本元正阳基因技术有限公司
- 作品数：21 被引量：50H指数：4
- 相关机构：北京出入境检验检疫局中国检验检疫科学研究院广州军区广州总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学化学工程更多>>
- 重组蛋白A基因及其表达产物的制备
- 本发明属于生物工程技术领域。本发明是将蛋白A的B结构域基因单体根据大肠杆菌密码子的偏爱性进行优化，构建六串体插入热诱导型大肠杆菌载体pBV220，构建了含有该基因的大肠杆菌表达载体及其转化的大肠杆菌DH5α重组株和利用此...
- 宫照龙何新舟曹晖许允立
- 文献传递
- 一种包装AAV2/5的重组单纯疱疹病毒的构建
- 2006年
- 为了得到一种可以包装AAV2/5和表达绿色荧光蛋白的重组单纯疱疹病毒,设计并构建了一个由AAV2rep基因和AAV5cap基因嵌合而成的rep2cap5基因,然后,利用一套携带HSV1基因组的粘粒系统(cos6、cos28、cos14、cos56、cos48),将rep2cap5基因插入cos6粘粒上HSV1基因组片段的UL2基因中,而将EGFP的表达单位插入cos56粘粒上HSV1基因组片段的UL44基因中,用这2个重组粘粒与其它3个粘粒(cos14、cos28、cos48)共转染BHK-21细胞获得了重组病毒HSV1-r2c5-EGFP并进行了空斑纯化。HSV1-r2c5-EGFP病毒能够在BHK-21细胞连续传代,并且可以观察到几乎所有的感染细胞都能产生绿色荧光。用PCR方法以及Southern杂交方法表明所获得的HSV1-r2c5-EGFP中携带有rep2cap5基因,用HSV1-r2c5-EGFP感染携带报告基因LacZ的AAV载体细胞株,获得了具有感染性的重组AAV2/5-LacZ。结果表明,所获得的重组单纯疱疹病毒HSV1-r2c5-EGFP可提供AAV2/5载体包装所需的全部辅助功能,是一种能简便、高效制备重组AAV2/5病毒的通用性辅助病毒。
- 连忠辉袁振华吴小兵
- 关键词：单纯疱疹病毒腺相关病毒辅助病毒
- 慢病毒在大鼠胶质瘤细胞基因转导中的应用被引量：3
- 2007年
- 目的应用慢病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因转导大鼠9L胶质瘤细胞。方法构建慢病毒表达质粒pLenti6/V5-TK并以PCR、酶切及测序等方法鉴定。利用ViraPowerTM慢病毒表达系统,将重组质粒与包装混合物(Packaging Mix)共同转染293T细胞生产假病毒颗粒,转染48 h后收集培养上清,用其感染大鼠9L胶质瘤细胞,以抗稻瘟菌素(BSD)筛选出9L-TK细胞。RT-PCR、Western blot方法检测TK基因在9L-TK细胞中的表达。用MTT方法测试更昔洛韦(GCV)对体外培养的9L-TK细胞杀伤效果。结果构建的重组质粒pLenti6/V5-TK经PCR、酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达2.7×105转导单位(TU)/ml。经BDS筛选获得的9L-TK细胞RT-PCR及Western blot结果显示TK基因表达阳性,且GCV对该细胞作用敏感。结论成功利用慢病毒实现了TK基因转导大鼠9L胶质瘤细胞。
- 林健戴学军王伟民袁振华王红梅何新舟刘茜曹晖蒋立新
- 关键词：慢病毒载体质粒单纯疱疹病毒胸苷激酶基因神经胶质瘤
- 质粒DNA的发酵条件及纯化工艺研究
- 在摇瓶实验的基础上,在7L 发酵罐中实现了工程菌 E．coli DH1OB 的高密度发酵,单位湿重的质粒产量可达到 img/g 发酵液．细胞经碱性裂解后,先后采用凝胶过滤和亲和层析纯化,质粒 DNA 的超螺旋含量达到90...
- 刘娟李璐王宏伟
- 关键词：高密度发酵纯化
- 文献传递
- 重组仙台病毒载体的纯化方法
- 本发明提供了一种重组仙台病毒的纯化方法，其过程是将收集的病毒初始液与来源于动物的红细胞在低温下混合一定的时间，然后在低温条件下低速离心，收集沉淀；沉淀再用洗液洗涤，洗涤后的沉淀在37℃温浴一定的时间，然后在室温条件下低速...
- 许允立
- 文献传递
- 一种具有抗肿瘤活性的新型溶瘤腺病毒
- SG600-P53是一种新型溶瘤腺病毒,该病毒具有三重调控,其 Ela 的 CR2区域部分缺失,Ela 和 Elb 基因分别被人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子和缺氧反应元件(HRE)控制,另外该病毒携带 p53 基因...
- 曹晖苏长青谭淑萍陈颖钱其军
- 关键词：腺病毒溶瘤基因治疗
- 文献传递
- 表达胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA腺相关病毒载体的构建和高滴度病毒制备
- 2007年
- 目的:构建一个表达胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA的重组腺相关病毒载体,制备能靶向性抑制GCRG213表达的重组腺相关病毒.方法:将构建好并经验证的包含胃癌相关基因GCRG213特异性小干扰RNA片段GCRG213-RNAi-2的IMG800-GCRG213i-2质粒用Bam H I+Bg/Ⅱ双酶切,回收410 bp左右目的片段,将pSNAV2.0质粒用BamH I单酶切后同目的片段连接,经酶切和测序鉴定后,用新建质粒脂质体转染BHK-21细胞,G418筛选后大规模培养,再用辅助病毒HSV1-rc/△UL2感染,获取病毒.结果:成功构建包含U6启动子和胃癌相关基因GCRG213特异性RNA干扰片段的重组腺相关病毒载体,并制备出滴度为5×10^(12)vector genome/L高滴度腺相关病毒.结论:载体的构建为进一步研究GCRG213的体内功能打下了基础,也将为更多的基因干预和基因的功能研究提供有效的工具.
- 徐世平吴本俨王孟薇高利利伍银桥蒋立新王卫华尤纬缔
- 关键词：胃癌腺相关病毒SIRNA基因转染
- 一种重组腺相关病毒载体感染滴度的测定方法
- 本发明提出了一种新的AAV2感染滴度检测方法，采用一株携带AAV2的rep－cap基因的重组HSV1病毒(HSV1－rc)作为辅助病毒，HSV1－rc和待测滴度的AAV2载体样品共同感染BHK－21细胞(也可以是其它HS...
- 曹晖王宏伟谭淑萍蒋立新
- 文献传递
- 重组腺相关病毒(rAAV)载体核心技术及应用
- 吴小兵伍志坚董小岩侯云德彭建强曹晖谭淑萍高金华彭忞
- 该项目申报成果的内容是重组腺相关病毒载体（AAV）核心技术的研究开发及应用。该项目的前期工作基础是中国预防医学科学院病毒学研究所严子颖、吴小兵博士等受863项目支持研究开发出来的科研成果。该成果在发展过程中先后获得卫生部...
- 关键词：
- 关键词：腺相关病毒基因治疗基因载体
- 从荷兰进口植物中检出南芥菜花叶病毒被引量：4
- 2007年
- 马新颖汪琳任鲁风高文娜周琦
- 关键词：南芥菜花叶病毒植物病毒人类免疫缺陷病毒基因芯片技术呼吸系统综合征芯片检测
