南阳师范学院生命科学与技术学院中英—南阳洛桑昆虫生物学联合实验室
- 作品数：5 被引量：20H指数：3
- 相关作者：洪冲张详满更多>>
- 相关机构：中国科学院生物物理研究所武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室武汉大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- SSB蛋白与ssDNA相互作用的动力学和可视化研究(英文)被引量：2
- 2007年
- 研究大肠杆菌单链结合蛋白(single-stranded DNA-binding protein,SSB)与单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)的相互作用对于了解其在DNA复制、重组和修复中的作用是非常重要的。通过表面等离子共振技术(surface plasmon resonance,SPR)得到了在有、无镁离子的情况下,SSB与ssDNA两者的平衡解离常数(equilibrium dissociation constant,KD)分别为9.67×10-7M和4.79×10-7M,阐明了镁离子对于两者作用形式的影响。利用原子力显微镜技术分别观察SSB蛋白、ssDNA和SSB-ssDNA复合物的成像,为下一步研究SSB在DNA代谢中作用模式的单分子可视化奠定了基础。
- 乔惠丽陈媛媛文祯中毕利军阚云超
- 关键词：单链DNA相互作用动力学可视化
- 杆状病毒表达系统的改进及IL-6在昆虫细胞内的表达和纯化被引量：7
- 2006年
- 使用同源重组方法,在昆虫细胞内将多角体启动子驱动的EGFP表达盒插入杆状病毒穿梭载体Bacmid的p74位相,经5轮空斑纯化获得重组穿梭载体Bacmid-egfp。然后将Bacmid-egfp转化含转座助手质粒的E.coliDH10B,获得受体菌E.coliDH10Bac-egfp,由于Bacmid-egfp保留了完整的转座结构和α互补功能,因此该菌株和原始E.coliDH10Bac一样能有效的利用各种pFastBac系列的载体进行转座并构建出能指示病毒繁殖和目的基因表达的重组病毒。使用红色荧光蛋白DsRed对系统进行了验证,结果表明重组病毒Bac-egfp-DsRed感染的细胞中绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白均得到了高效表达。进一步使用该系统在昆虫细胞中高效表达并纯化了IL-6蛋白,为研究和应用该细胞因子提供物质基础,同时也进一步证明所改造的杆状病毒表达系统的可靠性和实用性。
- 姚宁姚伦广阚云超周文科齐义鹏
- 关键词：BAC-TO-BAC系统位点特异性重组白介素-6
- 噬菌体展示技术筛选抗轮状病毒多肽的试验研究被引量：5
- 2007年
- 从噬菌体随机展示十五肽文库筛选出4个与轮状病毒粒子特异性结合多肽。经空斑减少抑制实验和MTT法分析表明其中3个多肽对病毒感染培养细胞具有抑制作用,其中序列为QSNPIHIITNTRNHP的C肽具有显著抑制作用,抑制效果达93%,另外2个多肽A和B抑制效果分别为40%与50%。经过多肽序列分析发现这3个十五肽具有2个保守序列,分别是第2至8个氨基酸残基SNPIHII和第12-15个氨基酸残基NIP。胰蛋白酶水解位点分析表明C肽无裂解位点,而A肽和B肽则分别具有3个和4个潜在水解位点。抑制病毒感染液中胰蛋白酶活性,发现A,B两肽也能显著地抑制病毒离体感染。说明所筛选的多肽2个保守序列的完整对抗病毒感染起着重要作用。C肽有望成为一种治疗轮状病毒感染的口服药物。
- 姚宁姚伦广张详满郭泰林阚云超
- 关键词：轮状病毒噬菌体展示
- 昆虫抗药性分子机制被引量：6
- 2007年
- 综述了国内外有关代谢相关酶系(包括细胞色素P450酶系,CYP6A1,CYP6A2,CYP6D,非特异性酯酶,醛氧化酶,谷胱甘肽S-转移酶等)变异产生的抗药性,以及农药靶标蛋白(包括乙酰胆碱酯酶,钠离子通道,γ-氨基丁酸(GA-BA)受体氯离子通道等)变异产生的抗药性方面的最新研究成果,并从分子水平阐明代谢抗性和靶标抗性产生的机制。
- 乔惠丽洪冲文祯中阚云超毕利军
- 关键词：昆虫抗药性
- SSB蛋白的高效表达及其与ssDNA的相互作用(英文)被引量：1
- 2007年
- 大肠杆菌单链结合蛋白SSB在DNA复制、重组和修复中起着重要作用。为研究单链结合蛋白SSB的体外生物功能构建了融合蛋白SSB的表达载体并使其高效表达及易于纯化。ssb基因片段是以E.coliK-12基因组为模板经PCR扩增获得,并通过基因的体外拼接成功构建了表达载体pQE30-ssb。重组菌株M15/pQE30-ssb经过IPTG的诱导表达了蛋白SSB。收集菌体细胞、超声波破碎后离心取上清进行SDS-PAGE分析,结果表明有一与预期分子量(20.6kDa)相应的诱导表达条带出现,其表达量约占全细胞蛋白的30%且以可溶形式存在。利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析柱纯化融合蛋白SSB,其纯度达到90%。通过凝胶层析和等离子共振技术对SSB的生物功能进行了系统研究分析。结果表明,SSB蛋白以四聚体形式与单链DNA分子结合,其亲和力常数(KD)为4.79×10-7mol/L。
- 乔惠丽陈媛媛文祯中毕利军阚云超
- 关键词：相互作用动力学
