重庆大学生物工程学院基因工程研究中心
- 作品数：41 被引量：216H指数：9
- 相关作者：刘明春樊晶王心宇黄冠军苗青更多>>
- 相关机构：第三军医大学基础部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 哈姆林甜橙蔗糖合酶Ⅰ和酸性转化酶基因表达与果实糖积累的关系被引量：5
- 2010年
- 蔗糖合酶(Sucrose synthase,SS)与酸性转化酶(Acid invertase,AI)是甜橙糖代谢过程中的两个关键酶,SS催化尿嘧啶核苷二磷酸葡萄糖和果糖合成蔗糖的可逆反应,AI则不可逆的催化蔗糖分解为果糖和葡萄糖,它们在甜橙糖代谢过程中起着重要作用。笔者以哈姆林甜橙品种为试验材料,采用半定量RT-PCR法,对4个时期哈姆林叶片中的SSI基因和AI基因的表达进行了分析。结果表明,4个时期哈姆林叶片中均可检测到SSI基因和AI基因在转录水平上的表达,但表达量存在差异。SSI基因在果实发育过程中表达量呈"低-高-低-高"趋势。AI基因在哈姆林果实发育成熟过程中的表达逐渐减弱,与果实糖累积呈负相关。
- 王滕旭李正国杨迎伍邓伟
- 关键词：酸性转化酶基因半定量RT-PCR
- 超分支滚环扩增法检测小麦矮腥黑穗菌被引量：10
- 2009年
- 【目的】建立小麦矮腥黑穗病菌(Tilletia controversa Kühn,TCK)的超分支滚环扩增(hyper-branched rolling cycle amplification,HRCA)检测体系,为小麦矮腥黑穗病的鉴定以及早期诊断提供了一种新的稳定、可靠的检测技术。【方法】锁式探针包含一个公共连接序列和在探针两端与靶DNA序列互补的2个序列。根据TCK的差异序列设计锁式探针两端序列,以此为基础建立了TCK超分支滚环扩增反应体系。以优化的HRCA反应条件为基础,确定检测体系的特异性和灵敏度。比较HRCA体系和常规PCR体系的性能,并利用这2种体系对来自中国出入检验检疫局截获的51个小麦样品进行了验证检测。【结果】HRCA体系能专一地检出小麦矮腥黑穗菌的DNA靶带,而TCT、TCL等近源种及健康小麦样品都不能扩增。HRCA检测TCK靶序列质粒DNA的下限为1fg·μl-1,检测基因组DNA的下限为10pg·μl-1,检测灵敏度比常规PCR检测体系高10倍。HRCA检测体系具有很好的特异性、灵敏度和准确性,更适合于TCK的检测及鉴定。【结论】稳定、灵敏、特异的小麦矮腥黑穗菌的HRCA检测体系的建立,为小麦矮腥黑穗病的早期诊断及其近源种的多靶标检测提供了同步检测技术。
- 蔡俊殷幼平葛建军陈洪俊黄冠军张雯迪王中康
- 关键词：小麦矮腥黑穗病锁式探针
- 植物中XRN家族的研究进展
- 2011年
- XRN家族是一类5'-3'核酸外切酶家族,主要参与rRNA的成熟加工以及特异mRNA的降解过程,在动物、植物以及微生物的生长发育过程中起着重要的作用。对XRN家族在植物生长发育过程中的功能进行了综述,XRN家族在植物中主要参与rRNA加工过程、miRNA途径、外源mRNA降解过程以及乙烯信号通路。
- 刘俊江李正国杨迎伍
- 关键词：MRNA降解PTGS
- 采后钙处理对奉节脐橙褐变及膜脂过氧化作用的影响被引量：11
- 2010年
- 奉节脐橙(Citrus sinensis Osbeck)是重庆鲜食柑橘的重要品种之一,但容易发生果皮褐变,严重影响生产的经济效益。为了降低脐橙果皮褐变的发生,提高果实的耐贮性和商品价值,本研究以奉节脐橙果实为材料,分别用1%CaCl2、2%CaCl2、1%Ca(NO3)2、2%Ca(NO3)2配合施保功、2,4-D处理,分析其对果皮褐变及膜脂过氧化作用相关生理指标的影响。结果表明:钙处理能有效降低褐变指数、相对电导率和丙二醛含量,提高膜脂过氧化保护酶活性,从而降低果皮褐变率;氯化钙处理效果优于硝酸钙处理。1%CaCl2浸果处理的效果最好,贮藏110d后,褐变指数比对照降低了27.5%。
- 袁陵李正国杨迎伍樊晶王心宇邓伟
- 关键词：脐橙钙处理果皮褐变膜脂过氧化作用
- 鹦鹉热衣原体real-time quantitative PCR检测方法的研究被引量：8
- 2008年
- [目的]为鹦鹉热衣原体的快速、准确检测奠定基础。[方法]根据鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白（MOMP）基因序列设计一对特异性引物，以SYBRGreenI为荧光染料，建立了鹦鹉热衣原体Real-time quantitativePCR检测方法。根据检测结果，计算样品的批内和批间变异系数（CV）。[结果]以提取的鹦鹉热衣原体DNA为模板。用引物Cps-1和Cps-2进行PCR扩增，得到长100bp的片段。扩增产物回收纯化后。连接到pGEM-TEasy载体上并转化到大肠杆菌DH50α。菌落PcR检测筛选阳性克隆，培养后提取质粒DNA。当模板浓度范围为1.78×10^2～1.78×10^8拷贝／μl时，标准曲线相关系数达0.998；批内和批间变异系数（CV％）分别为1．30％～4．59％和5.72％～9.87％。[结论]为鹦鹉热衣原体的感染、流行调查等提供了重要的技术参考。
- 吴东海李应国杨迎伍邓伟王昱李正国
- 关键词：鹦鹉热衣原体荧光实时定量PCR外膜蛋白基因
- 脐橙CsCAB基因的克隆及表达载体构建被引量：1
- 2010年
- 从脐橙果皮褐变相关基因的cDNA抑制差减文库中,获得了一个CAB基因家族的同源EST序列,通过快速扩增cDNA末端(RACE)方法成功克隆得到984bp的CsCAB全长基因(GenBank登录号EF010854)。序列分析结果表明,CsCAB包含一个621bp的开放阅读框(ORF),编码207个氨基酸;CsCAB蛋白与钙结合蛋白具有很高的同源性,且具有钙结合蛋白的保守结构域EF-hand。并构建了脐橙CsCAB基因的正、反义植物表达载体pCAMBIA1301-CABs和pCAMBIA1301-CABas,为该基因的功能研究奠定了基础。
- 苏丽艳李正国樊晶高雪杨迎伍邓伟郝彦伟
- 关键词：脐橙克隆
- 应用常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测柑桔衰退病毒被引量：15
- 2008年
- 根据柑桔衰退病毒(CTV)P20基因序列设计cquctv9/cquctv10特异引物对,以柑桔RNApolymeraseⅡ基因作为内参照,建立了柑桔衰退病的常规RT-PCR快速检测体系;依据柑桔衰退病毒P20基因序列设计cquctv1/cquctv2特异引物对和TaqMan探针cquctvp1,建立了柑桔衰退病荧光定量RT-PCR快速检测体系。常规RT-PCR检测下限是含有CTV的50pg总RNA,荧光定量RT-PCR法的检测下限是2fg纯CTV片段。荧光定量RT-PCR的灵敏度相对比常规RT-PCR高100倍。利用常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR体系对从2005年3月到2006年7月采自田间的样品进行检测,结果表明,2种检测体系都有很好的特异性和准确性;对183个田间柑桔苗木样品带毒率检测结果表明,荧光定量RT-PCR检出率为(82.5%),比常规RT-PCR检出率(73.2%)高。
- 刘红光王中康曹月青夏玉先殷幼平
- 关键词：柑桔衰退病毒荧光定量RT-PCR
- VIGS技术在植物基因功能研究中的应用被引量：17
- 2007年
- 文章就病毒载体选择、目标基因插入片段设计、病毒嫁接技术、环境条件控制、沉默植株检测等方面对应用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术研究植物基因功能应遵循的基本原则进行介绍,并讨论了其在应用中存在的一些问题。
- 杨迎伍李正国宋红丽杨平
- 绿僵菌第五类Ser/Thr蛋白磷酸酶基因的克隆及表达特征分析被引量：1
- 2011年
- 【目的】克隆绿僵菌第五类Ser/Thr蛋白磷酸酶(PP5)基因,了解该基因及其编码产物的结构特征和两种产孢模式(微循环产孢和正常产孢)中的表达特征。【方法】通过绿僵菌中PP5基因EST序列与全基因组数据库比对,获得PP5基因DNA序列;通过同源蛋白比对预测PP5基因的DNA结构并设计引物,PCR扩增获取PP5全长cDNA序列;通过在线分析工具及生物软件进行蛋白结构分析。采用实时荧光定量PCR检测PP5基因在两种产孢模式中的表达特征。【结果】PP5基因长2100 bp,含7个外显子和6个内含子;cDNA开放阅读框长为1428 bp(GenBank登录号HQ317137),编码475个氨基酸;一级、二级及三级结构分析均显示较保守的蛋白磷酸酶结构特征。实时荧光定量PCR分析表明,PP5基因在绿僵菌微循环产孢的不同阶段表达水平具有显著性差异,特别是在孢子接种16、24、32 h高表达,而在正常产孢模式下表达量非常少。【结论】克隆了绿僵菌的PP5基因,详细了解了该基因及其编码产物的结构特征,发现了该基因在微循环产孢孢子形成后期高表达的重要特征,为进一步研究该基因在微循环产孢中的功能奠定了基础。
- 徐飞彭国雄夏玉先
- 关键词：绿僵菌
- 柑橘黄龙病感染韧皮部内生细菌菌群多样性研究
- 柑橘是世界上产量最大的水果,中国是世界上产柑橘最多的国家,其次是、巴西、美国、墨西哥和西班牙.柑橘黄龙病(Citrus huanglongbing,HLB)是由难人工培养的韧皮杆菌(Ca.Liberibacter asi...
- 王中康王爱华李颜芳李佳谢攀殷幼平
- 关键词：柑橘黄龙病内生细菌RFLP
