内蒙古大学生命科学学院生物工程中心内蒙古自治区牧草与特色作物生物技术重点实验室 作品数:12 被引量:52 H指数:5 相关作者: 吴梅花 李建国 包常华 霍朝霞 李彤彤 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 内蒙古自治区自然科学基金 国家转基因植物研究与产业化专项 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
紫花苜蓿逆境胁迫诱导相关转录因子MsDREB1基因克隆与分析 被引量:4 2008年 利用RT-PCR方法,从紫花苜蓿中扩增得到一个新的转录因子MsDREB1基因cDNA,克隆该cDNA并进行序列分析,结果表明该cDNA包含一个长651 bp的开放阅读框,编码一条含216个氨基酸的多肽,分子量约为24.9 kDa,等电点为6.11。蛋白质Blast数据显示,该多肽属于EREBP/AP2家族DNA结合蛋白的典型成员。进一步克隆了该基因的基因组DNA,序列分析表明该基因无内含子。Southern blot分析表明,该基因在紫花苜蓿基因组中以2拷贝存在。 牛一丁 哈斯阿古拉 张丽 扈廷茂关键词:紫花苜蓿 DREB转录因子 胁迫 拟南芥逆境胁迫诱导表达基因rd29A启动子的克隆与序列分析 被引量:6 2005年 以拟南芥基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到逆境胁迫诱导表达基因rd29A的启动子片段,将其克隆到pUC19质粒中进行序列分析。结果表明,获得的启动子片段大小为937bp,与已报道的该启动子序列比较,其核苷酸序列同源性为99.8%。 吴梅花 张丽 牛一丁 方天祺 哈斯阿古拉关键词:RD29A启动子 表达基因 逆境胁迫 拟南芥 PCR扩增 序列同源性 富含多糖的甜瓜果肉中提取总RNA方法的比较研究 被引量:5 2010年 以甜瓜品种河套蜜瓜果肉为试验材料,比较了异硫氰酸胍法、CTAB法和SDS法3种RNA提取方法,结合KAc沉淀多糖和低浓度乙醇沉淀多糖2种去糖方法。结果表明:异硫氰酸胍法结合KAc沉淀多糖的去糖效果最佳,提取的RNA中28S亮度约为18S的2倍,且OD260/OD280值在1.8以上,RNA产率为64.48μg/g。经RT-PCR获得了乙烯受体基因etr1长达2.3 kb的cDNA特异性条带,说明异硫氰酸胍结合KAc沉淀多糖法从甜瓜果肉中提取的RNA质量好、产率较高、完整性好,适合于甜瓜进一步的分子生物学研究。 郝金凤 哈斯阿古拉关键词:甜瓜 RNA 多糖 河套蜜瓜花粉管通道法转化hALR基因 被引量:1 2009年 为利用河套蜜瓜为生物反应器生产可用于治疗肝病的蛋白因子,以人胎肝mRNA为模板,经RT-PCR扩增获得了471 bp cDNA片段。克隆到pMD18-T载体,命名为pMD-ALR,测序分析结果与GenBank中报道的hALR编码序列完全相同。酶切回收hALR片段,插入到含有甜瓜果实黄瓜素(Cucumisin)基因启动子的果实特异性表达载体pPZP-CGN中,构建了hALR甜瓜果实特异性表达载体pPZP-CAN。花粉管通道法转化试验大田自花授粉花63朵,收获T0代果实27颗,结实率为42.9%。提取T0代种子无菌苗DNA,经PCR、PCR-southern和斑点杂交检测有13株呈阳性。 张立全 哈斯阿古拉 扈廷茂 刘明秋关键词:人肝再生增强因子 果实特异性 花粉管通道法 河套蜜瓜 甜瓜果实特异性表达黄瓜素基因启动子区的克隆和序列分析 被引量:5 2006年 黄瓜素(cucum is in)是甜瓜类枯草杆菌丝氨酸蛋白酶,其表达具有果实特异性.应用PCR方法从甜瓜基因组DNA中扩增出该基因自转录起始位点至上游一段长310 bp片段,并将其克隆到pUC 19载体中,序列分析表明该序列与已报道的相应序列完全相同,且具有TATA-box、CAAT-box、G-box、I-box-like和增强子元件TGTCACA等功能域,具有典型的果实特异性启动子特征.成功获得甜瓜果实特异性表达基因的启动子,为下一步实现外源基因在甜瓜果实中特异表达奠定基础. 哈斯阿古拉 包秋华 牛一丁 方天祺 扈廷茂关键词:甜瓜 果实特异性启动子 花粉管通道法转基因技术在甜瓜品种河套蜜瓜上的应用 被引量:18 2007年 为建立甜瓜(Cucumis melo L.)简便易行转化频率高的转基因技术,以甜瓜品种河套蜜瓜为受体材料,以含gus基因的植物双元表达载体pPZP221为外源基因供体,进行了花粉管通道法转基因研究.自交授粉后分别于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 h,切去柱头上端1/3部分,立即滴加质粒DNA溶液,果实成熟后收获转化种子.对T0代植株进行PCR检测,结果表明不同时间处理所得到的T0代植株均具有较高的转化频率,其中授粉后7 h滴加DNA溶液所获得的转化率为28.3%.对一部分PCR阳性的T0代植株基因组DNA进行Southern杂交分析,结果表明所有样品均出现特异性杂交条带,证明外源基因已整合到受体植物基因组中. 哈斯阿古拉 牛一丁 张丽 包常华 李建国 方天祺 扈廷茂关键词:甜瓜 花粉管通道法 转基因 河套蜜瓜 反向PCR分离侧翼序列技术研究进展 2010年 反向PCR(inverse PCR,IPCR)是第一个依赖于PCR反应扩增旁侧序列的实验技术。IPCR可以在一个反应过程中,同时扩增已知序列两端的旁侧序列,省时简便,结合LR-PCR,RACE,SMART等技术,应用范围日益广泛;但IPCR也存在一些缺点,酶切、自连过程受到很多不确定因素的影响。现总结20 a来利用该技术克隆旁侧序列的研究成果,并提出优化的反应体系,以期对此项技术有更加系统的认识。 王静关键词:旁侧序列 无选择标记转基因植物的研究进展 被引量:2 2006年 为了避免选择标记基因的使用对环境及植物体的生长发育带来的不利影响,消除人们对转基因植物中选择标记基因的安全性顾虑,培育无选择标记的转基因植物目前已成为植物基因工程研究的热点。现主要综述几种剔除选择标记基因方法在转基因植物中的研究进展。 郝金凤 哈斯阿古拉关键词:选择标记基因 转基因植物 甜瓜品种河套蜜瓜ACC氧化酶基因1(ACO1)全长cDNA的克隆及序列分析 被引量:1 2010年 根据GenBank上登录的甜瓜ACC氧化酶基因1(Cm-ACO1)序列,设计特异性引物,应用RT-PCR从甜瓜品种河套蜜瓜成熟果实中克隆得到了ACO1的全长cDNA,共1035bp,并对其进行了序列分析,结果表明,所克隆的cD-NA与已报道的甜瓜品种Cantaloup charentais的ACO1cDNA序列完全一致。该基因的克隆为进一步研究ACC氧化酶基因在甜瓜中的表达特性以及功能奠定了基础。 郝金凤 高峰 博彦泰 李凤 哈斯阿古拉关键词:甜瓜 CDNA 甜瓜HMGR基因全长cDNA的克隆及序列分析 被引量:3 2010年 根据已报道的reticulatus甜瓜的HMGR cDNA序列设计合成引物,应用RT-PCR技术从甜瓜品种河套蜜瓜幼果总RNA中克隆得到HMGR的全长cDNA序列,共1 939 bp,编码588个氨基酸。序列比对及系统发育分析表明,该HMGR cD-NA序列与已报道的reticulatus甜瓜HMGR基因cDNA序列完全一致,和拟南芥HMG1亲缘关系最近。该基因的克隆为研究该基因在甜瓜中的表达特性及其功能奠定基础。 郝金凤 李彤彤 郭艳琼 高峰 哈斯阿古拉关键词:甜瓜 CDNA RT-PCR