军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室
- 作品数：239 被引量：518H指数：10
- 相关作者：张守峰祝令伟刘全郭学军金洪涛更多>>
- 相关机构：吉林农业大学动物科学技术学院吉林大学畜牧兽医学院吉林大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 委内瑞拉马脑炎病毒一步法荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：5
- 2015年
- 委内瑞拉马脑炎(Venezuelan equine encephalitis,VEE)是由委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)复合物引起的一种人兽共患病。我国目前尚无该病,因此建立一种快速准确的检测方法对预防和控制该病至关重要。本研究通过分析委内瑞拉马脑炎病毒nsp1基因序列的保守性,设计了一对能检测VEEV复合物所有亚型毒株的特异性引物和Taqman探针。通过反应体系和反应条件优化,建立了检测委内瑞拉马脑炎病毒复合物的一步法实时荧光定量RT-PCR方法。该方法检测VEEV经体外转录获得的RNA,检测的灵敏度达3.27×102拷贝/μL。以该方法检测与VEEV同属的东方马脑炎病毒(EEEV)和西方马脑炎病毒(WEEV)nsp1基因相同区段的RNA以及同属的基孔肯雅病毒(CHIKV),结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。该方法将为可能在我国出现的委内瑞拉马脑炎的侦检提供有效技术手段。
- 千莎莎何彪涂忠忠郭焕成涂长春
- 关键词：委内瑞拉马脑炎病毒
- 狂犬病病毒M蛋白在杆状病毒中的表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2016年
- 为表达狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)基质蛋白(M)蛋白,进而制备多克隆抗体。本研究以狂犬病病毒BD06株RNA为模版,通过RT-PCR扩增M蛋白基因全序列,将其插入质粒pFastbac I中,获取的重组质粒pFastbac I-M,经酶切鉴定后,转化到DH10Bac E.coli感受态中,以获取重组穿梭质粒Bacmid-M。用lipofectamine2000介导Bacmid-M转染Sf9细胞获取重组杆状病毒AcMNPV-M。用抗His标签的单体、犬抗RV阳性血清及兔抗RV阳性血清通过Western-Blot鉴定重组蛋白的表达及其反应原性。用镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,用Western-Blot和FAVN试验鉴定多克隆抗体的反应原性及其病毒中和效价。结果表明:(1)利用杆状病毒表达系统成功的表达了大小约为25kD的重组M蛋白;(2)重组M蛋白具有良好的免疫原性和反应原性;(3)制备的多克隆抗体与狂犬病病毒BD06、SRV 9、CVS-24、ERA、PV 2061及aG株的M蛋白均能发生特异性反应,但其无病毒中和能力。本研究完成了重组M蛋白的表达、纯化并制备了其多克隆抗体,为进一步研究M蛋白的生物学功能奠定了物质基础。
- 郑光来卢晓冉张静远陈腾王东方严妍张守峰扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒基质蛋白杆状病毒纯化多克隆抗体
- 肠出血性大肠埃希菌O157免疫磁珠的制备被引量：4
- 2017年
- 目的制备可高效、特异性富集肠出血性E.coli O157(enterohemorrhagic Escherichia coli O157,EHEC O157)的免疫磁珠。方法分别用5种不同规格磁珠与E.coli O157特异性单克隆抗体偶联制备免疫磁珠,通过比较磁珠蛋白偶联量,选取包被效果最佳的磁珠规格;对制备工艺进行优化(包括活化时间、温度,偶联缓冲液p H值,偶联温度、时间);对制备的O157免疫磁珠选择性集菌的敏感性和特异性进行评价,并与进口磁珠吸附率进行比较。结果直径0.5~1.0μm羧基磁珠抗体包被效果及目的菌分离效果最好。加入NHS后,活化30 min为最佳时间;4℃磁珠活化温度、0.01 mol/L PBS(p H 7.4)构成的体系对磁珠偶联单克隆抗体效果最佳;偶联温度为37℃、偶联时间为120 min时,偶联蛋白量最高,且波动范围较小,为最佳偶联温度及时间。在复杂的微生物环境中,O157免疫磁珠的敏感性达到20 CFU/ml。在混合菌液中,E.coli O157菌含量在1.4×10~3 CFU/ml时,免疫磁珠特异性捕获率达到90%。结论获得羧基磁珠与E.coli O157单克隆抗体偶联的最佳条件。制备的免疫磁珠能够特异性富集EHEC O157,具有操作简便,分离速度快,捕获率高等特点,可用于临床样品或食品中EHEC O157的分离鉴定。
- 梁冰张雅洁纪雪祝令伟郭学军刘彦晶刘军周伟李丽红冯书章孙洋
- 关键词：单克隆抗体免疫磁珠
- 寨卡病毒研究进展被引量：3
- 2017年
- 寨卡病毒病是由寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)感染引起的一种新病毒病。寨卡病毒为黄病毒的一种,由伊蚊属蚊子传播,对成人不会造成生命危险,但其与罕见的格林巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)及新生儿小头症有关,因此,与全世界的公共卫生健康息息相关。起初该病仅在非洲地区流行,1980年传入东南亚,2007年传入密克罗尼西亚,于2014年传入美国并呈现出扩大蔓延趋势,引起世界卫生组织高度重视。2016年,在我国确诊了ZIKV输入性感染病例。本文就ZIKV的分子生物学特征、传播途径、流行病学、临床症状、诊断、预防等方面作一综述,为其相关研究提供参考。
- 闫飞虎黄培李恩涛赵永坤杨松涛
- 关键词：格林巴利综合征疫苗
- 表面等离子共振检测蓖麻毒素被引量：3
- 2011年
- 采用氨基偶联的方法,分别将RT抗体分子和RT分子交联固定于葡聚糖表面,进行直接和间接检测溶液中RT的含量,建立了SPR检测蓖麻毒素方法。在0～2 000μg/L范围内,线性相关系数R2=0.988 7,最低检测浓度为0.05μg/L,检测时间为18min。结果显示,RT与其单抗具有良好的特异性和敏感性,能够满足RT快速检测的需求。
- 刘文森李吉平许娜邢丽杰刘林娜万家余纪秋野高宏伟
- 关键词：蓖麻毒素表面等离子共振生物传感器
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白在毕赤酵母中的分泌表达
- 2016年
- 目的在毕赤酵母中分泌表达猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus 2,PCV2)Cap蛋白。方法将PCV2-Cap蛋白基因(Gen Bank登录号:KC620508.1)按毕赤酵母偏好密码子优化后,插入毕赤酵母分泌型表达载体p PICZαA中,重组质粒p PICZαA-Cap经SacⅠ线性化,通过电击转化整合至毕赤酵母GS115菌株的基因组中,构建p PICZαA-CapGS115重组酵母菌。经甲醇诱导表达重组Cap蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA法进行鉴定。结果重组表达质粒p PICZαA-Cap经双酶切和测序证明构建正确;重组酵母菌p PICZαA-Cap-GS115经菌落PCR鉴定,可扩增出1 001 bp的目的基因片段;表达的重组Cap蛋白相对分子质量约49 000,可与猪圆环2型阳性血清和小鼠抗His单克隆抗体发生特异性反应。结论成功利用毕赤酵母表达系统分泌表达了PCV2 Cap蛋白,表达的重组蛋白具有良好的抗原性,为PCV2亚单位疫苗和ELISA诊断试剂盒的研制奠定了基础。
- 郑光来卢晓冉张静远陈腾王东方严妍张守峰扈荣良
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白毕赤酵母分泌表达
- 猪链球菌2型分选酶srtC5基因敲除突变菌株的构建及其特性分析
- 猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2)强毒株ZY458分选酶srtC5基因敲除突变体并分析其特性。首先通过重叠延伸PCR技术扩增△srtC5片段，该片段携带srtC5编码基因及其上下游...
- 祝令伟田园贝为成齐翀刘军孙洋周博郭学军冯书章
- 文献传递
- 狂犬病病毒磷蛋白单抗的制备与应用
- 2014年
- 以灭活的狂犬病病毒CVS株细胞毒免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA法和Western-blot筛选获得针对磷蛋白的单克隆抗体4株:1C9、4B10、2G12、4G5,其中1C9针对氨基端保守表位。以亲和层析法纯化1C9单抗腹水,异硫氰酸荧光黄标记制备荧光抗体。以1C9磷蛋白荧光抗体与本实验室研制的狂犬病核蛋白免疫荧光抗原检测试剂盒,对本实验室收集的501份疑似狂犬病鼬獾、蝙蝠、犬和黄鼬的脑组织样品进行直接免疫荧光平行检测。结果显示,两种检测手段对基因1型狂犬病毒的检出结果完全一致,而蝙蝠源Irkut病毒仅能以磷蛋白单抗1C9检出。本研究成功获得了与我国现有不同基因型狂犬病毒良好反应的抗狂犬病磷蛋白单抗,并应用于狂犬病的直接免疫荧光检测,为狂犬病诊断提供了敏感性和可靠性良好的诊断试剂。
- 米立娟张守峰刘晔王述超扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒荧光抗体
- 新城疫病毒F和HN基因的表达及对BHK-21细胞膜的融合作用
- 刘振江鲁会军李国江刘昊靖杰刘燕瑜岳云强郭欢欢凡敏秦艳青金宁一
- 关键词：猪源新城疫病毒
- 鼠源Bif-1蛋白7种选择性剪接异构体真核表达质粒的构建及鉴定被引量：1
- 2017年
- 目的构建鼠源Bif-1(Bax-interacting factor-1)蛋白7种选择性剪接异构体(alternatively spliced isoforms)真核表达质粒,并在BHK和N2a细胞中表达。方法以提取的N2a细胞总RNA为模板,采用RT-PCR、重叠延伸PCR等方法扩增目的基因Bif-1(transcript variant 1、transcript variant 2、transcript variant 3、transcript variant x1、transcript variant x2、transcript variant x3、e),并将目的基因连入真核表达载体p IRES2-EGFP,构建重组质粒。重组质粒经鉴定正确后经脂质体介导转染BHK和N2a细胞,采用荧光显微镜观察及Western blot法检测转染细胞中Bif-1蛋白的表达。结果琼脂糖凝胶电泳可见与预期大小相符的核酸条带;重组质粒经PCR、双酶切、测序鉴定证明构建正确;重组质粒转染BHK或N2a细胞后荧光显微镜下可见绿色荧光;Westen blot可检出相应大小的目的条带。结论成功构建了鼠源Bif-1蛋白7种选择性剪接异构体真核表达质粒,并在BHK和N2a细胞中获得表达。为进一步探索Bif-1蛋白不同选择性剪接异构体的生物学功能,研究其在细胞自噬、细胞凋亡以及抗肿瘤等方面的作用奠定了基础。
- 侯朋飞金宏丽金宏丽曹增国李岭曹增国吴芳芳闫飞虎李国华赵永坤高玉伟王化磊
- 关键词：真核细胞基因表达
