中山大学中山医学院检验系
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 相关作者：于明路陈灿华李银珍张锦华陈晓文更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家科技支撑计划广州市医药卫生科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 前列腺特异膜抗原基因的克隆和真核表达
- 2005年
- 目的克隆前列腺特异膜抗原(PSMA)基因的编码区序列,并进行真核表达。方法用RT-PCR方法扩增前列腺癌组织标本中的PSMA cDNA序列,并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0。用脂质体转染法,把pcDNA3.0-PSMA转染哺乳动物细胞,鉴定PSMA蛋白的表达。结果序列测定结果表明,两条引物之间的片断长度为2279 bp,与预期长度一致。将克隆的编码区序列与Genebank的PSMA序列进行Blast对比分析,同源性为99.7%;间接免疫荧光法显示表达的蛋白质为膜蛋白,免疫印迹表明表达蛋白质的分子量为100 000。结论利用RT-PCR技术成功扩增了PSMA编码区序列,经序列分析显示扩增片断的序列正确。构建了PSMA真核表达载体,建立了PSMA稳定表达的细胞株。经免疫分析,证实了真核细胞内表达的PSMA为分子量正确的膜蛋白,且具有良好的抗原性。所获得的PSMA真核表达系统为进一步研究PSMA基因修饰的DCs疫苗对前列腺癌的治疗提供了物质基础。
- 戴淑琴孙秀英王军业曹开源何丽容徐霖袁广卿
- 关键词：前列腺肿瘤前列腺特异膜抗原克隆分子真核表达
- 胸苷激酶基因系统对膀胱癌细胞及凋亡基因的影响被引量：3
- 2005年
- 目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶 /丙氧鸟苷 (HSV TK/GCV )系统对膀胱癌细胞BIU 87的杀伤作用及对凋亡基因的影响。方法 脂质体将TK基因成功转入BIU 87,噻唑蓝(MTT)法、TUNEL法、流式细胞仪 (FCM )分别检测GCV对其生长影响及凋亡率和细胞周期变化 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测bcl 2、bax、bak、Caspase 3mRNA表达变化 ,比色法测定Cas pase 3活性变化。结果 作用 5d 1mg/LGCV能杀死 67%的细胞 ,10 0mg/LGCV达到最大杀伤率杀死 97%的细胞 ;GCV诱导细胞凋亡 ,细胞周期阻滞在S和G2期 ;bcl 2表达降低 ,bax表达升高 ,Caspase 3表达及活性升高。结论 HSV TK/GCV系统可有效杀伤膀胱癌细胞并引起细胞凋亡 ,细胞周期阻滞、bcl 2和bax表达变化、Caspase 3活化是引起凋亡发生的重要因素。
- 毛晓鹏丘少鹏曹开源袁广卿陈显景徐林
- 关键词：膀胱癌细胞GCV凋亡基因BAX表达胸苷激酶基因逆转录一聚合酶链反应
- 胸苷激酶基因系统联合大蒜素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究被引量：2
- 2005年
- 目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK) /更昔洛韦 (GCV)系统联合大蒜素对膀胱癌细胞的协同杀伤效应及对细胞凋亡的影响。方法 通过脂质体将胸苷激酶 (TK)基因转入膀胱癌BIU87细胞构建BIU87TK细胞,观察GCV(1mg/L)、大蒜素(5mg/L)及GCV+大蒜素(浓度同前)共同作用对BIU87TK细胞形态学、细胞凋亡率及细胞周期变化的影响,检测bcl 2、bax、半胱天冬蛋白酶(caspase 3)表达变化及caspase 3活性变化。结果 药物作用 72h,GCV+大蒜素对BIU87TK细胞的抑制率为 72 50%,高于GCV作用后的 35 00%和大蒜素作用后的 37 00%,二者可发挥协同抑瘤作用; (F=6 46,P<0 05)。GCV+大蒜素联合作用前期凋亡率高于单独作用细胞,细胞周期阻滞在S和G2 期,与单独作用比较阻滞时效提前;二者可抑制bcl 2表达并可促进caspase 3表达及活化。结论 HSV TK/GCV系统联合大蒜素可通过共同诱导凋亡发挥协同作用,抑制膀胱癌细胞生长。细胞周期阻滞,相关凋亡基因表达及活性的变化可能发挥了重要的作用。
- 丘少鹏毛晓鹏曹开源陈贤景袁广卿徐霖黄小荣
- 关键词：联合用药大蒜素膀胱癌细胞凋亡
- IIF法检测血清抗cmDNA抗体诊断SLE价值的系统评价被引量：1
- 2010年
- 目的评价间接免疫荧光法（IIF）检测血清中抗细胞膜DNA（cmDNA）抗体诊断系统性红斑狼疮（SLE）的价值。方法检索1970—2009年PubMed、中国期刊全文数据库，检索词为：系统性红斑狼疮、SLE、自身抗体、细胞膜DNA，收集关于抗cmDNA抗体诊断SLE价值的相关研究文献，根据Whiting等制定的QUADAS文献质量评价工具对文献进行质量评价，使用MetaDisc1．4进行异质性分析、Meta分析及绘制SROC曲线。结果共纳入文献7篇，合计2447例，其中经金标准确认的SLE患者共824例。Meta分析异质性检验辟0．0009，F=73．5％；合并敏感度为69．0％，95％CI为66．0％～72．0％；合并特异度为97．0％，95％CI为96．0％-98．0％；合并阳性似然比＋LR=21．37，95％CI为12．17—37．54；合并阴性似然比-LR=0．28，95％CI为0．18～0．45；SROC曲线下面积AUC=0．9336（SE=0．0607）。结论目前间接免疫荧光法检测血清中抗cmDNA抗体诊断SLE有一定的价值，可作为诊断SLE的特异性指标。
- 卢妙莲李银珍王建兵柯培锋黄宪章
- 关键词：系统性红斑狼疮
- 完整人抗-D抗体分子表达载体的构建被引量：1
- 2006年
- 目的构建含完整人抗-D抗体重、轻链基因的表达载体,为体外表达完整的抗-D抗体分子打下基础。方法从1株分泌IgM抗-D的细胞株提取总RNA,以随机引物逆转录成cDNA,用所设计的抗体前导区引物进行扩增,克隆、测序后将抗-D抗体重、轻链可变区基因分别和带有人IgG1恒定区和к轻链恒定区的表达载体连接,转化大肠杆菌后提取质粒DNA,用PCR和酶切进行鉴定。结果序列分析发现所扩增的基因符合人Ig的特征,除引导序列外,其余序列和我们以前所发表的Fab段序列一致,PCR和酶切鉴定抗体重、轻可变区基因克隆成功。结论成功地扩增了带引导序列的抗-D抗体可变区基因,并构建了完整人抗-D抗体分子表达载体。
- 付涌水江朝富曹开源李树浓
- 关键词：抗-D抗体
- 免疫散射比浊法测定免疫球蛋白的分析性能验证与评价被引量：8
- 2009年
- 徐建华黄宪章庄俊华于明路柯培锋孙蕾
- 关键词：性能评价免疫球蛋白免疫散射比浊法
- 硼酸盐亲和与离子交换层析法检测HbA1C的比较
- 2009年
- 血红蛋白A1c（hemoglobin A1c，HbA1c）是血红蛋白色谱分离中的一种成分。在健康人血液中，RBC平均寿命（120d）一半时段中所测得的平均血糖浓度与HbA1c最吻合^[1]，因此可反映糖尿病治疗中近期血糖水平的控制情况。作为糖尿病血糖水平控制的一个观察指标，
- 邓家德凌艳英张锦华臧宁周小棉
- 关键词：HBA1C硼酸盐糖尿病治疗亲和血红蛋白
- 前列腺特异膜抗原基因的克隆和真核表达
- 2005年
- 【目的】克隆前列腺特异膜抗原(PSMA)基因的编码区序列,并进行真核表达。【方法】用 RT-PCR 方法扩增前列腺癌组织标本中的 PSMA cDNA 序列,并将其克隆至真核表达载体 pcDNA3.0。用脂质体转染法,把 pcDNA3.0-PSMA 转染哺乳动物细胞,鉴定 PSMA 蛋白的表达。【结果】序列测定结果表明,两条引物之间的片段长度为2279bp,与预期长度一致。将克隆的编码区序列与 GenBank 的 PSMA 序列进行 Blast 对比分析,同源性为99.7%;间接免疫荧光法显示表达的蛋白质为膜蛋白,免疫印迹表明表达蛋白质的相对分子质量为100ku。【结论】成功扩增了 PSMA 编码区序列,构建了 PSMA 真核表达载体,建立了 PSMA 稳定表达的细胞株。经免疫分析,证实了真核细胞内表达的 PSMA 为分子质量正确的膜蛋白,且具有良好的抗原性。所获得的 PSMA 真核表达系统为进一步研究 PSMA 基因修饰的 DCs 疫苗对前列腺癌的治疗提供了物质基础。
- 戴淑琴王军业曹开源徐霖袁广卿
- 关键词：前列腺特异膜抗原真核表达
- 革兰阴性杆菌中16S rRNA甲基化酶和aac（6’）-Ib-cr基因的检测被引量：5
- 2010年
- 细菌对氨基糖苷类抗生素耐药机制研究以往主要集中在细菌产生的氨基糖苷类修饰酶。氨基糖苷类抗生素通过与细菌30S核糖体的16S rRNA亚单位结合，干扰蛋白质合成从而抑制细菌生长。然而，研究发现一种16S rRNA甲基化酶，能保护细菌的16SrRNA，使细菌对几乎所有氨基糖苷类抗生素高水平耐药，其MIC往往高达512—1024μg／ml。armA、rmtA、rmtB、rmtC和rmtD是5种主要的甲基化酶基因，
- 杨银梅陈晓文张伟红陈灿华叶惠芬陈惠玲
- 关键词：革兰阴性杆菌酶基因氨基糖苷类抗生素抑制细菌生长氨基糖苷类修饰酶
