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重庆医科大学检验医学院感染性疾病分子生物学教育部重点实验室: 作品数：262 被引量：645H指数：12; 相关作者：陈娟胡源张文露任吉华李宛蔚更多>>; 相关机构：广西医科大学公共卫生学院新疆医科大学公共卫生学院新疆医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项重庆市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学社会学更多>>

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金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrE的表达、纯化及晶体生长: 2014年; 目的:对金黄色葡萄球菌表面蛋白质(serine-aspartate repeat,SdrE)进行克隆表达纯化及晶体培养,以期解析其三维结构,进而深入分析金黄色葡萄球菌感染的分子机制,为研发新的抗菌药物提供基础。方法:利用PCR技术扩增SdrE基因,构建重组质粒pW28-SdrE,并在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)B834中表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱和DEAE阴离子交换层析柱纯化SdrE蛋白质,再用Hiload Superdex 200凝胶层析柱分析其在溶液中的聚集状态,用Hampton试剂盒初筛晶体及棋盘法优化晶体。结果:(1)构建了重组质粒pW28-SdrE,并在E.coli B834中可溶性表达。(2)获得了纯度较高(85%)的SdrE蛋白质,该蛋白质在溶液中以单体形式存在。(3)培养出晶形较好、衍射能力较强的SdrE蛋白质单晶。结论:利用经典的蛋白质纯化技术和晶体培养技术,可以获得衍射能力较强的SdrE单晶,为其三维结构的解析和基于结构的新型特异性抗菌药物的研发提供了重要的基础。; 张绍城郭珍张宏鹏苟冶然龙小滨汪德强; 关键词：金黄色葡萄球菌抗菌药物

特异性O1群稻叶型霍乱弧菌单克隆抗体的制备、筛选及识别抗原表位的分析被引量：1: 2008年; 目的制备并筛选出高特异性高活性的抗O1群稻叶型霍乱弧菌(Vibrio cholerae O1 Serotype Inaba)单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),为霍乱的预防诊断提供有力的抗体工具。方法应用杂交瘤技术,通过灭活的O1群稻叶型霍乱弧菌免疫的BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合制备特异性McAb,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行了特异性及排除性筛选,对筛选出的特异性McAb进行了包括亚型鉴定,效价、亲和常数的测定以及特异性的鉴定与分析,并通过单克隆抗体的位点相加实验、与O1群稻叶型霍乱弧菌脂多糖(LPS)的间接ELISA和Western blot实验对McAb识别的抗原表位进行了初步分析。结果融合了386株能分泌抗O1群稻叶型霍乱弧菌McAb的杂交瘤细胞株,通过用O1群小川型、O139霍乱弧菌及9种非霍乱弧菌的细菌进行的筛选,最后得到4株能稳定分泌特异性的针对该McAb的细胞株,其分泌的抗体亚类分别为2株IgG1,1株IgG2a,1株IgG2b;腹水效价均达10-6;亲和常数达108以上。间接ELISA法及Western blot证实所获的McAb可与O1群稻叶型霍乱弧菌发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示4株McAb识别不同的抗原表位,与LPS的反应表明其中2株针对O1群稻叶型霍乱弧菌脂多糖,2株针对非脂多糖抗原位点。结论获得霍乱弧菌O1群稻叶型特异性McAb,初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。; 张娟张君余晓林吴倩蒋飞龙黄长武李兴禄黄爱龙郑建; 关键词：霍乱单克隆抗体表位

SIRT3激动剂对乙肝病毒转录和复制的影响被引量：2: 2020年; 该文探讨了SIRT3激动剂(Honokiol,HKL)对乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)转录和复制的影响。培养HepG2-NTCP和人原代肝细胞(primary human hepatocytes,PHH),感染HBV颗粒后,用Honokiol(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)处理细胞后继续培养10天,通过荧光定量PCR检测细胞内HBV DNA、cccDNA和HBV RNAs水平,Southern blot实验进一步检测胞内HBV DNA水平。构建SIRT3-KO细胞,检测敲除SIRT3后,Honokiol对细胞内HBV DNA、cccDNA和HBV RNAs的影响。通过小鼠尾静脉高压注射pCMV-KRAB-Cre质粒和precccDNA质粒构建持续感染小鼠模型,一周后腹腔注射Honokiol持续20天。荧光定量PCR检测小鼠血清中HBV DNA拷贝数,肝组织内HBV DNA、cccDNA和HBV RNAs水平。结果表明,Honokiol浓度依赖性地抑制HepG2-NTCP和PHH细胞内HBV DNA以及HBV RNAs水平,此外,Honokiol可以降低cccDNA的转录活性;敲除SIRT3后,Honokiol不能发挥抗病毒作用;小鼠模型中,Honokiol能够降低血清中HBV DNA和肝组织内HBV DNA拷贝数,以及能够显著抑制肝组织内HBV RNAs水平和cccDNA的转录活性。该研究结果表明,Honokiol能够抑制乙肝病毒转录和复制。; 徐红艳姜慧秦一萍任放任吉华; 关键词：HONOKIOL 乙肝病毒共价闭合环状DNA

一种构建HBV聚合酶特定位点多种突变的方法被引量：1: 2017年; 核苷(酸)类似物[neocleot(s)ide analogues,NUCs]在治疗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的过程中常见的一个问题就是耐药的产生。耐药的产生与HBV逆转录酶(reverse transcriptase,RT)区特定位点突变具有直接关系。现有的体外表型分析方法存在固有的限制。本文提出一种构建HBV聚合酶特定位点多种突变的新方法,即位点特异性随机突变,通过一轮聚合酶链式反应扩增,在RT区特定位点引入多种突变形式,再结合golden-gate克隆法以及片段替换反应(fragment substitution reaction,FSR)将包含不同突变的DNA片段克隆到相应载体中以进行下一步分析。通过这种方法,构建了阿德福韦(adefovir,ADV)耐药位点rt181和rt236位点的多种突变形式。; 刘亚杨柳青张文露黄爱龙胡接力; 关键词：克隆核苷类似物耐药

精胺对Nup98基因的调控研究: 2011年; 利用基因芯片比较鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠和正常小鼠肝组织的表达差异;高效液相色谱法测定鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠和正常小鼠肝组织中的精胺含量;构建Nup98的启动子-虫荧光素酶报告基因质粒;脂质体Lipofectamine 2000TM转染小鼠细胞(NIH3T3),在含有精胺或正常培养条件下,测定虫荧光素酶活性。结果显示,Nup98基因在鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠肝组织表达增强;鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠肝组织中,精胺含量增高;成功构建Nup98的启动子-虫荧光素酶报告基因质粒pGL3-Nup98-P;精胺能在体外培养的条件下,增强虫荧光素酶的活性。这些结果证明精胺能激活Nup98基因的启动子活性,增强其在NIH3T3细胞中的表达。; 张磊万涛田圆圆王李英李凯秦栋栋曲嘉琳汤华; 关键词：精胺

乙型肝炎病毒对肝癌细胞Arid2基因表达的影响: <正>目的初步研究乙型肝炎病毒感染及其复制对肝癌细胞中抑癌基因Arid2表达的影响。方法采用携带1.1拷贝HBV基因组的复制型重组腺病毒Ad-HBV1.1感染HepG2和Huh7细胞,或者四环素诱导的HBV复制细胞模型H...; 李治陈震段玉洁聂丽珠田玲唐霓; 文献传递

APOBEC3B羧基端抗乙肝病毒位点的筛选和鉴定: 2017年; 目的:筛选参与APOBEC3B羧基端脱氨酶及抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)活性的重要区域和关键位点。方法:定点突变构建羧基端活性中心附近的3个螺旋区段(α2、α3、α4)的缺失突变体和α4螺旋区内(D316、K320、E321、R327、D328)位点的突变体;Southern blot筛选APOBEC3B抑制HBV复制的重要区段和关键位点;不同DNA变性PCR(differential DNA denaturation PCR,3D-PCR)和克隆测序进行验证。结果:APOBEC3B羧基端脱氨酶活性中心周围的α3和α4螺旋区缺失后,其抗病毒活性消失;D316位点突变后APOBEC3B的脱氨酶活性和抗病毒活性消失。结论:APOBEC3B羧基端的D316位点是APOBEC3B脱氨酶和抗病毒的关键位点。; 陈彦猛胡杰黄瑶袁琳周星胡源

14-3-3家族在HBV复制的肝癌细胞中的表达研究被引量：1: 2017年; 目的:研究14-3-3家族在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的肝癌细胞中的表达。方法:运用q RT-PCR和Western blot分析14-3-3家族在HBV复制细胞系中的表达水平;q RT-PCR、Western blot检测HBV复制在Hep G2细胞中对14-3-3ζ表达的影响;Western blot检测HBV复制在小鼠肝组织中对14-3-3ζ表达的影响。结果:在Hep G2.2.15中,14-3-3η、γ、ζm RNA和蛋白的表达水平较Hep G2对照组明显增加(m RNA:t=16.5、27.86、17.23,P=0.000、0.000、0.000;蛋白:t=35.7、16.97、22.51,P=0.000、0.000、0.000);在Hep AD38(Tet-)中只有14-3-3ζm RNA和蛋白的表达水平较Hep AD38(Tet+)对照组明显增加(m RNA:t=14.27,P=0.000;蛋白:t=12.11,P=0.000);HBV复制能使Hep G2中14-3-3ζm RNA和蛋白的表达显著升高(m RNA:F=98.8,P=0.000;蛋白:F=118.3,P=0.000);HBV复制能使小鼠肝组织中14-3-3ζ蛋白的表达显著升高(F=109.4,P=0.000)。结论:HBV可以促进肝癌细胞内14-3-3η、γ、ζ的表达,这一发现为控制HBV感染的治疗策略提供新的靶点。; 张祥魏杰靳鑫王石磊阳媛师悦嫄牛司强汪德强; 关键词：乙型肝炎病毒

干扰素在肝癌细胞Huh7.0中诱导SAMHD1抑制HBV复制被引量：3: 2019年; 目的:研究干扰素调节宿主限制性因子SAMHD1的表达而抑制HBV复制的分子机制。方法:首先不同剂量的干扰素α、β和γ处理Huh7. 0细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测SAMHD1在转录和翻译后的表达水平;进一步通过siRNA干扰内源性的SAMHD1,再评价干扰素α、β对病毒的抑制效应;最后通过免疫荧光检测了干扰素α诱导内源性SAMHD1的细胞定位及Southern blot检测了SAMHD1细胞定位对病毒复制的影响。结果:在Huh7. 0细胞中,SAMHD1的RNA水平和蛋白表达明显受干扰素α和β的诱导升高;干扰SAMHD1后干扰素α和β对HBV复制的抑制作用消失; SAMHD1定位在细胞核内,干扰素α诱导SAMHD1同样定位在细胞核内,缺失核定位信号后SAMHD1丧失了其抑制病毒复制的作用。结论:在Huh7细胞中,干扰素α、β能诱导SAMHD1表达上调来抑制HBV的复制,SAMDH1的抗病毒作用依赖于其细胞定位。; 乔淼胡杰毛彬力皮思蝶胡源; 关键词：乙型肝炎病毒干扰素

过表达SIRT3抑制裸鼠异位移植人肝细胞癌的生长及其机制研究被引量：1: 2015年; 该文旨在研究人肝细胞癌异位移植瘤裸鼠模型中沉默信息调节因子3(silent information regulator 3,SIRT3)对肝细胞癌生长的影响及其机制。建立稳定过表达SIRT3和pc DNA3.1的SK-Hep-1细胞株;将稳定过表达SIRT3和pc DNA3.1的细胞悬液分别注射入裸鼠皮下,实时监测两组移植瘤的生长,25 d后剥离出移植瘤并称重;免疫组织化学检测移植瘤中SIRT3、Ki67的表达水平;应用定量逆转录PCR(q RT-PCR)筛选SIRT3影响移植瘤生长的下游靶向分子,Western blot检测下游靶向分子Bax的表达量以及移植瘤中cleaved-PARP(poly ADP-ribose polymerase)的表达水平。结果显示,过表达SIRT3组移植瘤的体积和重量都小于pc DNA3.1组;过表达SIRT3组移植瘤中Ki67的表达水平较pc DNA3.1组降低;过表达SIRT3上调Bax的m RNA和蛋白质水平并促进PARP的剪切。该文结果提示,SIRT3可能通过Bax凋亡信号通路抑制人肝细胞癌异位移植瘤的生长。; 陈祥任吉华冉龙宽陶娜娜李宛蔚周洪钟刘波陈娟; 关键词：肝细胞癌移植瘤 BAX

重庆医科大学检验医学院感染性疾病分子生物学教育部重点实验室

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