南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室
- 作品数：130 被引量：418H指数：11
- 相关作者：赵东红李东霞李正荣孔秀芹钱近春更多>>
- 相关机构：郑州大学基础医学院南京大学生命科学学院医药生物技术国家重点实验室南京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 麦冬皂苷D缓解多柔比星诱导的心肌细胞损伤
- 本研究探讨麦冬皂苷D 对多柔比星诱导心肌损伤的保护作用。结果表明，多柔比星可诱导H9c2细胞内质网应激相关蛋白的表达量显著上升，并导致细胞活性氧含量增加，活力下降。而麦冬皂苷D预处理可部分逆转多柔比星引起的上述变化，抗氧...
- 张赢予张国辉孟晨高艳红芮涛张朝
- 关键词：麦冬皂苷D多柔比星内质网应激
- 重组大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶的PET载体的选择及乳糖诱导作用的初步研究被引量：5
- 2008年
- 采用PCR技术以E.coliK-12基因组DNA为模板扩增出γ-谷氨酰转肽酶基因,克隆至原核表达载体pET28(a)和pET32(a)中,经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),借助SDS-PAGE分析方法,对于用乳糖诱导,由T7lac启动子控制的重组目的产物蛋白的表达规律进行了优化研究。在对诱导条件进行优化控制的前提下,分析比较了乳糖诱导pET28(a)/γ-ggt和pET32(a)/γ-ggt两种重组质粒表达大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶蛋白的可溶性及酶活。实验结果表明,对于T7lac启动子控制的重组目的产物,乳糖作为诱导剂也可以起到很好的诱导表达效果,低温培养下,乳糖诱导pET32(a)/γ-ggt重组质粒表达γ-谷氨酰转肽酶具有更高的蛋白可溶性和酶活。
- 胥俊峰贾晓鹤张正平殷志敏
- 关键词：Γ-谷氨酰转肽酶克隆乳糖
- PP2A Cα敲除小鼠心肌细胞模型的构建
- 2013年
- 体外构建PP2A Cα敲除的原代小鼠心室肌细胞模型.选择性地将雄性PP2A Cαfl/fl,Cre/-小鼠与雌性PP2ACαfl/fl,Cre/-小鼠交配.新生小鼠心脏经胰酶消化后差速贴壁获得原代小鼠心室肌细胞,用带有Cre的腺病毒侵染心肌细胞,经荧光显微镜观察和Western-blot检测,分析PP2A Cα的敲除效果.将基因型为PP2A Cαfl/fl,Cre/-的雌雄小鼠进行交配,得到其同样基因型的后代,进而可获得足量基因型为PP2A Cαfl/fl,Cre/-的原代小鼠心肌细胞.用带有重组酶Cre的腺病毒侵染细胞48 h后,可见带有绿色荧光的心肌细胞;Western-blot检测显示,PP2A Cα在Cre腺病毒侵染的心肌细胞可下调60%～80%.本研究成功建立了PP2A Cα敲除的原代小鼠心肌细胞模型.
- 陈文温明达董大川高艳红张朝
- γ-亚麻酸在RAW264.7细胞中的抗炎症作用机制被引量：2
- 2010年
- [目的]探讨γ-亚麻酸（GLA）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞产生炎症介质的影响及其机制。[方法]以体外培养的巨噬细胞系RAW264.7细胞为研究对象,待细胞生长至融合状态后加入不同浓度（0、12.5、25、50μmol/L）的GLA预孵4 h,利用100 ng/m l的脂多糖（LPS）刺激12.0 h或0.5 h,同时设空白对照和LPS对照,利用蛋白印迹法检测诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、环加氧酶-2（COX-2）蛋白的表达以及对IκBα、p-JNK/SAPK（Thr183/Tyr185）、p38 MAPK、p-p38 MAPK（Thr 180/Tyr182）、ERK1/2、p-ERK1/2的影响。[结果]GLA可以显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中iNOS和COX-2的蛋白表达（P〈0.05）,且在0~50μmol/L GLA浓度范围内存在剂量依赖关系。GLA可以显著抑制IκBα的降解（P〈0.05）,从而抑制NFκ-B的激活。GLA可以显著抑制LPS诱导的JNK1/2以及ERK1/2的磷酸化（P〈0.05）,对p38的磷酸化没有显著影响。[结论]GLA具有很好的消炎功效。抑制JNK1/2和ERK1/2的磷酸化、抑制NF-κB的激活可能是GLA发挥生物学效应的重要机制。
- 孔秀芹殷志敏罗兰
- 关键词：Γ-亚麻酸内毒素炎症
- C2C12成肌细胞诱导肌性分化过程中miR-101a的表达被引量：1
- 2012年
- 以C2C12成肌细胞为模型,在分化培养基中诱导C2C12建立体外肌性细胞分化模型。以poly(A)3'-端加尾和实时定量PCR方法研究miR-101a在C2C12细胞分化过程中的表达情况。结果发现,在细胞转入分化培养基进行肌性分化的1-5 d中,miR-101a的表达量逐渐增加,提示miR-101a可能在肌肉发生中发挥调控作用。
- 李粉王丽郑艳艳陈华群
- 关键词：实时定量PCR
- 家蚕抗菌蛋白Cecropin D和Lysozyme的分离纯化及性质鉴定被引量：4
- 2006年
- 经大肠杆菌E．coli K12D31诱导后的家蚕幼虫，其免疫血淋巴经CM-Sepharose CL-6B离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析及HPLC分离后，得到2种抗菌蛋白，经液相色谱-电喷雾质谱（ESI-MS）分析鉴定，纯化的2种抗菌蛋白分别是家蚕抗菌肽eeeropin D和溶菌酶lysozyme酸性电泳（A-PAGE）测活免疫血淋巴得到抗菌蛋白活性谱：cecropin D在8h无显著表达，12h有较强抗菌活性，30h达到最高，以后逐渐降低；lysozyme在8h后检测到表达，12h到达高峰，之后逐渐下降，48h的血淋巴中未检测到明显的表达．研究认为抗菌蛋白lysozyme和cecropin D是家蚕幼虫感染细菌8h后大量表达的抗菌蛋白，主要参与细菌感染12～30h的血淋巴对细菌的清除，是参与家蚕幼虫抗菌免疫的重要蛋白．
- 陈玉清李保存吴希张双全
- 关键词：CECROPINLYSOZYME纯化
- 蛋白含量检测的抗干扰新方法被引量：2
- 2012年
- 为提高蛋白质含量检测方法的抗干扰能力,从福林酚试剂法入手,以牛血清白蛋白为标准样品,重新设计制定实验试剂组成与配比等,获得蛋白质含量检测新方法,然后探讨新方法的适用检测波长范围和稳定性,并利用细胞全蛋白裂解液分析它对多种常见干扰物质的包容性。实验发现,新方法不仅能准确检测蛋白质含量,对蛋白质测定液中表面活性剂的耐受浓度,如十二烷基硫酸钠(SDS)、NP-40和TritonX-100分别达到10%、2%和1%;螯合剂乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)和Ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid(EGTA)则分别达25 mmol/L和1 mmol/L;对还原剂二硫苏糖醇(DTT)和β-ME的包容浓度均为1 mmol/L;而含氮化合物硫酸铵与尿素则分别为0.5 mol/L和4 mol/L。与原方法相比较,对常见干扰物质的耐受性有显著提高,说明新方法适用含多种干扰物质的蛋白质溶液,在生命科学研究领域具有广泛应用前景。
- 董源汤灵玲林林卢山
- 关键词：表面活性剂螯合剂还原剂含氮化合物耐受性
- 生物时钟调控DNA损伤反应的研究进展
- 2015年
- 随着地球的自转,哺乳动物的许多生理和行为都表现出以24h为周期的节律性振荡。生物时钟是昼夜节律产生的物质基础。在分子水平上,生物时钟由一组高度保守的时钟基因及其编码的蛋白质形成的转录-翻译反馈环路组成。它控制着许多生化反应的进行,包括细胞对基因毒性刺激等环境因素的反应。最近的研究发现,生物时钟在细胞的DNA损伤反应过程(包括DNA修复、DNA损伤检验点以及细胞凋亡)中发挥着重要的调控作用。深入了解其中的机制将为治疗相关疾病提供潜在的药物靶点,也可指导开发新的治疗方案,如时辰疗法。
- 唐小利郭志刚刘畅
- 镉升高神经细胞[Ca2+]i介导CaMKII磷酸化导致MAPKs和mTOR通路激活和细胞凋亡
- 镉(cadmium,Cd)是一种有毒的环境污染物,主要来源于金属冶炼、吸烟污染等,可通过食物链或直接接触在人体中积累,对多器官及系统具有致毒性。已有研究表明,血-脑屏障对镉有高渗透性;急、慢性镉染毒或中毒与帕金森病(PD...
- 陈素娟许宝山徐一娇张振马洪伟黄世乐陈龙
- 关键词：镉CAMKIIMAPKSMTOR神经细胞
- 文献传递
- P300/CBP相关因子(PCAF)表达水平对人子宫内膜间质细胞增殖的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:观察P300/CBP相关因子(P300/CBP associated factor,PCAF)对人子宫内膜间质细胞增殖的调控作用。方法:通过Western blotting、实时定量PCR及Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖实验,观察分析Ad-FLAG-PCAF重组腺病毒介导的PCAF过表达及PCAF-siRNA介导的PCAF低表达对体外培养的人子宫内膜间质细胞增殖的影响。结果:获得滴度为8×1010ifu/ml的重组Ad-FLAG-PCAF腺病毒,转染体外培养的人子宫内膜间质细胞后,可有效介导细胞内FLAG-PCAF融合蛋白的高表达;而转染PCAF特异的siRNA后,可有效抑制人子宫内膜间质细胞中PCAF的表达。PCAF过表达的人子宫内膜间质细胞中,其细胞周期标志蛋白cyclinD1和cyclinD3的表达水平显著降低(P<0.05),而PCAF低表达的人子宫内膜间质细胞中,其cyclinD1和cyclinD3的表达水平显著升高(P<0.05);此外,CCK-8实验结果显示,PCAF过表达能显著抑制由雌、孕激素共同刺激所引起的人子宫内膜间质细胞的增殖,而基因沉默人子宫内膜间质细胞中内源性PCAF的表达后,间质细胞的增殖增加>20%(P<0.05)。结论:PCAF可能通过蛋白乙酰化修饰作用,参与调控人子宫内膜间质细胞的增殖过程。
- 朱丽华刘红玉沈晓月甄鑫王玢颜桂军孙海翔
- 关键词：P300增殖
