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上海柯莱逊生物技术有限公司: 作品数：37 被引量：98H指数：5; 相关作者：杨雪晶张月更多>>; 相关机构：重庆市肿瘤研究所辽宁省人民医院中国医科大学更多>>; 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目浦东新区科技发展基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学更多>>

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肝癌干细胞的培养、鉴定及CIK对其生长、增殖的影响被引量：2: 2015年; 目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)对肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)生长、增殖的影响。方法:用含多种细胞因子(LIF、EGF、b FGF及B27)的无血清培养液(serum-free medium,SFM)诱导SMMC7721人肝癌细胞产生LCSCs,并行LCSCs表面标志CD133、CD90的流式仪(flow cytometry,FCM)检测鉴定与裸鼠致瘤能力观测。以IFN-γ、CD3单克隆抗体(human CD3 monoclonal antibody,h CD3m Ab)与IL-2等诱导肝癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)的悬浮细胞生成CIK。用Transwell培养小室将LCSCs与不同密度的CIK在同一培养体系内以该小室膜分隔培养24、48、72 h,采用CCK-8试剂盒检测CIK对LCSCs生长、增殖的影响。以RT-PCR与Western blot分别检测与CIK共培养的LCSCs的增殖细胞核抗原(proliferating cell unclear antigen,PCNA)基因及其编码蛋白的表达变化。结果:FCM检测显示,LCSCs高表达干细胞表面标志分子CD133、CD90。CCK-8法检测表明,与对照比较,与相同密度的CIK共培养的LCSCs,其生长、增殖减慢,48 h开始变得更加明显(P<0.01)。RT-PCR、Western blot检测显示,CIK能明显下调LCSCs的PCNA基因及其编码蛋白的表达。结论:成功诱导培养并鉴定到LCSCs。肝癌患者的CIK可明显抑制LCSCs的生长、增殖与下调其PCNA基因及其编码蛋白的表达。; 杨涛王宏宇石洋李启英黄德鸿肖春燕龚奕王刚项颖; 关键词：肝癌干细胞增殖

一种用Bac-to-Bac系统表达TAT-凋亡素融合蛋白的方法: 本发明涉及一种TAT-凋亡素融合蛋白的方法，具体涉及一种用Bac-to-Bac系统表达TAT-凋亡素融合蛋白的方法。TAT-凋亡素基因亚克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTb的多克隆位...; 张俊红陆玲玲叶永清苏国新; 文献传递

紫杉醇对人树突状细胞的生物活性的影响被引量：4: 2013年; 目的探讨常用化疗药物紫杉醇(TAX)对人树突状细胞(DC)生物活性的影响及作用机制,为化疗联合生物免疫治疗抗肿瘤提供理论基础。方法体外实验:分别在紫杉醇5 ng/mL(b组)、10 ng/mL(c组)、20 ng/mL(d组)、40 ng/mL(e组)的浓度下及不加紫杉醇的条件下(a组)培养DC细胞,检测各组DC细胞的存活率、细胞成熟标志物及细胞因子分泌量,探究紫杉醇对人树突状细胞生物活性的影响,同时通过乳酸脱氢酶释放法(LDH)测定与紫杉醇处理的树突细胞共培养的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对肺癌A549细胞株的杀伤作用,测定紫杉醇对树突细胞抗原呈递作用的影响。体内实验:采用人肺癌细胞株A549的肿瘤组织块,皮下接种于裸鼠腋下,建立裸鼠肺癌模型。2 d后将30只裸鼠随机分成5组,分别为A组(对照组):细胞株A549+盐水(NS);B组:细胞株A549+DC+CIK;C组:细胞株A549+CIK+TAX;D组:细胞株A549+TAX;E组:细胞株A549+TAX+DC+CIK。每3天检测1次肿瘤大小、裸鼠存活时间。结果体外实验:在共培养6 d的前提下,b、c组第6天存活率与第0天存活率比较,差异无统计学意义(P>0.05),d、e组第6天存活率与第0天存活率比较,差异有高度统计学意义(P<0.01),e组存活率仅为17.5%。c组和e组CD86、CD40、MHCⅡ的表达以及IL-12的分泌与正常组相比有显著增加(P<0.05),d组除了CD86,其他检测指标较正常组差异均有统计学意义,b组中只有MHCⅡ较正常组差异有统计学意义,经10 ng/mL紫杉醇处理的细胞在效靶比5:1和10:1的情况下,杀伤效果明显高于未经紫杉醇处理的细胞。其中紫杉醇处理组的细胞在效靶比为10:1的情况下,杀伤活性已经到达(91.37±5.24)%。体内实验:B、C、D、E组的平均存活时间分别为33.0、34.0、31.8、41.8 d,明显高于对照A组(23.8 d)(P<0.05)。E组平均存活时间大于41.8 d,明显高于B、C、D组(P<0.01),其中E组中,45 d仍有3只存活,D组在前25 d体现出较好的治疗效果; 杨琨董武荣阳赵艳敏高笑天汪明张月刘瑞雪; 关键词：紫杉醇人树突状细胞生物活性肺癌

一种GM-CSF-TAT-CEA重组蛋白及其方法和应用: 本发明涉及一种重组蛋白及其方法和应用，具体为一种GM-CSF-TAT-CEA重组蛋白及其方法和应用，其氨基酸序列表如SEQ ID NO：1所示，制备时，将GM-CSF、TAT和CEA通过酶切克隆到质粒pET-15b的克隆...; 叶永清张超苏国新; 文献传递

一种淋巴细胞培养基及其使用方法: 本发明属于体外细胞培养技术领域，涉及一种淋巴细胞培养基，该淋巴细胞培养基包括基础培养基以及血清替代物，所述血清替代物包括重组人血白蛋白、重组人转铁蛋白以及重组人胰岛素，用以解决现有淋巴细胞培养基大多采用动物或人的血清及其...; 张赞苏国新; 文献传递

一种用于扩增CIK的方法及一种CIK细胞制剂: 本发明属于免疫细胞体外培养领域，涉及一种用于扩增CIK的方法以及一种CIK细胞制剂，具体采用如下程序：a、应用淋巴细胞分离液分离出PBMC，将培养袋预先用CD3mAb和CD137mAb包被，将分离得到的PBMC用无血清培...; 张赞苏国新; 文献传递

CIK细胞分泌因子对肝癌干细胞凋亡的影响被引量：1: 2015年; 目的:探讨细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞的分泌因子对人肝癌干细胞(hepatic cancer stem cells,HCSCs)凋亡的影响。方法:采用无血清悬浮细胞培养法富集人肝癌细胞Hep G2获得HCSCs;用FCM法检测HCSCs表面标志物CD90及CD133的表达情况;通过对裸鼠致瘤能力的观察,鉴定HCSCs的致瘤性。以干扰素γ(interferonγ,IFNγ)、CD3单克隆抗体和重组人白细胞介素-2(recombinant human interleukin-2,rh IL-2)诱导肝癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)产生CIK细胞。采用Transwell小室将不同细胞密度的CIK细胞与HCSCs接种在同一培养体系内,分隔培养24与48h后,用FCM法检测HCSCs的凋亡情况。分别采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法和蛋白质印迹法检测凋亡相关基因caspase-3 m RNA与蛋白表达的变化。结果:富集培养获得的HCSCs表面高表达干细胞标志物CD90和CD133。裸鼠致瘤能力观察表明,该HCSCs具较强的致瘤性。凋亡检测结果提示,CIK细胞的分泌因子可诱导HCSCs的凋亡,与对照组相比,凋亡率差异有统计学意义(P<0.01)。对caspase-3 m RNA与蛋白的检测结果显示,CIK细胞的分泌因子可上调HCSCs中促凋亡相关基因m RNA及蛋白的表达。结论:CIK细胞的分泌因子可诱导HCSCs发生凋亡,这可能与上调其促凋亡相关基因caspase-3的表达有关。; 杨涛张曼张文军王国碧黄德鸿唐显军王宏宇王刚王莉肖春燕杨建中项颖李启英; 关键词：肝细胞杀伤细胞细胞凋亡

激光共聚焦显微镜在肿瘤免疫治疗检测中的应用被引量：1: 2017年; 目的:通过激光共聚焦显微镜对肿瘤生物治疗后患者的外周血淋巴细胞进行亚群计数,为生物治疗后外周血淋巴细胞无法分群的肿瘤患者提供新的监测免疫功能状态的方法。方法:收集35例肿瘤生物治疗后患者的外周血标本,通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪两种方法分别对患者外周血淋巴细胞亚群进行分类计数。结果:流式细胞仪和激光共聚焦显微镜同时分类计数的患者外周血细胞标本30例,两种方法在检测CD3、CD3^+/CD4^+、CD3^+/CD8^+、CD3-/CD16^+56^+、CD3-/CD19^+细胞时均无统计学差异(P值>0.05);5例流式细胞仪无法将患者外周血淋巴细胞分群的样本,通过激光共聚焦显微镜可以进行分类计数。结论:激光共聚焦显微镜亦可以用于外周血淋巴细胞的分类计数。; 李秀丽平家奇薛丽刘洋赵彩凤姜晓峰; 关键词：激光共聚焦显微镜

一种体外扩增γδT细胞的方法: 本发明涉及γδT细胞培养方法，具体涉及一种体外扩增γδT细胞的方法，该方法的操作步骤如下：抗TCRγδ抗体和CD28McAb预先包被T75培养瓶，备用。分离患者外周血单个核细胞（PBMC），用含5%自体血浆的无血清培养基...; 解尚云叶永清谭令兵; 文献传递

一种AFP重组蛋白和体外重组表达的方法: 本发明涉及AFP重组蛋白和体外重组表达的方法，具体涉及一种人工信号肽-AFP-609aa-6his的重组蛋白和哺乳动物瞬时表达系统体外重组表达方法，其蛋白质序列如SEQ ID NO:1所示，a.将重组蛋白基因通过双酶切克...; 陆玲玲苏国新叶永清; 文献传递

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