该重组蛋白主要以包涵体的形式存在。SDS-PAGE结果显示,纯化后的蛋白分为2条,其中一条蛋白大小约为41.65 ku,与预期结果相符,另外一条蛋白可能因为翻译提前终止比预期条带位置偏低。将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂混匀乳化后,皮下分点注射BALB/c小鼠,制备小鼠源DnaJ蛋白多克隆抗体。通过Western-blot验证,发现截短后的环形泰勒虫DnaJ蛋白与抗His单克隆抗体、环形泰勒虫阳性血清和抗DnaJ多克隆抗体均能反应,表明该蛋白产物具有良好的反应原性。获得的多克隆抗体可用于研究环形泰勒虫DnaJ蛋白的功能。
- 曹天行李志史康妍石苗刘爱红马全英关贵全李有全殷宏罗建勋罗建勋
- 关键词：环形泰勒虫原核表达多克隆抗体
- 口蹄疫病毒A型SAP突变毒株的构建及其生物学特性的测定
- 2014年
- 为了获得对牛和猪低致病性或无致病性的口蹄疫(FMD)疫苗毒株,提高疫苗毒株的生物安全性,选择口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白酶编码基因SAP区域进行突变。利用反向遗传操作技术,构建FMDV SAP区域突变的A型病毒重组质粒prA-SAP-FMDV。利用脂质体将构建的重组质粒转染BHK21细胞,重组质粒能够致细胞病变(CPE)。连续传代后,经RT-PCR鉴定和间接免疫荧光试验等,SAP突变的重组病毒rA-SAP-FMDV被成功拯救。另外,比较测定了该重组毒与亲本毒rA-WT-FMDV对BHK21细胞和乳鼠的致病性;结果显示,rA-SAP-FMDV的TCID50/mL为10-7.17,LD50为10-6.5/0.2mL,与亲本毒株的生物学特性相似。这一突变SAP域的A型FMDV的获得为研发生物安全性高的A型FMD疫苗奠定了基础。
- 杨洋杨帆杨波郑海学
- 关键词：A型口蹄疫病毒反向遗传操作病毒拯救
- 旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsSerpin)基因的克隆及序列分析
- 2014年
- 为了分析旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsSerpin)的分子特征,提取了旋毛虫标准株ISS534,河南、云南、天津、西安、哈尔滨等6个猪旋毛虫分离株基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,克隆不同虫株TsSerpin基因组的DNA序列。将PCR产物连接到pMD18-T载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对TsSerpin基因序列进行预测分析。结果显示,TsSerpin cDNA序列含有1个由1 122个核苷酸组成的开放阅读框,编码由373个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值为42.5ku,理论等电点为6.54。该蛋白的二级结构中,α螺旋占36.7%,β折叠占25.2%,其余38.1%为无规则卷曲。TsSerpin第14~373位氨基酸序列为Serpin结构域,具有Serpin的保守序列FVADHPFLFFI。线性B淋巴细胞抗原表位分析显示,TsSerpin中含有12个潜在的B细胞抗原表位。TsSerpin基因的开放阅读框对应的基因组序列包含3个外显子和2个内含子。不同旋毛虫分离株TsSerpin序列高度保守,一致性在99%以上。上述研究结果为进一步研究TsSerpin蛋白的生物学功能和研制新型抗旋毛虫疫苗奠定了基础。
- 盖文燕李文卉张念章曲自刚付宝权
- 关键词：旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂克隆
