南方医科大学生物技术学院生物技术系暨分子免疫学研究所 作品数:69 被引量:290 H指数:9 相关作者: 邹红云 李祖国 罗薇 胡志民 黄永塔 更多>> 相关机构: 华南理工大学生物科学与工程学院 华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室 华东理工大学生物工程学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 化学工程 轻工技术与工程 更多>>
预刺激淋巴细胞的伸瘤运动 2005年 目的对淋巴细胞的伸瘤现象进行描述,并探讨伸瘤的一些影响因素及伸瘤运动与淋巴细胞功能的关系。方法分离外周血淋巴细胞,用PHA、IL-2、a-CD3、PHA+IL-2预刺激后与口腔上皮癌细胞混合作用。于倒置显微镜下直接观察淋巴细胞的粘(伸)瘤情况;取混合细胞经冷丙酮固定并Gimasa染色后在镜下观察淋巴细胞与瘤细胞作用情况,并于1、2、4、6h,取混合淋巴细胞于扫描电镜下观察伸瘤运动的发生、发展变化。结果与未预刺激组比较,PHA组能提高粘瘤指数,IL-2、a-CD3、PHA+IL-2均能提高淋巴细胞的粘(伸)瘤指数,以PHA+IL-2对粘(伸)瘤率的提高作用最为显著,电镜下发现在粘(伸)瘤运动过程中,外周血淋巴细胞的形态也发生变化。结论淋巴细胞预刺激能促进伸瘤运动的发生,伸瘤运动可能是淋巴细胞的一种杀伤方式。 杨介钻 马骊 何小维 周明乾 胡志明 王小宁关键词:淋巴细胞 预刺激 扫描电镜 TCRαβ T细胞CDR3谱系分析在移植免疫中的应用 被引量:1 2009年 分析T细胞CDR3区基因长度和序列(CDR3谱系分析)可确切了解T细胞亚家族的克隆扩增情况,筛选出与排斥反应、耐受状态的建立和移植并发症相关的克隆性T细胞。目前,CDR3谱系分析已应用于移植免疫研究,包括造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)和器官移植,成为检测受者特异T细胞克隆的一种有效工具。本综述主要介绍CDR3谱系分析在评价移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)、受者免疫重建和疾病诊断方面的作用。 王梦川 罗微 马骊关键词:T细胞受体 造血干细胞移植 移植物抗宿主病 T细胞交叉反应性研究进展 被引量:4 2015年 T淋巴细胞是免疫系统的重要成分,执行特异性细胞免疫应答,在感染、肿瘤以及自身免疫病的免疫过程中发挥着至关重要的作用。初始T细胞通过其细胞膜表面的T细胞受体(Tcellreceptor,TCR)与抗原提呈细胞(antigenpresentingcell,APC)表面的抗原肽-主要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex,MHC)复合物特异结合后,在其他辅助因素作用下,活化、增殖并分化为效应T细胞,进而完成对抗原的清除,以及对免疫应答的调节。 周超颖 马骊关键词:T细胞受体 交叉反应性 特异性细胞免疫应答 主要组织相容性复合体 抗原提呈细胞 初始T细胞 外周T细胞TCR基因的重排(编辑/修正)与选择 被引量:9 2005年 T细胞在胸腺发育过程中,TCR通过VDJC基因重排(rearrangement)和选择(细胞水平选择或克隆选择,cellorclonalselection),而组成了外周多样性的T细胞库。现证实外周的T细胞存在着TCR的第二次重排(编辑/修正,editing/revision)与选择(受体水平或分子水平的选择,receptorormolecularselection),即外周的T细胞能重新开放RAG酶等进行VDJC基因的重新编排,修正原来的TCR或产生全新的TCR,再一次选择成为产生耐受或特异应答的新的T细胞,这种机制在外周T细胞库的扩展、自身免疫病、T细胞的外周耐受、肿瘤和感染、免疫缺陷和移植等免疫应答机制中发挥重要作用。 姚新生 王小宁关键词:TCR 肿瘤 自身免疫病 T细胞激活剂对Jurkat细胞重组激活基因表达的影响 被引量:2 2006年 目的:研究T细胞激活剂PHA,抗CD3mAb,PMA+A23187对人T细胞白血病细胞株Jurkat重组激活基因(RAGs)mRNA表达水平的影响.方法:采用RTPCR法检测不同T细胞激活剂作用不同时间后Jurkat细胞中RAG1,RAG2mRNA,以β肌动蛋白(βactin)的表达作为内参照进行灰度分析,比较不同组Jurkat细胞RAGsmRNA的表达水平.结果:三种T细胞激活剂刺激诱导的Jurkat细胞RAG1mRNA表达量明显低于对照组(P<0.05),且RAG1mRNA表达量的下降与刺激诱导作用时间有关;PHA刺激诱导后RAG2表达量显著低于对照组(P<0.05);PMA+A23187刺激诱导6,12h均未检测出RAG2mRNA的表达;而抗CD3mAb作用12h组RAG2mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05).结论:Jurkat细胞同时表达RAG1,RAG2mRNA,并在一定诱导下RAGs表达量发生改变,因此有可能成为研究外周T细胞RAGs表达调节的一个潜在的细胞模型. 邹红云 马骊 姚新生 温茜 王小宁关键词:JURKAT细胞 逆转录聚合酶链反应 人T细胞白血病细胞株Jurkat的TCR基因重排 被引量:1 2006年 背景与目的:近年的一些体外实验研究发现,重组激活基因(recombi-nationactivatinggene)编码的RAG1与RAG2(recombinationactivatinggenes,RAGs)蛋白能够介导DNA链的转位(transposition)作用,因而,可能与淋巴系统肿瘤性疾病的发生有关,但迄今尚未有明确定论。我们在实验中发现,代表T细胞发育成熟阶段的人白血病细胞株Jurkat同时表达重组激活基因RAG1和RAG2,并且经适当诱导后有RAGs表达的变化。本研究旨在确证Jurkat细胞是否发生RAGs介导的T细胞受体(T-cellreceptor,TCR)基因重排。方法:采用巢式和半巢式PCR检测T细胞受体D!-J!之间的信号结合T细胞受体删除DNA环(signaljointT-cellreceptorexcisionDNAcircles,sjTRECs);连接介导的PCR(LM-PCR)法检测TCRβ链位点重排中间物-重组信号序列(recombinationsignalsequence,RSS)断点;RT-PCR法检测V(D)J重排第二阶段非同源末端连接(non-homologousendjoining,NHEJ)途径中的核心蛋白Ku70/Ku80及末端脱氧核苷酸转移酶(terminaldeoxynucleotidyltransferase,TdT)。结果:在Jurkat细胞DNA中检测到结合区具有多样性特征的TCRDβ2-Jβ2sjTRECs和RSS5′端和3′端断裂点,并检测到TdT、Ku70/Ku80的表达。结论:Jurkat细胞有TCR基因重排的发生。Jurkat细胞可能成为研究RAGs和TCR基因重排与T细胞淋巴瘤的一个潜在的细胞模型。 邹红云 马骊 罗微 王小宁关键词:白血病 JURKAT细胞 TCR基因重排 TNFα和VEGF在激素性股骨头坏死中的变化 被引量:21 2006年 [目的]通过应用马血清、激素作用新西兰兔,诱导激素性股骨头坏死动物模型,分析TNFα、VEGF在激素性股骨头坏死中的作用。[方法]将20只健康新西兰兔随机分成2组,每组10只。A组为模型组,每只用马血清10 m l/kg,经兔耳缘静脉注射,间隔2周,按5 m l/kg剂量连续2 d注射马血清各1次,间隔2周后,注射醋酸泼尼松龙,按7.5 mg/kg腹腔注射3次。B组:正常对照组。动物注射激素5周后,采血,应用ELISA法测血清中TNF-α浓度。处死模型组,标本进行常规组织病理学检查,免疫组化分析股骨头VEGF的表达。[结果]模型组兔血清TNF-α浓度明显高于正常组(P<0.01)。组织病理学检查显示:部分血管栓塞,骨髓腔内造血组织明显减少,免疫组化结果显示:骨细胞及骨髓组织VEGF表达明显减少。[结论]血清中TNF-α浓度升高及股骨头骨髓组织VEGF表达减少可能是激素性股骨头坏死发生的重要因素。 胡志明 王海彬 李祖国 周斌 王小宁关键词:股骨头坏死 肿瘤坏死因子 血管内皮生长因子 Let-7d表达质粒的构建及其对卵巢癌细胞高迁移率A2蛋白及ras蛋白表达的抑制作用 被引量:2 2012年 目的构建let-7d真核表达载体,研究let-7d对卵巢癌细胞生物学行为及蛋白表达的影响。方法根据let-7d序列设计合成microRNA片段,定向克隆到pcDNATM6.2GW/EmGFPmiR真核表达载体上,运用基因转染技术将其导入卵巢癌IGROV1细胞中,使let-7d基因过表达,以实时荧光定量PCR验证let-7d及高迁移率A2(HMGA2)基因的表达,并用Western blotting检测相关蛋白HMGA2的差异表达。以MTT绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡率,分析let-7d对IGROV1细胞增殖生长的影响。结果成功构建针对靶向let-7d的表达质粒,将表达质粒转染人卵巢癌IGROV1细胞后,明显下调HMGA2的表达水平,而下调ras蛋白的作用较弱,没有前者明显。细胞表型研究显示,抑制HMGA2表达可能改变该细胞的恶性表型,表现在细胞增殖能力明显下降,自发凋亡率明显增加等。结论 Let-7d通过对HMGA2的调控,在改变卵巢癌IGROV1细胞恶性表型方面可能起重要作用。 叶海燕 陈建国 黄小穗 郭爱林 郝佩佩关键词:LET-7 卵巢癌 RAS 小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的表达、纯化与鉴定 被引量:5 2006年 目的构建小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mGM-CSF)工程菌,通过摸索其变、复性和纯化条件,得到高纯度高比活的重组mGM-CSF蛋白。方法以本实验室构建的hIL-2/mGM-CSF融合蛋白表达载体为模板,PCR扩增mGM-CSF基因,克隆入pET-11c表达载体,转化BL21,构建BL21/pET-11c/mGM-CSF工程菌,用本所专利方法提取包涵体,在含低浓度盐酸胍的复性液中复性,采用镍离子亲和层析纯化。结果工程菌采用TH肉汤培养,32℃、0.1mmol/LIPTG双重诱导,表达量达菌体蛋白总量的60.6%。提取包涵体在含1.5mol/L盐酸胍的谷胱甘肽复性液中复性效果最好,比活达4.2×106U/mg。经过亲和层析一步纯化,目的蛋白纯度达95%,比活与标准品相当。结论构建了高效表达mGM-CSF的工程菌,建立了其复性和纯化工艺,为进一步研究DC、GM-CSF体内抗肿瘤功能奠定了基础,并可为IL-2/GM-CSF双功能分子的生物学功能研究提供对照。 温茜 马骊 苏瑾 罗微 王小宁关键词:纯化 系统性红斑狼疮患者外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移和序列鉴定 被引量:10 2006年 目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移,为SLE的免疫应答机制和个性化治疗研究提供基础。方法采用免疫扫描谱型分析技术,分析5例正常献血员的CDR3分布特征及5例SLE患者PBMC中T细胞TCRβ链CDR3的优势利用情况,对克隆性增生T细胞的CDR3区进行序列分析。结果5例正常献血员PBMCTCRBVCDR3谱型均呈高斯分布,5例活动型SLE患者24TCRBVCDR3家族均出现不同的优势表达,对单/寡克隆性增生T细胞β链CDR3区基因进行测序,证实存在不同的CDR3序列。结论SLE活动期外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达可能与SLE的免疫发病机理有关,特异应答的T细胞TCRCDR3序列的确定,将为SLE的发病机制研究和个性化治疗提供新的方法与手段。 罗微 马骊 姚新生 邹红云 温茜 阮光萍 王小宁关键词:T淋巴细胞受体 互补决定区3 基因扫描