郑州大学基础医学院干细胞研究中心
- 作品数：13 被引量：49H指数：3
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- 人骨髓间充质干细胞分化神经元样细胞表达单胺类受体mRNA被引量：1
- 2009年
- 目的检测体外人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)经DMSO/BHA联合诱导后所分化的神经元样细胞表达单胺类受体基因的状况,以探讨体外诱导hMSCs向神经元样细胞分化的条件和机制。方法采用密度梯度离心法和贴壁培养的方法分离纯化hMSCs,DMSO/BHA联合诱导分化,免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶(neurone specific enolase,NSE)的表达,RT-PCR检测5-HT2受体和多巴胺2受体(DRD2)mRNA。结果分离纯化的hMSCs加入诱导剂后,hMSCs形成多极神经元的形态;免疫组化结果显示NSE蛋白表达阳性;RT-PCR结果显示诱导后细胞表达5-HT2受体的mRNA,而不表达DRD2的mRNA。结论DMSO/BHA可诱导hMSCs表达5-HT受体基因,但不表达DRD2受体基因。
- 段萍许燕吴素霞韩雪飞鄢文海邢莹
- 关键词：分化神经细胞5-HT受体
- 神经受体在人骨髓源性神经细胞上的表达
- 2011年
- 目的:检测神经受体在人骨髓源性神经细胞上的表达,探讨人骨髓间充质干细胞(hBMSC)体外诱导分化为神经细胞的方法及人骨髓源性神经细胞的功能特征。方法:分离纯化hBMSC,流式细胞仪检测CD34、CD45、CD44、CD117在hBMSC上的表达;应用DMSO/BHA/FSK/BDNF联合诱导hBMSC向神经细胞分化;免疫细胞化学染色检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)和多巴胺D2受体(DRD2)的表达;RT-PCR检测DRD2、γ-氨基丁酸A(GABAA)受体-α2亚基、5-羟色胺2(5-HT2)受体mRNA的表达。结果:流式细胞仪检测显示hBMSC的间充质干细胞相对特异性抗原CD44、CD117表达阳性,造血干细胞特异性抗原CD34、CD45表达阴性;hBMSC经DMSO/BHA/FSK/BDNF诱导培养3d后,免疫细胞化学染色结果显示有NSE、DRD2阳性细胞;RT-PCR检测结果显示DRD2、GABAA受体-α2亚基、5-HT2受体的mRNA表达阳性。结论:hBMSC经DMSO/BHA/FSK/BDNF诱导可分化为神经细胞,并表达DRD2等多种神经受体,有望成为应用细胞移植治疗神经精神性疾病的理想细胞来源。
- 吴素霞柴立辉鄢文海邢莹
- 关键词：骨髓间充质干细胞分化神经细胞神经受体
- 人骨髓间充质干细胞分化神经元样细胞转录GABA受体mRNA被引量：5
- 2008年
- 许燕段萍吴素霞韩雪飞鄢文海邢莹
- 关键词：受体MRNA干细胞分化GABA神经元样氨基酸类神经递质
- 体外诱导人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元分化的研究被引量：6
- 2007年
- 通过体外诱导人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs)向多巴胺(dopamine,DA)神经元分化,探讨人BMSCs来源的DA神经元的功能特征及其分化机制,为临床上细胞移植替代治疗诸如帕金森氏病(parkinson’sdisease,PD)等神经精神性疾病提供一种理想的细胞来源。通过密度梯度离心获取人骨髓中的单个核细胞,贴壁培养纯化BMSCs。50μmol/L脑源性神经营养因子(brain derivedneurotrophy factor,BDNF),10μmol/Lforskolin(FSK)和10μmol/LDA联合对BMSCs进行诱导。电子显微镜观察诱导2周后细胞是否具有神经元的超微结构特点;免疫细胞化学染色和RT-PCR检测DA神经元分化过程中的标志物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达以及转录因子Nurr1、Ptx3和Lmx1b的表达;高效液相色谱(highperformance liquid chromatogram,HPLC)检测诱导2周后的细胞多巴胺的释放水平。结果表明,诱导2周后,电镜下细胞胞浆中有大量密集的呈扁平囊状的粗面内质网及其间的一些游离核糖体以及神经微丝的形成。RT-PCR结果显示NSE(neuron specificenolase)、Nurr1、Ptx3、Lmx1b和TH的mRNA均有表达;免疫细胞化学染色结果表明诱导2周后TH阳性细胞(24·80±3·36)%的表达较诱导3d后(3·77±1·77)%明显提高(P<0·01);HPLC检测到诱导2周后的细胞DA释放水平[(1·22±0·36)μg/mL(n=6)]高于未经诱导的细胞[(0·75±0·22)μg/mL(n=6)(t=-2·79,P=0·038)]。由此得出,BDNF、FSK和DA可以在体外诱导人BMSCs向DA神经元分化,并具有DA神经元的功能特征,是临床用于治疗神经精神性疾病的理想细胞来源。
- 柴立辉吴素霞鄢文海马远方
- 关键词：骨髓间充质干细胞分化多巴胺神经元脑源性神经营养因子
- 人参皂苷Rb1对β-淀粉样蛋白25-35诱导神经干细胞分化过程中Tau蛋白过度磷酸化的影响
- 2012年
- 背景:前期研究发现,人参皂苷Rb1和β-淀粉样蛋白25-35可调节神经干细胞分化过程中Tau蛋白的磷酸化水平。蛋白磷酸酯酶2A与Tau蛋白过度磷酸化密切相关。目的:观察β-淀粉样蛋白25-35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中Tau蛋白磷酸化水平和蛋白磷酸酯酶2A活性的影响。方法:分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3代神经干细胞分化1周后分组:①空白组:不加其他处理因素继续培养36h。②β-淀粉样蛋白组:培养24h后,加入β-淀粉样蛋白25-35继续培养12h。③预处理组:先加入人参皂苷Rb1预处理24h,再加入β-淀粉样蛋白25-35继续培养12h。分别采用免疫荧光细胞化学法和western-blot法检测各组细胞Tau[pS396]、Tau[pS262]表达以及蛋白磷酸酯酶2A活性。结果与结论:正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396]和Tau[pS262]的表达;β-淀粉样蛋白组细胞的Tau[pS396]和Tau[pS262]表达上调,蛋白磷酸酯酶2A活性无明显变化;预处理组Tau[pS396]和Tau[pS262]表达下调且蛋白磷酸酯酶2A活性显著增强。提示正常神经干细胞分化过程中Tau蛋白表达一定程度的磷酸化水平,人参皂苷Rb1可通过提高蛋白磷酸酯酶2A活性来减轻β-淀粉样蛋白25-35诱导的神经干细胞分化过程中Tau蛋白过度磷酸化。
- 赵庆霞李冰华韩雪飞许燕吴国华
- 关键词：人参皂苷RB1Β-淀粉样蛋白25-35神经干细胞TAU蛋白磷酸化
- 人参皂苷Rb1减轻Aβ_(25～35)所致新生神经细胞损伤被引量：3
- 2010年
- 目的研究β-淀粉样蛋白（Aβ）诱导新生大鼠神经细胞中蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶系统失衡及人参皂苷Rb1对此作用的干预效应。方法从新生大鼠海马分离神经干细胞（NSCs）体外培养,诱导分化7 d后收获新生神经细胞,分3组：Aβ25~35组的培养基中加入20μmol/L Aβ25~35处理12 h;Rb1＋Aβ25~35组先在含10μmol/L Rb1的培养基中预处理24 h后,再用20μmol/L Aβ25~35处理12 h;对照组不加任何其他处理因素。RT-PCR和免疫细胞化学法检测各组新生神经元的蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶和磷酸化Tau蛋白的表达。结果Aβ25~35处理组与对照组相比,糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）和细胞周期蛋白依赖性激酶5（CDK-5）的mRNA表达增加,蛋白磷酸酶2A（PP2A）的mRNA表达减少;荧光显微镜下,活化型GSK-3β（pY279,216）表达增加,PP2A表达降低;微管相关蛋白Tau（pS396）和Tau（pS262）的阳性细胞率明显增高。Rb1预处理可以显著降低Aβ25~35引起的上述蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶和Tau改变。结论Aβ25~35诱导体外分化的新生大鼠神经细胞的蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶系统失衡和Tau蛋白过度磷酸化,人参皂苷Rb1可减轻Aβ25~35引起的上述作用。
- 段萍邢孟韬许燕韩雪飞李博赵庆霞鄢文海
- 关键词：新生神经元人参皂甙RB1淀粉样蛋白TAU
- Aβ_(25～35)和人参皂苷Rb1对鼠神经干细胞分化后GSK-3β、CDK-5和PP2A表达的影响被引量：3
- 2010年
- 目的:研究大鼠神经干细胞诱导分化后GSK-3β、CDK-5和PP2A的表达以及Aβ25～35和人参皂苷Rb1的调节作用。方法:取新生SD大鼠的海马组织体外培养获得NSCs,诱导第3代的NSCs向神经细胞分化1周后,免疫荧光细胞化学染色检测活化型GSK-3β(pTyr279,216)和蛋白磷酸酯酶-2A(PP2A)的表达及Aβ25～35和人参皂苷Rb1对它们的影响;RT-PCR分析糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、细胞周期依赖性蛋白激酶-5(CDK-5)和蛋白磷酸酯酶-2A(PP2A)的mRNA表达以及Aβ25～35和人参皂苷Rb1的影响。结果:免疫荧光细胞化学染色显示:NSCs诱导分化1周后有活化型GSK-3β(pTyr279,216)和PP2A的表达,Aβ25～35能增强GSK-3β(pTyr279,216)的表达同时抑制PP2A的表达,而人参皂苷Rb1则能逆转Aβ25～35的作用;RT-PCR检测发现:NSCs诱导分化1周后表达GSK-3β、CDK-5和PP2A的mRNA,使用Aβ25～35处理后GSK-3β、CDK-5的表达增强而PP2A的表达减弱,用人参皂苷Rb1预处理神经干细胞后Aβ25～35的作用受到抑制。结论:体外培养的神经干细胞分化后表达GSK-3β、CDK-5和PP2A,并受Aβ25～35和人参皂苷Rb1的调节,提示在体外由神经干细胞分化的细胞具备正常神经细胞的蛋白磷酸化调节系统。
- 赵庆霞鄢文海韩雪飞许燕邢莹
- 关键词：NSCSGSK-3Β人参皂苷RB1AΒ25~35
- 4.1蛋白家族在大鼠大脑皮质神经细胞中的表达和定位
- 2010年
- 背景:研究发现不同组织和细胞表达的4.1蛋白种类和剪切形式差别很大,不同4.1蛋白的不同结构域和细胞定位与其功能有必然的联系。目的:观察4.1蛋白家族中4.1R,4.1N,4.1G和4.1B在大鼠大脑皮质神经细胞中的mRNA和蛋白表达和细胞定位。方法:用RT-PCR,Western blot和免疫细胞化学染色及激光扫描共聚焦显微镜技术检测4.1蛋白家族在新生SD大鼠大脑皮质神经细胞中的mRNA和蛋白表达和在细胞中的定位。从细胞水平分析4.1蛋白家族中4.1R,4.1N,4.1G和4.1B的细胞内表达和定位的差异。结果与结论:4.1蛋白家族mRNA和蛋白在大鼠大脑皮质神经细胞均有所表达。4.1R主要表达在神经细胞胞膜和胞浆中,特别是突起延伸或轴突延伸部位高表达。4.1G主要表达在神经细胞的胞浆中,尤其是突起部位。4.1N主要表达在突起胞浆和胞膜。4.1B主要表达在胞体部位的胞浆和胞膜中。结果提示,4.1R,4.1G,4.1N和4.1B蛋白在体外培养的皮质神经细胞中均有不同程度的表达,并且在细胞内定位不同。
- 车淑琴刘素芳韩雪飞鄢文海赵天春段萍邢莹
- 关键词：神经细胞大脑皮质基因表达
- 大鼠精原干细胞的分离纯化被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨分离纯化大鼠精原干细胞(SSCs)的方法。方法:取大鼠睾丸组织,通过①机械法+两步酶法,②机械法+两步酶法+Percoll分离法,③机械法+两步酶法+Percoll分离法+差速贴壁法得到细胞悬液,进行培养观察。采用免疫组织化学方法鉴定,台盼蓝排斥实验及流式细胞仪分别检测细胞活率与纯度。结果:①、②、③法所得细胞为SSCs,所得SSCs活率分别为(93.26±1.06)%,(93.50±0.85)%和(94.73±0.82)%,差异无统计学意义(P>0.05);①、②、③法所得SSCs纯度呈增高趋势(P<0.05)。结论:3种方法在分离纯化过程中对SSCs活率的影响无明显差异。①法能够分离出较高纯度的SSCs,结合Percoll分离法能够使SSCs纯度提高,再结合差速贴壁法能够进一步富集SSCs。
- 张卫星韩广业王瑞李松韩雪飞
- 关键词：精原干细胞纯化
- 人骨髓源性神经样细胞的形态及超微结构被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨人骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSC)分化形成的神经样细胞的形态及结构特征。方法:采用密度梯度离心法和贴壁培养的方法分离纯化人BMSC,流式细胞仪检测CD34、CD45、CD44等细胞表面抗原在BMSC上的表达。联合应用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growthfactor,bFGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、二甲基亚枫(di methyl sulphoxide,DMSO)和丁羟基茴香醚(butylhydroxy anisol,BHA)诱导人BMSC向神经细胞分化。光学显微镜下观察细胞的形态变化;甲苯胺蓝染色法对分化后细胞进行尼氏体染色;透射电子显微镜观察分化后细胞的超微结构特点。结果:分离纯化的人BMSC经流式细胞仪检测显示间充质干细胞相对特异性抗原CD44表达阳性,造血干细胞特异性抗原CD34、CD45表达阴性;加入诱导培养基培养2周后,细胞胞体变圆,折光性增强,有突起形成;甲苯胺蓝染色法显示分化后的细胞尼氏体染色阳性;透射电镜下细胞胞浆中有大量密集的呈扁平囊状的粗面内质网及其间的一些游离核糖体和多聚核糖体所组成的尼氏体的超微结构,并有神经微丝的形成。结论:EGF/bFGF/DMSO/BHA诱导人BMSC分化形成的神经样细胞能够表达成熟神经细胞典型的形态及超微结构特征。
- 柴立辉程相树吴素霞陈宗德鄢文海邢莹
- 关键词：人骨髓间充质干细胞尼氏体超微结构
