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排序方式：

采用消减杂交初步筛选先兆子痫病理相关基因: 2003年; 目的　应用抑制性消减杂交、PCR技术 ,克隆出与先兆子痫有关的高表达基因和 (或 )新基因。方法　分别从正常妊娠分娩胎盘和先兆子痫患者分娩胎盘中提取mRNA ,采用抑制性消减杂交、PCR技术 ,构建先兆子痫胎盘cDNA文库 ,采用反向杂交验证 ,测序分析 ;以初步筛选的差异表达基因为探针 ,与先兆子痫和正常胎盘总体mRNA斑点杂交。结果　构建成功具有高消减效率的与先兆子痫相关cDNA消减文库 ,文库扩增后得到 60个阳性克隆 ,经杂交验证 ,有 3 4个阳性克隆有插入片断 ,随机挑取一阳性克隆菌落 ,测序分析发现该差异表达基因为核蛋白多糖基因 ,以该差异表达基因为探针 ,与先兆子痫和正常胎盘总体mRNA斑点杂交 ,观察其在总体胎盘中的表达。结论　人类先兆子痫胎盘基因表达同正常胎盘相比 ,核蛋白多糖呈差异表达基因。; 张克荣邢福祺陈士岭庞战军李冰孔令红李红; 关键词：消减杂交先兆子痫

伊贝沙坦对AngⅡ所致心肌肥大和细胞肌球蛋白重链基因表达改变的影响: 目的观察伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所致心肌细胞中蛋白质合成速率及肌球蛋白重链(MHC)基因表达改变的影响。方法以AngⅡ及伊贝沙坦分别或同时作用于培养的细胞。采用放射性同位素[H]-leu掺入法检测培养心肌细胞蛋...; 陈爱兰何兆初陈敏生刘启才董颀; 关键词：伊贝沙坦心肌肥大; 文献传递

葡萄胎发病相关新基因的克隆被引量：16: 2006年; 目的筛选和克隆与葡萄胎发病相关的新基因。方法采用抑制性消减杂交方法,建立葡萄胎组织与正常早孕绒毛组织间的差示cDNA文库,从中筛选出新基因序列,并克隆其全长。结果从差示cDNA文库中共筛选出28个克隆,测序结果提示含10种基因序列,其中3个基因片段被确认为功能未明的新基因,并获得其中一条基因的全长序列(按克隆序列号命名为F10)。结论F10等新基因可能与葡萄胎的病理发生发展密切相关。; 李贵堂庞战军周瑾邢福祺李冰陈士岭付欣; 关键词：葡萄胎基因克隆消减杂交

人类抗凋亡基因bcl-xL的克隆及其在大鼠心肌细胞内的高效表达被引量：1: 2005年; 【目的】克隆人类抗凋亡基因 bcl-xL cDNA,构建两种不同的真核表达载体,评价大鼠心肌细胞表达外源性bcl-xL 的效果,并比较不同转染方法对 bcl-xL 表达的影响。【方法]】RT-PCR 法从人肝脏组织获取 bcl-xL cDNA,连接至pTargeT^(TM)载体,并亚克隆至真核表达载体 pEGFP-C1上;细菌内同源重组构建重组腺病毒质粒,腺病毒纯化试剂盒获取高滴度的重组腺病毒;脂质体和腺病毒介导分别转染体外培养的大鼠心肌细胞,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR 和免疫细胞化学染色法检测 bcl-xL mRNA 和 bcl-xL 蛋白的表达。【结果】获取的 bcl-xL cDNA 测序正确,成功克隆真核表达质粒 pEGFP-bcl-xL;病毒颗粒滴度高达5.3×10^(12)pfu/L;脂质体和腺病毒转染心肌细胞效率分别为40.3%和95.4%,转染后bcl-xL mRNA 和 bel-xL 蛋白的表达均增加,但两种方法之间差异有统计学意义(P<0.01)。【结论】成功获取人类 bcl-xL基因并制备真核表达质粒和重组腺病毒,心肌细胞能高效表达外源性 bcl-xL,并以腺病毒介导更为理想。为 bcl-xL 基因治疗缺血性心脏病提供实验基础。; 廖洪映张惠忠陈波华平殷香保蒙荣森刘启才熊利华; 关键词：克隆基因疗法

伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ所致心肌细胞蛋白质合成和肌球蛋白重链表达的影响被引量：5: 2006年; 目的观察伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所致心肌细胞中蛋白质合成速率及肌球蛋白重链(MHC)基因表达改变的影响。方法以AngⅡ及伊贝沙坦分别或同时作用于培养的细胞。采用放射性同位素[3H]-leu掺入法检测培养心肌细胞蛋白质合成速率。应用荧光定量PCR方法检测心肌细胞心房利钠肽因子(ANF)以及α-MHC、β-MHC的表达。结果AngⅡ处理使心肌细胞中[3H]-Leu掺入增加(P<0.05),同时ANF mRNA的表达明显高于正常(P<0.05);α-MHC mRNA的表达显著低于正常(P<0.05),而β-MHC mRNA的表达显著高于正常(P<0.05),α-MHC/β-MHC的比值下降(P<0.05)。当伊贝沙坦与AngⅡ共同作用于培养的心肌细胞时,与AngⅡ组比较,[3H]-Leu的掺入明显下降(P<0.05),与正常组比无统计学意义(P>0.05);同时ANF的表达下降,与正常组比无统计学意义(P>0.05);心肌细胞中α-MHC的表达明显增高(P<0.05),而β-MHC mRNA的表达显著降低(P<0.05),α-MHC/β-MHC的比值上升(P<0.05)。结论伊贝沙坦能抑制AngⅡ所致的心肌细胞肥大和细胞中α-MHC向β-MHC表达的转换。; 陈爱兰陈敏生何兆初刘启才董颀; 关键词：伊贝沙坦心肌肥大肌球蛋白重链

血管抑制素基因真核表达载体的构建及转染研究被引量：1: 2001年; 目的：构建血管抑制素(angiostatin,AG)基因真核细胞表达载体并进行转染研究。方法：根据已发表的血管抑制素基因的核苷酸序列，设计并合成一对引物，以鼠的纤溶酶原核酸为模板进行PCR扩增，将其基因克隆到真核表达载体pRC／CMV中，进行序列分析和酶切鉴定后，运用脂质体将重组质粒pRC／CMV-AG转入胰腺癌SW1990细胞中，观察其表达情况,以及其对血管内皮细胞生长的作用。结果：PCR扩增出一长1.4 kb的片断，酶切和序列分析证明含完整的AG基因序列，与已知的血管抑制素基因的同源性很高（>96％）。Western blot证实重组体pRC／CMV-AG有较高的表达，对血管内皮细胞的生长有一定的抑制作用。结论：重组体pRC／CMV-AG是一种高效真核表达载体；克隆的AG基因能抑制血管内皮细胞的生长。; 聂胜利袁世珍李冰刘启才; 关键词：血管抑制素基因治疗胰腺癌

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广州医学院基础医学院分子医学研究中心