军事医学科学院生物工程研究所
- 作品数：3,887 被引量：9,751H指数：33
- 相关作者：黄培堂马清钧黄翠芬叶棋浓杨晓更多>>
- 相关机构：安徽大学生命科学学院吉林大学生命科学学院沈阳药科大学生命科学与生物制药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>
- 抗结肠癌相关抗原单链抗体基因的构建和表达被引量：7
- 2000年
- 通过PCR扩增和酶切分别得到抗结肠癌相关抗原抗体的重链可变区序列、轻链可变区序列及连接肽序列,将它们构建成为VHlinkerVL形式的单链抗体基因片段,并在大肠杆菌中进行了表达。SDSPAGE分析结果表明,以pComb3为载体,在大肠肝菌JM83中,scFv未获得有效表达,而以pET22b(+)为载体的scFv在大肠杆菌BL21(DE3)中,30℃诱导培养获得了高效表达,表达水平占全菌蛋白的355%。
- 宋林霞俞炜源
- 关键词：结肠癌单链抗体造影诊断
- U2AF65蛋白表达水平影响基因UBQLN1的可变剪接被引量：1
- 2010年
- 目的:研究U2AF65蛋白的表达水平对基因UBQLN1可变剪接的影响。方法:应用pSR-GFP/Neo载体构建2个U2AF65-siRNA干扰载体,转染293T细胞,通过Western印迹、QRT-PCR检测干扰效果,RT-PCR验证基因UBQLN1的可变剪接。结果:利用设计的U2AF65-siRNA能够干扰细胞中U2AF65的表达;RT-PCR结果显示U2AF65表达水平的下降促使UBQLN1第8外显子的跳跃增加。结论:U2AF65可以通过表达水平的变化参与调控基因UBQLN1的可变剪接。
- 瞿秀华刘萱李晓明李平马清钧曹诚
- 关键词：RNA干扰可变剪接
- 电击缓冲液对哺乳动物细胞电穿孔效率的影响被引量：16
- 1999年
- 目的：提高哺乳动物细胞转染率，使非贴壁细胞和难转染细胞得到转染。方法：比较了在８种不同电击缓冲液条件下３种细胞的电穿孔效率。电击缓冲液包括细胞培养基如ＲＰＭＩ１６４０、ＤＭＥＭ、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、磷酸缓冲液Ｋ－ＰＢＳ、ＨＢＳ、ＨｅＢｓ、ＰＢＳ及ｃｙｔｏｍｉｘ，３种细胞分别是贴壁生长的Ｖｅｒｏ细胞、半贴壁生长的Ｓｐ２／０细胞及悬浮生长的Ｎａｍａｌｗａ细胞。通过Ｘ－Ｇａｌ染色确定细胞转染率，通过锥虫蓝染色确定细胞存活率。结果：所有细胞特别是那些难以在其他缓冲液中获得转染的细胞如Ｓｐ２／０和Ｎａｍａｌｗａ细胞在ｃｙｔｏｍｉｘ电击缓冲液中都获得了较高转染率；ｃｙｔｏｍｉｘ缓冲液更利于电击后细胞的存活。结论：ｃｙｔｏｍｉｘ电击缓冲液为转染非贴壁细胞和难转染细胞提供了一种较好的解决办法。
- 钱锋肖成组
- 关键词：电穿孔缓冲剂细胞培养
- 制备埃博拉病毒糖蛋白与基质蛋白融合突变体的方法
- 本发明公开了一种用酵母菌制备埃博拉病毒糖蛋白与基质蛋白融合突变体的方法。本发明提供的方法包括以下步骤：1)将编码埃博拉病毒糖蛋白与基质蛋白融合突变体的基因导入受体酵母细胞中，得到表达所述基因的重组酵母细胞；2)对所述重组...
- 吴军吴慕胜刘波
- 口服0139霍乱型rBs-WC疫苗临床研究
- 0139霍乱在我国呈散发、点状暴发状态，时重时轻，严重影响人民生命健康及生产秩序，每年应给苗人群预计在千万人之众，社会效益显著，经济效益亦很可观。所研胶囊苗只溶于肠，不溶于胃，可保证疫苗成功安全到达人小肠，有效刺激机体产...
- 关键词：
- 肝癌特异性鼠源及人源化单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中的表达被引量：21
- 2000年
- 为探讨一株肝细胞癌特异性鼠源及其人源化单链抗体基因在大肠杆菌中的可溶性表达策略并比较二者对抗原的结合能力,在三种载体中分别以融合、分泌及胞内表达的方式进行了研究,表达产物均以包涵体形式存在;对复性后的单链抗体以细胞ELISA及竞争抑制流式细胞仪法进行检测,表明人源化单链抗体和鼠源单链抗体有相近的抗原结合能力。结论是:在大肠杆菌中表达的基因工程单链抗体的可溶性可能主要由自身氨基酸一级序列决定;先前的设计所采取的人源化方案没有影响到鼠源抗体的CDR的天然构象。
- 袁清安俞炜源黄翠芬
- 关键词：单链抗体肝癌大肠杆菌可溶性表达
- 用微量细胞病变抑制法观察三种天然人干扰素的协同抗病毒作用被引量：2
- 1994年
- 用微量细胞病变抑制法观察天然α，β，γ干扰素（ｎｈｕＩＦＮ－α，β，γ）在体外诱导ＨＥｐ－２细胞的抗病毒协同作用。ｎＨｕＩＦＮ－γ和ｎＨｕＩＦＮ－α或ｎＨｕＩＦＮ－β共同作用于ＨＥｐ－２细胞表现为抗病毒协同增强效应；ｎＨｕＩＦＮ－α和ｎＨｕＩＦＮ－β共同作用于ＨＥｐ－２细胞只表现为抗病毒协同相加效应。实验结果表明：ｎＨｕＩＦＮ－γ和ｎＨｕＩＦＮ－α或ｎＨｕＩＦＮ－β的抗病毒协同增强作用，与不同干扰素（ＩＦＮ）处理ＨＥｐ－２的顺序及ＩＦＮ的浓度比例有关；ｎＨｕＩＦＮ－γ与ｎＨｕＩＦＮ－α的抗病毒协同增强作用是细胞接受ＩＦＮ作用后早期即发生的现象。
- 陈昭烈吴本传郭智霞肖成祖
- 关键词：干扰素
- 与人PC-1同源的鼠PC-1基因的启动子的分子克隆和特性分析(英文)被引量：1
- 2006年
- 为了鉴定鼠mPC-1基因表达的调控元件,克隆并分析了该基因的启动子.构建了一系列mPC-1基因启动子的截短序列.通过荧光素酶报道基因,分析了它们在前列腺癌细胞和其它细胞中的表达.结果表明,在AR阳性细胞系中,mPC-1基因启动子活性远远高于SV40和p61-PSA启动子,mPC-1基因启动子599bp至449bp可能含有一个负调控元件;mPC-11.1kb启动子控制的表达主要在前列腺癌细胞系中;雄激素可调控mPC-11.1kb启动子表达.mPC-11.1kb序列是一个有前列腺癌细胞特异性和较强的启动子,经过进一步的修饰有可能作为一种有用的前列腺癌基因治疗元件.
- 梁瑞霞涂智杰王健张惠姜飞庞博郑斌李素萍施庆国黄翠芬周建光
- 关键词：启动子LNCAP细胞
- 大肠杆菌O157:H7 sRNA基因E40缺失突变株的构建
- 2010年
- 目的:利用Red系统构建肠出血性大肠杆菌O157:H7的sRNA基因E40缺失突变株。方法:选取本实验室预测并经过实验验证的sRNA基因,根据NCBI上相应的序列,设计2对引物分别扩增该sRNA基因的上下游分别长464和455bp的同源臂,经PCR扩增,构建到相应的载体,最后以构建好的含上下游同源臂和卡那霉素抗性基因的长约2500bp的线性片段作为打靶片段,在Red重组系统的作用下与sRNA基因E40的上下游同源区域发生同组,从而把sRNA基因从基因组上置换下来,之后利用质粒pCP20将FRT位点间的卡那霉素抗性基因消除。结果与结论:构建了出血性大肠杆菌O157:H7的sRNA基因E40的缺失突变株,为进一步研究sRNA基因在出血性大肠杆菌O157:H7生长及致病过程中所起的功能奠定了良好的基础。
- 王刚王刚宋兰马延周围张德礼岳俊杰
- 关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7SRNARED重组系统
- 利用小干扰RNA降低新基因CCP22的表达水平
- 2010年
- 目的:构建针对新基因CCP22的小干扰RNA(siRNA),降低CCP22蛋白表达水平。方法:设计一条针对新基因CCP22的siRNA序列,克隆到siRNA表达载体pSilencer-2.1-U6-neo上,测序验证正确后,将此表达载体与重组Flag-CCP22的表达载体pcDNA3.0-FLAG-CCP22共转染HEK293T细胞系,或单独转染CCP22siRNA,用West-ern印迹检验构建的CCP22siRNA的效果。结果:构建了针对新基因CCP22的siRNA,Western印迹结果表明CCP22siRNA序列能有效降低外源和内源CCP22蛋白的表达水平。结论:构建的CCP22siRNA干扰效果好,为进一步研究CCP22的功能奠定了基础。
- 冯帆叶棋浓
- 关键词：小干扰RNA基因表达
