华中科技大学生命科学与技术学院中英 HUST-RRes 基因工程和基因组学联合实验室 作品数:95 被引量:614 H指数:13 相关作者: 罗杰 罗立廷 周诗毅 熊志勇 张金锐 更多>> 相关机构: 武汉大学生命科学学院 湖北大学生命科学学院 河南城建学院生物工程系 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 医药卫生 轻工技术与工程 更多>>
转基因小麦Puroindoline蛋白SDS-PAGE方法的研究与应用 被引量:1 2006年 小麦嘌呤吲哚蛋白(Puroindoline)是优质遗传特性硬度的生化标记,对小麦磨粉品质起决定性作用。对目前分析此类蛋白的两类Triton-X-114和Tricine-SDS-PAGE系统进行了优化和比较,建立了详细的适合半子粒分离Pin蛋白的电泳方法。采用此法检测转pinA基因的硬粒小麦P34的后代以及转基因硬粒小麦之间杂交子代的外源基因pinA的表达情况,取得了良好的效果。该方法为Puroindoline蛋白的进一步研究奠定了基础,为小麦品质生化和分子标记辅助育种提供了方法。 张金锐 陈明洁 姜泽群 宋斐 熊晓燕 何光源关键词:小麦 SDS-PAGE 试论蛋白质组学的专利保护 被引量:1 2008年 蛋白质组学是后基因组时代的新兴学科,是当今生命科学领域新的增长点。蛋白质组学的研究为药物筛选、新药开发、临床诊断及新陈代谢途径研究等提供理论依据和研究基础。对蛋白质组学领域中涉及的蛋白质药物、数据库及检测分离设备等的专利保护现状和策略进行了初步探讨,并强调了加强我国蛋白质组学知识产权保护特别是专利保护的重要性。 常俊丽 朱雪忠 何光源关键词:蛋白质组学 蛋白质三维结构 数据库 小麦谷蛋白分子结构研究进展 被引量:4 2009年 小麦谷蛋白是影响面团弹性及烘焙品质的重要因素,有机大分子的结构决定其功能性,因此了解小麦谷蛋白的结构与组成是研究面粉品质的基础。本文综述了近年来国内外利用蛋白质分离技术、多肽合成技术、质谱光谱分析技术及扫描穿隧显微技术等对麦谷蛋白亚基分子结构研究取得的成果,介绍了利用此类技术所获得的麦谷蛋白分子一级、二级结构的特征以及这些特征对面筋功能的影响,并回顾了生物信息学中的蛋白质结构预测方法在麦谷蛋白分子结构研究领域的应用,在此基础上对麦谷蛋白亚基内或亚基间二硫键形成模式进行了讨论。 杨曦 黄伟伟 汪越胜 杨广笑 何光源关键词:麦谷蛋白 面粉品质 分子结构 蛋白质结构预测 二硫键 Bar表达框基因载体高频转化栽培小麦 被引量:2 2007年 为探讨无载体主干序列(细菌DNA)的表达框基因直接转化栽培小麦的可行性和有效性,对栽培小麦(Triticum aestivum L.)进行了bar表达框基因的基因枪转化.通过试材培养、外植体分离、bar表达框基因分离提取和纯化、基因枪轰击、诱导分化与再生培养、再生苗核酸抽提、转基因检测及除草荆涂抹试验等方法,筛选到23株全部来自幼胚愈伤的独立再生苗,其中18株显示bar表达框基因的整合,且均表现抗除草荆效应.基因型鄂麦12号的转化频率(1.55%)高于鄂恩1号(0.87%),两基因型在1100psi轰击压下的转化频率均高于900psi,其中鄂麦12号达到3.51%,明显优于鄂恩1号,且高于常规小麦基因枪的平均转化频率0.50%~1.00%.鄂麦12号幼胚在1100psi轰击压下转化bar表达框基因可获高转化效应.袁明受体基因型、外植体类型、轰击压等因素在优化表达框基因转化体系中具重要作用.推断表达框基因转化方法具有片段小、环境安全、转化效率高、整合模式简单、表达高效等优势,在作物遗传转化中具有广泛应用前景. 施农农 何光源 李克秀 王慧中关键词:BAR 牡山羊草Aegilops juvenalis Puroindoline b基因的克隆 2005年 Puro indo line a(P ina)和puro indo line b(P inb)是控制小麦籽粒硬度的主效基因。根据已报道的小麦P inb基因的保守序列,设计合成了一对特异性引物,对六倍体牡山羊草A eg ilop s juvena lis(UUMM DD)的基因组DNA和胚乳cDNA进行P inb基因扩增、克隆和序列测定,发现了两个新型P inb等位基因P inb-a lle le-1和P inb-a lle le-2。该基因全长360 bp,编码119个氨基酸残基。它编码的蛋白和麦类作物Puro indo line B(P inB)的成熟蛋白有非常高的同源性,具有麦类作物P inB蛋白所特有的W PTKWW K的色氨酸结构域和10个半胱氨酸所形成的5个二硫键结构。与软粒小麦cv.C ap ito le的P inb-D 1a相比较,其核苷酸同源性为93.1%、93.3%,氨基酸同源性为90.8%、92.4%。P inb-a lle le-1和P inb-a lle le-2分别含有11和9个氨基酸变异位点。RT-PCR证实了P inb-a lle le-2基因在籽粒胚乳中的表达。Sou thern B lot分析结果表明,牡山羊草中含有两个拷贝的P inb基因,其中包含着与小麦差异较大的籽粒硬度控制基因。 陈明洁 方倜 罗立廷 杨广笑 何光源关键词:PUROINDOLINE 籽粒硬度 克隆 S-腺苷-L-蛋氨酸(SAM)稳定性盐产品制备的研究 被引量:3 2006年 研究了S-腺苷-L-蛋氨酸(SAM)盐产品的制备方法,确定了甲醇沉淀结晶SAM硫酸盐的最优条件,进一步优化了脱色精制SAM双盐产品的方法。破胞液经超滤后,过D152树脂以硫酸溶液洗脱,可得到纯度(色谱纯)在98%以上的SAM硫酸盐产品,以对甲苯磺酸溶液溶解SAM硫酸盐后脱色精制得到SAM硫酸对甲苯磺酸双盐。 刘恭源 崔海容 郭坚 蔡诗贵 何光源关键词:脱色 冷冻干燥 小麦不同生理状态的幼穗和幼胚盾片与诱导分化能力关系的研究 被引量:26 2001年 用植物组织培养的方法 ,研究了冬小麦品种鄂恩 1号和品系鄂 5 5 0 72不同生理状态的幼穗和幼胚盾片与诱导分化的关系。结果表明 ,长度在 0 .4~ 2 .0 cm间的幼穗和直径在0 .4~ 1 .5 mm间的盾片随生理状态不同 ,其诱导和分化频率有明显的差异 ,幼嫩的材料再生频率较高。经 SAS统计分析 ,发现 0 .5~ 1 .0 cm长的幼穗和直径为 0 .4~ 1 .1 mm的盾片是处于诱导分化的最佳生理时期的实验材料 ,平均每个胚性愈伤组织的植株再生分别达到 3 .1 7和 5 .6 3株。通过比较幼穗和幼胚盾片的植物组织培养结果 ,发现幼胚盾片比幼穗愈伤组织出现早 ,生长快 ,植株再生绿苗率高 ,这表明小麦幼胚盾片是较好的植物组织培养的材料。 何勇刚 林刚 刘曼西 何光源关键词:小麦 幼穗 生理状态 小麦高分子量麦谷蛋白亚基1By15N端区同源建模与分子动力学模拟 2009年 通过二级结构预测、折叠识别、同源建模和分子动力学模拟的方法,获得三个小麦高分子量麦谷蛋白亚基1By15N端区的三维结构模型。模型分析发现,y-型高分子量麦谷蛋白亚基N端的5个半胱氨酸具有两种成键模式,一种是Cys22和Cys44之间形成一个链内二硫键,N端剩余的三个半胱氨酸Cys10,45和55都是自由半胱氨酸用于形成链间二硫键;另一种是Cys22和Cys44,Cys10和Cys55之间形成两对链内二硫键,剩余一个Cys45作为自由半胱氨酸用于形成链间二硫键。 杨曦 黄伟伟 杨广笑 汪越胜 何光源关键词:小麦 麦谷蛋白 同源建模 分子动力学模拟 二硫键 假单胞菌诱导筛选菌株PhA苯酚降解动力学及SDS对其影响 被引量:6 2004年 为提高苯酚降解速率 ,由假单胞菌 (Pseudonomonas.sp)诱导筛选得到了一株能以苯酚为唯一碳源生长的新菌株Pha ,并使其苯酚选择压力从 4 0 0mg L逐步提高到了 70 0mg L。且Pha菌株降解苯酚过程符合一级反应动力学方程。使用十二烷基磺酸钠 (SDS)作为增溶剂来促进降解时 ,发现在SDS浓度为 5 0 - 15 0mg L时 ,降解苯酚的速率随SDS浓度增加而提高。SDS在低浓度时对其生长影响很小 ,但浓度达到 30 0mg L时 ,对其生长开始有了明显的抑制作用。结果标明PhA菌株有着较高的苯酚耐受浓度 ,SDS可以显著的提高苯酚的降解速率。SDS的理论最佳投放量为 15 0mg L。 刘志峻 何光源关键词:假单胞菌 苯酚 生物降解 SDS 中国春小麦puroindoline a基因的克隆及其真核表达载体的构建 2007年 目的:puroindoline(pin)基因在控制麦类作物的籽粒硬度中起着重要作用。构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-pina-gfp,为pina基因在哺乳细胞中的表达提供基础。方法:利用PCR方法从中国春小麦基因组中克隆到了pina基因,将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)-gfp,用PCR和酶切鉴定重组子。结果:PCR和酶切鉴定表明,所构建的真核表达重组质粒为pcDNA3.1(+)-pina-gfp;将该片段克隆到pCF-T载体中,经测序验证,表明其为目的基因。结论:构建的pina基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-pina-gfp为pina基因在哺乳动物细胞中的表达提供了基础。 陶红梅 罗立廷 朱婷婷 杨广笑 何光源关键词:PUROINDOLINE 中国春小麦 基因克隆 真核表达载体