浙江大学医学院病原生物学系
- 作品数：160 被引量：439H指数：9
- 相关作者：林旭瑷周俊罗依惠方佳琪金蕾更多>>
- 相关机构：绍兴文理学院医学院金华职业技术学院医学院杭州医学院基础医学与法医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 钩端螺旋体groEL基因原核表达及其产物免疫保护作用被引量：4
- 2013年
- 目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株groEL基因原核重组表达系统,了解重组表达的GroEL蛋白(rGroEL)对金地鼠的免疫保护作用。方法:采用高保真PCR扩增问号钩体赖株groEL基因并测序,常规方法构建groEL基因原核表达系统。采用SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图像分析系统检查rGroEL表达情况及其可溶性,Ni-NTA亲和层析法提纯rGroEL。观察rGroEL免疫金地鼠对问号钩体赖株感染的保护率。采用MAT法检测免疫动物血清与我国流行问号钩体血清群交叉凝集效价。结果:所克隆的groEL基因核苷酸和氨基酸序列与GenBank中相应基因完全相同。所构建的groEL基因原核表达系统能表达可溶性rGroEL。100和200μgrGroEL对金地鼠的免疫保护率分别为50.0%和75.0%。rGroEL免疫金地鼠血清可不同程度地凝集各问号钩体血清群。结论:GroEL蛋白是问号钩体属特异性保护性抗原,可用于制备通用性钩体基因工程疫苗。
- 李小余王银环严杰程东庆
- 关键词：问号钩端螺旋体原核表达免疫保护
- 甲型副伤寒杆菌pagC基因分布及其重组表达产物免疫保护作用被引量：4
- 2013年
- 目的:了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性,确定甲型副伤寒沙门菌pagC基因原核重组表达产物rPagC免疫原性和保护作用。方法:采用PCR及其产物测序了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性。构建甲型副伤寒沙门菌pagC基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯表达的rPagC。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测rPagC表达情况及其产量。采用免疫扩散法、ELISA和Western Blot鉴定其抗原性和免疫反应性。采用小鼠感染模型了解rPagC对甲型副伤寒杆菌感染的免疫保护效果,微量肥达试验检测rPagC免疫小鼠血清凝集伤寒和副伤寒沙门菌的效果。结果:所有被检测的甲型副伤寒沙门菌临床菌株均携带pagC基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达99.1%～100%和98.4%～100%。所构建的原核表达系统能高效表达rPagC。rPagC免疫家兔可产生高效价抗体并能与甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号。ELISA结果显示,97.1%(66/68)甲型副伤寒患者血清标本rPagC抗体阳性。100μg和200μg rPagC对感染小鼠的免疫保护率分别为73.3%(11/15)和86.7%(13/15)。rPagC免疫小鼠血清对甲型副伤寒沙门菌和伤寒沙门菌H抗原凝集效价高达1∶10～1∶40。结论:pagC基因在甲型副伤寒沙门菌株中分布广泛。rPagC有良好的免疫原性及较强的免疫保护作用,可作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原。
- 张佳范欣丽葛玉梅严杰孙爱华
- 关键词：免疫保护性
- 甲型副伤寒沙门菌spaO—ompA融合基因构建及其表达产物免疫保护作用
- 2012年
- 目的构建甲型副伤寒沙门菌spaO—ompA融合基因及其原核表达系统，确定重组表达产物rSpaO—OmpA免疫保护作用。方法采用柔性肽序列连接spaO与ompA基因，构建spaO-ompA人工融合基因及其原核表达系统。采用SDS-PAGE和Bio—Rad凝胶图像分析系统检测目的重组表达产物rSpaO—OmpA表达情况及其产量。采用免疫扩散法、微量肥达和Westernblot法鉴定rSpaO—OmpA抗原性和免疫反应性。采用小鼠感染模型了解rSpaO—OmpA对甲型副伤寒沙门菌致死性感染的免疫保护作用，实验中采用重组表达的SpaO（rSpaO）及OmpA（rOmpA）作为对照。结果所构建的spaO-ompA融合基因与spaO或ompA单基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％。所构建的原核表达系统EcoliBk21DE3pET42a-spaO-ompA能高效表达重组融合蛋白rSpaO-OmpA。rSpaO-OmpA能与甲型副伤寒沙门菌全菌抗血清结合并产生阳性杂交信号，免疫家兔后可产生特异性抗体。100汕g或2006xgrSpaO—OmpA对甲型副伤寒沙门菌感染小鼠的免疫保护率分别为66．7％（8／12）和83．3％（10／12），明显高于等量rSpaO及rOmpA（P〈0．05）。rSpaO—OmpA免疫小鼠血清与不同副伤寒沙门菌H抗原的凝集效价为1：5～1：40、与rSpaO和rOmpA及rSpaO—OmpA免疫双扩散效价为1：1～1：16。结论人工融合重组抗原rSpaO—OmpA免疫原性和免疫保护作用较等量rSpaO或rOmpA更强。
- 蒋锦琴孙一帆岳文燕严杰阮萍
- 关键词：甲型副伤寒沙门菌免疫保护性
- 钩端螺旋体外膜蛋白 Loa22优势 T-B联合抗原表位及其免疫原性研究被引量：1
- 2015年
- 目的：筛选并鉴定致病性问号钩端螺旋体（简称钩体）外膜蛋白Loa22优势T细胞和B细胞（ T／B）联合抗原表位及其免疫原性。方法采用PCR检测我国流行的8群8型株问号钩体loa22基因，T-A克隆后测序。构建问号钩体黄疸出血群赖型赖株loa22基因原核表达系统。 Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的重组蛋白rLoa22并制备其兔抗血清及其IgG。采用生物信息学软件预测Loa22的T-B联合抗原表位。采用噬菌体展示联合Western blot法、ELISA分别检测重组噬菌体PⅢ蛋白展示的T-B联合表位肽和人工合成T-B联合表位肽的免疫原性。采用MTS法和ELISA分别检测T-B联合表位肽诱导T细胞活化及其分泌IL-2、IL-4和IFN-γ情况。结果所有受检的致病性钩体株均能检出loa22基因，其核苷酸和氨基酸序列相似性高达85．5％～99．8％和93．9％～99．5％。所构建的loa22基因原核表达系统能高效表达rLoa22。 Loa22-77、Loa22-90、Loa22-125和Loa22-157这4个T-B联合抗原表位中，仅有Loa22-90显示了很强的Western blot阳性条带。 Loa22-90能有效诱导CD4＋T细胞增殖及IL-2（Th1）和IL-4（Th2）水平显著升高（P＜0．05）。结论 Loa22是问号钩体序列保守的属特异性外膜蛋白抗原，其优势T-B联合抗原表位为Loa22-90，该表位可作为钩端螺旋体多抗原肽疫苗的候选表位。
- 阮萍赵金方李阳严杰胡玮琳
- 关键词：钩端螺旋体外膜蛋白免疫原性
- 长期HAART治疗对HIV-1感染者免疫重建作用研究
- 目的对HIV-1感染者长达7年以上的HAART治疗,探讨长期HAART治疗对患者免疫重建的作用。方法采用流式细胞术检测长期HAART治疗患者(>7年)、未治疗患者及正常健康者外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞、HLAD...
- 冯磊严杰寿春晖靳昌忠吴南屏金元昊NorbertBrockmeyer
- 关键词：HIV-1感染者免疫重建
- 文献传递
- 钩端螺旋体毒性蛋白VapC核酸酶活性及其对宿主细胞毒性作用的研究被引量：1
- 2012年
- 目的了解钩端螺旋体毒素一抗毒素系统中毒性蛋白VapC的功能及其对宿主细胞的毒性作用。方法以致病性问号钩体黄疸出血群赖型赖株基因组DNA为模板，采用PCR扩增全长vapB、vapC、vapBC基因并构建其原核表达系统。采用SDS—PAGE检测目的重组蛋白rYapB和rVapC表达情况，Ni-NTA亲和层析柱提纯rVapB和rVapC。检测rVapB和rVapC有无水解问号钩体赖株及THP．1细胞DNA或RNA活性。分别采用实时荧光定量PCR和Westernblot试验，检测问号钩体赖株感染THP．1细胞前后vapB和vapC基因转录及表达水平的变化。构建vapB和vapC基因真核表达载体并转染细胞，采用CCK-8试剂检测VapB和VapC蛋白对细胞活性的影响。结果所克隆的vapB和vapC基因核苷酸及氨基酸序列与文献报道完全相同。所构建的原核表达系统能分别表达rVapB和rVapC。rVapC可水解RNA，但不水解DNA。问号钩体赖株感染THP-1细胞后，vapB和vapC基因转录及表达水平均显著上调，部分毒性蛋白VapC外分泌。转染vapC基因的人肾小管上皮细胞HEK293大量死亡。结论问号钩体赖株VapC蛋白为RNA酶，可在感染宿主细胞过程中外分泌并对细胞有明显毒性。
- 辛晓阳林旭瑷李立伟严杰
- 关键词：致病性钩端螺旋体毒素-抗毒素系统细胞毒性
- 利巴韦林对呼吸道合胞病毒感染诱导宿主细胞凋亡及相关基因表达的影响
- 呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)主要引起婴幼儿毛细支气管炎和肺炎,是婴儿和儿童呼吸道疾病中的最常见的病原体之一。尤其是早产儿、先天性心脏病患儿、免疫缺陷的婴儿和儿童易发生严...
- 彭慧琴钱景陶君
- 关键词：利巴韦林宿主细胞RSV呼吸道合胞病毒感染基因表达
- 文献传递
- HAART治疗的儿童艾滋病患者CD8+T细胞活化分子CD38和HLA-DR水平研究
- 目的：观察HAART治疗对我国儿童艾滋病患者CD8+T细胞活化标志分子CD38和HLA-DR表达水平的影响及其与病情进展的关系.方法：对194例接受HAART治疗的儿童艾滋病患者进行横断面研究研究,用流式细胞术检测CD4...
- 靳昌忠谢天胜程林芳冯婷婷李杰方美新吴南屏冯磊吴丽娟
- 关键词：儿童患者抗病毒治疗
- 文献传递
- 甲型副伤寒沙门菌ompN基因原核表达系统构建及其产物免疫保护作用被引量：1
- 2015年
- 目的了解甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白ompN基因携带率及其重组表达产物抗原性和免疫保护作用。方法采用PCR扩增甲型副伤寒沙门菌参考标准株50001及126株临床菌株ompN基因并测序。构建ompN基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提取目的重组蛋白rOmpN。采用家兔免疫法和ELISA检测rOmpN免疫原性。微量肥达试验和激光共聚焦显微镜法分别检测OmpN在甲型副伤寒沙门菌株中表达率及其膜定位。采用小鼠感染模型了解rOmpN对甲型副伤寒沙门菌致死性感染的免疫保护作用。结果所有甲型副伤寒沙门菌株中均扩增出全长ompN基因片段,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达98.6%~99.9%和98.7%~100%。OmpN是甲型副伤寒沙门菌跨膜蛋白。ompN基因表达系统能表达rOmpN,免疫家兔后能产生高效价抗血清。98.2%（55/56）甲型副伤寒病人血清标本中rOmpN-IgG阳性,rOmpN兔抗血清能有效凝集甲型副伤寒沙门菌。100和200μg rOmpN对感染小鼠的免疫保护率分别为60.0%（9/15）和73.3%（11/15）。结论甲型副伤寒沙门菌ompN基因分布广泛且序列保守,rOmpN有较强的抗原性和免疫保护作用。
- 金蕾孙爱华胡玮琳葛玉梅林旭瑷
- 关键词：甲型副伤寒沙门菌抗原性免疫保护性
- 病原菌感染性应激与毒力
- 严杰
